摘要：目的制备黄热病病毒寡核苷酸检测芯片。方法根据黄热病病毒基因组序列,并应用生物信息学软件设计出22条寡核苷酸探针用于制备基因芯片。克隆于质粒上的黄热病病毒全长基因经限制性显示技术完成扩增并标记,杂交清洗后对芯片进行扫描和数据分析。结果大部分黄热病病毒寡核苷酸探针检测出阳性信号,阴性对照和空白对照检出阴性信号。结论基因芯片技术为黄热病病毒检测提供了一种早期、快速、可靠的方法。

摘要：目的建立糖尿病动物模型,研究CD59基因点突变与大鼠2型糖尿病的相关性。方法将Wistar大鼠随机分为正常组、双高饮食组和模型组。采用链尿佐菌素(STZ)制备糖尿病模型,设计MRCD59寡核苷酸探针(MRCD59X38 C39 W40 K41 H42 X43 X44 C45 X46),与大鼠肝、肾、胰组织进行原位杂交,以检测大鼠CD59基因点突变。同时采用免疫组化(SABC)法检测正常CD59在大鼠组织中表达情况。结果成功建立2型糖尿病大鼠模型。寡核苷酸探针及SABC证实双高饮食组及模型组大鼠组织正常CD59表达降低,而突变的RCD59增高,与正常组比较(P<0.01)有显著差异。结论RCD59基因突变与糖尿病密切相关。

摘要：应用杂交保护检测(Hybridization Protection Assay,HPA)技术研究建立检测补体C3 mRNA方法。选择牙鲆Paralichthys olivaceus补体C3 mRNA(Genebank accession ***021653)设计为长度24个碱基寡核苷酸片断的AE标记寡核苷酸探针(位置=2327-2350,5 CGG GAG TTG TTTG#TG GGTTGA CAC 3),寡核苷酸探针合成过程中在#位加入烷基胺连接臂连接AE。人工合成与探针互补的标准靶寡核苷酸(5 GTGTCA ACC CAC AAA CAA CTC CCG 3)。AE标记寡核苷酸探针活性为6×104RLU/pmol。杂交时间为50 min时,在1×10-3~4×102pmol/mL探针浓度范围内,AE标记探针浓度与发光值之间具有良好的线性关系(R2=0.9996);标准靶寡核苷酸标准曲线说明,在标准靶寡核苷酸浓度为0~320 pmol/mL(含量为0~3200 fmol)时,具有良好的线性关系(R2=0.9922)。

摘要：目的探讨荧光原位杂交技术（FISH）检测曲霉菌感染的可行性和特异性,以期早期病原学诊断临床真菌感染。方法采用地高辛末端标记的18S-1寡核苷酸探针与27例经HE及PAS染色诊断为可疑真菌感染的石蜡包埋组织切片进行FISH检测。结果 HE及PAS染色可疑真菌感染分别为23例和27例。27例可疑真菌感染标本14例检出FISH阳性信号。结果 FISH可以特异性地检测出组织石蜡切片中的曲霉菌,设计不同菌属探针进行靶DNA杂交可以快速检测各种临床标本中的真菌感染,从而作为IFI早期病原学诊断的一种新策略。

摘要：目的研究运用压电石英晶体生物传感器对产气荚膜梭菌α毒素(CPα)进行检测的方法和反应条件。方法按照碱基配对的原则,设计特异的产气荚膜梭菌α毒素基因寡核苷酸探针并利用巯基自组装技术固定在石英晶体上,运用压电石英晶体生物传感器的"质量效应"对聚合酶链反应(PCR)扩增得到的产气荚膜梭菌α毒素靶基因进行杂交检测,并探讨不同pH值和不同离子强度的缓冲液对检测的影响。结果压电石英晶体生物传感器成功检测出产气荚膜梭菌α毒素;pH7.6的缓冲液和0.64mol/L的NaCl溶液最适合于检测。结论压电石英晶体生物传感器能够有效地检测产气荚膜梭菌α毒素,有望对临床上开展毒素诊断提供一种新的手段。

摘要：本研究是用直接测序技术测定了奶牛SRY的DNA序列,在此基础上设计和合成了牛类SRY特异引物并通过聚合酶链反应(PCR)直接扩增牛胚胎的SRY特异DNA序列,对胚胎进行性别鉴定并移植成功。 研究方法是:由牛静脉血中的白细胞提取DNA,经扩增后直接测定DNA的序列,在此基础上,设计并合成了两对特异于牛SRY序列的PCR扩增引物A、B和C、D。对32头奶牛的白细胞DNA及17枚胚胎(全胚、二分胚、三分胚)的SRY序列进行PCR扩增。实验结果表明,32头奶牛的白细胞DNA 样品,其中有12头公牛样品均显示清晰的特异扩增带,20头母牛样品和空白对照样品均无特异扩增带。17枚奶牛胚胎用引物A、B“一次扩增”结果,有10枚胚胎出现清晰的特异扩增带,另7枚胚胎无特异扩增带,其中2枚三分胚共6个样品,其结果完全一致。用引物C、D进行“二次扩增”的10枚显示特异扩增带的胚胎均显示出另一条清晰的特异扩增带,而另外7枚未显带的样品亦均无特异的扩增带。为验证扩增的SRY序列,特设计了特异于牛SRY的ASO探针(寡核苷酸探针)进行点杂交。结果表明,凡有特异扩增带的均出现阳性杂交结果;相反,无特异扩增带的PCR产物均为阴性杂交结果,证明 扩增的为SRY特异DNA片段。经过性别鉴定的牛二分胚,已有4枚胚胎移植成功。其结果均与胚胎性别鉴定结果相符合。

摘要：目的:建立检测牙本质磷蛋白(DPP)mRNA表达的原位杂交方法。方法:选用发育各阶段的牙胚、牙齿和体外培养的MDPC-23成牙本质细胞为对象,采用地高辛标记的寡核苷酸探针的原位杂交方法。结果:DPP mRNA在牙胚与牙齿中的成牙本质细胞、前成釉细胞和体外培养的成牙本质细胞存在阳性表达。结论:设计的探针敏感性高,特异性高,所建立的原位杂交方法是研究牙本质发育和损伤修复的良好方法。

摘要：目的建立一次实验就能检测出同一样品中的多个病原细菌的基因芯片。方法检索相关细菌的16 s rRNA序列,使用生物信息学软件针对每个细菌的四个可变区设计出4条寡核苷酸探针并制成基因芯片;利用此芯片对6种临床常见病原细菌进行检测。结果6种临床常见病原细菌的检测结果中除铜绿假单胞菌两条探针较弱外,其余5种均能正确与自己的探针杂交,并且混合样品检测结果达到了预期的目标。结论利用寡核苷酸芯片系统实现病原菌通用检测是完全可行的,对部分实验菌株进行初步考核,具有理想的特异性和灵敏度,可以进一步用于临床标本的检测。

摘要：本研究根据细菌16S rDNA基因的特点，设计了一套保守的通用引物，并针对每种细菌各设计了两条特异性探针，建立了膜芯片技术平行检测病原菌DNA的方法。

摘要：B群链球菌（group B streptococcus，GBS）是新生儿严重感染性疾病致病菌之一。上世纪90年代以来。在发达国家，GBS感染是围生儿间接死因的第一位。而发展中国家。GBS的感染正在上升。GBS为苛养菌，常规条件下对其鉴定仍需较长时间，不利于临床针对高危因素产妇早期进行抗生素预防。本研究通过荧光原位杂交技术，针对16SrRNA基因设计种属特异性的寡核苷酸探针，探针的5’端标记荧光素，可快速检测鉴定孕妇生殖道中的B群链球菌。现将本方法报道如下。