摘要：目的建立藏药小檗皮BerberisCortex及藏成药中小檗皮特异性DNA的超快速荧光可视化检测方法,实现对小檗皮药材及藏成药中小檗皮的快速鉴别。方法将小檗皮及其混淆品的ITS2序列进行比对,筛选出小檗皮药材特异性DNA序列;针对该序列设计小檗皮特异性引物,建立小檗皮药材以及藏成药中小檗皮特异性DNA的超快速VPCR扩增体系;后将该扩增体系与SYBR Green I荧光染料相结合,实现对扩增产物的荧光可视化检测;同时对该体系的特异性、灵敏度以及在真实样本中的适用性进行考察。结果该体系可以在40min内完成对小檗皮以及藏成药中小檗皮特异性DNA的扩增及荧光可视化检测;检测限低至10pg/μL;对16个批次的小檗皮药材进行分析,其中15个批次的样本产生阳性信号鉴定为小檗皮,与测序结果100%一致,1个批次的样本产生阴性信号,该样本经通用引物测序鉴定为黄柏;对3种含有小檗皮的藏成药进行分析,3个样本均产生阳性信号。结论所建方法缩短了检测时间,并且特异性良好,灵敏度高,可以对小檗皮及其藏成药中小檗皮进行快速、准确的可视化鉴别。

摘要：目的:观察小檗皮浸膏对基因突变自然发病型db/db糖尿病小鼠视网膜蛋白激酶C-β(PKC-β),缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响,探索该药防治糖尿病视网膜病变的作用机制。方法:选用18周龄db/db糖尿病小鼠,db/m型同性同窝瘦型小鼠为对照。采用随机方法将db/db小鼠分为db/db组,小檗皮高、中、低剂量组(1.50,0.75,0.38 g·kg^(-1)),羟苯磺酸钙组(0.23 g·kg^(-1)),盐酸小檗碱组(0.135 g·kg^(-1))。相关药物连续ig 2个月,并于ig 2个月末处死小鼠。采用免疫组化方法观察3种因子在视网膜结构的表达情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测视网膜内3种因子的基因与蛋白表达。结果:与db/m组比较,db/db组视网膜组织PKC-β,VEGF免疫组化反应呈阳性,表达显著增加(P<0.01);HIF-1α免疫组化反应呈阳性,表达量有升高趋势,但差异无统计学意义;db/db组三种因子的基因与蛋白表达显著增加(P<0.01)。与db/db组比较,羟苯磺酸钙组视网膜组织PKC-β免疫组化反应呈阳性,表达显著降低(P<0.05),小檗皮高剂量组视网膜组织PKC-β免疫组化反应呈阳性,表达显著降低(P<0.01),其他各给药组较db/db组PKC-β表达有降低趋势,但差异无统计学意义;各给药组视网膜组织HIF-1α免疫组化反应呈阳性,表达有降低趋势,但差异无统计学意义;小檗碱组、小檗皮低剂量组视网膜组织VEGF免疫组化反应呈阳性,表达明显降低(P<0.01),其他各给药组视网膜组织VEGF有降低趋势,但差异无统计学意义。与db/db组比较,羟苯磺酸钙组HIF-1α基因表达明显降低(P<0.05),其他各给药组PKC-β,HIF-1α,VEGF基因表达有降低趋势,但差异无统计学意义。与db/db组比较,羟苯磺酸钙组、盐酸小檗碱组、小檗皮高、低剂量组PKC-β蛋白表达显著降低(P<0.01),小檗皮中剂量组PKC-β蛋白表达有降低趋势,但差异无统计学意义;羟苯磺酸钙组、盐酸小檗碱组、小檗皮高、中剂量组HIF-1α蛋白表达显著降低(P<0.01),小檗皮低剂量组HIF-1α蛋白表达量有降低趋势,但差异无统计学意义;各给药组VEGF蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:小檗皮浸膏防治db/db糖尿病小鼠视网膜病变的作用机制可能与抑制PKC-β,HIF-1α,VEGF表达有关。

摘要：目的:优化小檗皮的醇提工艺。方法:以小檗皮中木兰花碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱含量和浸膏量为评价指标,采用均匀设计-综合评分法考察乙醇用量、乙醇体积分数、提取时间对提取工艺的影响;采用3次均匀设计试验分别对第1次、第2次、第3次的提取工艺进行考察,分别确定3次提取试验各自的优化工艺并进行验证试验,计算转移率。结果:最优工艺为取小檗皮粗粉加入15倍量75%乙醇,回流提取2次,每次提取120 min。验证试验中,小檗皮按优化工艺提取2次后木兰花碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量分别为58.96、4.82、3.07、23.29 mg/g,转移率分别为93.85%、95.02%、96.28%、94.88%(RSD分别为3.87%、2.64%、4.00%、3.91%,n=3)。结论:优化的小檗皮乙醇回流提取工艺合理、可行,稳定性好。

摘要：目的优化藏药小檗皮的煎煮法提取工艺。方法采用综合评分法和均匀设计法,以浸膏量、总生物碱含量为指标,对藏药小檗皮的煎煮法提取工艺参数进行优化。结果藏药小檗皮的煎煮法提取工艺优化条件为:取小檗皮饮片,加水6倍量,煎煮4次,每次1 h,其中第一次加水后浸泡4 h。结论建立的藏药小檗皮的提取工艺稳定、可行,可用于藏医临床制备小檗皮膏。

摘要：目的:探讨藏药小檗皮对糖尿病大鼠视网膜蛋白激酶C(PKC-β)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和低氧诱导因子(HIF-1α)的影响。方法:SD大鼠采用链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔内注射的方法造模,随机分为模型组、小檗皮低剂量、中剂量和高剂量组、二甲双胍组、羟苯磺酸钙组、小檗碱组和对照组。成模后开始灌胃给药,小檗皮低剂量组、中剂量组、高剂量组分别按成人剂量的5、10、20倍给药,二甲双胍组和小檗碱组按成人剂量的10倍给药,模型组和对照组予灌服蒸馏水。所有实验大鼠于灌胃6周后处死。采用实时荧光定量PCR和Western Blot检测视网膜PKC-β、VEGF和HIF-1α表达,采用免疫组织化学法检测视网膜HIF-1α蛋白表达。结果:与正常组比较,糖尿病大鼠视网膜中PKC-β、VEGF、HIF-1αmRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,小檗皮高、中剂量组视网膜PKC-β、VEGF和HIF-1αmRNA表达显著降低(P<0.01),PKC-β、VEGF和HIF-1α蛋白表达水平明显降低(P<0.05),小檗皮低剂量组大鼠PKC、VEGF和HIF-1α表达明显降低(P<0.05)。结论:小檗皮对糖尿病大鼠视网膜具有保护作用,其作用机制可能与整体多点调控糖尿病大鼠视网膜的PKC-β、VEGF、HIF-1α表达有关。

摘要：糖尿病视网膜病变是导致糖尿病患者失明的主要病因之一,早期防治是关键。糖尿病是藏医药的特色优势病种,藏药小檗皮是藏医治疗糖尿病及眼病的重要药物之一。该研究从藏医药对糖尿病及其视网膜病变(京尼萨库病及其眼病)的理论认识、用药经验中,发掘藏药小檗皮对糖尿病视网膜病变的用途,提出了藏药小檗皮防治糖尿病视网膜病变的研究思路。

摘要：目的:观察藏药小檗皮对糖尿病小鼠模型及正常小鼠血糖的影响,并以血糖为指标确定其治疗糖尿病及其并发症的有效剂量范围。方法:以6.72 ***-1、3.36 ***-1、1.68 ***-1、0.84 ***-1、0.42 g..kg-1剂量的小檗皮浸膏灌胃四氧嘧啶糖尿病小鼠10 d,GOD-CE-PAP法测定小鼠血糖水平,以确定小檗皮的有效降糖剂量范围;6.72 ***-1、1.68 ***-1、0.84 ***-1剂量的小檗皮浸膏灌胃正常小鼠7 d,GOD-CE-PAP法测定小鼠血糖水平,观察小檗皮对正常小鼠血糖的影响。结果:与模型对照组相比,盐酸二甲双胍、盐酸小檗碱、生物碱复配及6.72 ***-1、1.68 ***-1、0.84 ***-1、3.36 ***-1、0.42 ***-1的小檗皮浸膏均有较好的降糖作用,5个剂量的小檗皮浸膏降糖作用依次为:6.72 ***-1>1.68 ***-1>0.84 ***-1>3.36 ***-1>0.42 ***-1;盐酸二甲双胍、羟苯磺酸钙、盐酸小檗碱、复配生物碱及6.72 ***-1、1.68 ***-1、0.84 ***-1剂量的小檗皮浸膏对正常小鼠血糖无明显作用。结论:藏药小檗皮对四氧嘧啶所致糖尿病模型小鼠血糖有明显降糖作用,对正常小鼠血糖无明显作用。

摘要：糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy,DR),是糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)最常见的并发症之一,已经成为DM患者致盲的主要原因之一,患病率随着DM病程的增加而增加,早期防治尤为关键。DM("京尼萨库病")作为藏医药临床治疗的特色优势病种之一,藏医药对DM及DR有着独特的医学认识和丰富的临床实践,从饮食起居到药物治疗提出了较为完善的预防手段和治疗措施。文章论述了藏医药对DM及DR的认识和防治,挖掘藏医古籍文献及临床中治疗糖尿病视网膜病变的常用藏药,特别是综述了现代医学对其中重要的DR治疗药物(小檗皮)研究进展,以期为下一步的DR治疗新药发现提供思路。