摘要：小rna是一类长度约22-28个核苷酸的非编码小分子rna，近年来发现其在转录后水平和翻译水平的基因调控过程中发挥重要作用。上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程，它在生理和病理过程中发挥了重要作用。近年来发现小rna在各种器官纤维化的EMT过程中也起了重要作用。本文就小rna在器官纤维化EMT过程中的作用作一综述，以期为器官纤维化疾病的治疗提供新的思路。

摘要：苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)是危害梨(Pyrus spp.)和苹果(Malus spp.)的重要病毒。本研究采用小rna深度测序技术获得了ASPV基因组的部分序列,在此基础上设计引物对该病毒基因组进行RT-PCR扩增,通过序列拼接得到1个来源于玉露香(Yuluxiang)梨的ASPV分离物(YLX)长度为9 291个核苷酸(nt)(不包括基因组5'末端约30个核苷酸)的基因组序列,该序列与已报道的13个ASPV分离物的基因组核苷酸序列相似性为71.6%~80.7%,与多个来自苹果的ASPV分离物系统进化关系较近。首次分析了来源于ASPV基因组的干扰性小rna(sirna),发现来源于ASPV基因组链和互补链的sirna长度均以21 nt和22 nt为主,sirna的5'端具有一定的碱基偏好性。本研究结果为深入了解ASPV的分子特性提供了重要信息。

摘要：对贵州省六盘水市田间发病小黄姜进行病毒检测,分析小黄姜病毒种类。采用小rna高通量测序技术结合生物信息学方法对小rna数据库进行拼接组装,预测小黄姜病毒种类。设计特异性引物,采用反向PCR及分段克隆测序方法验证小黄姜病毒的存在。检测发现有3条拼接序列与DNA杆状病毒属（Badnavirus）中的薯蓣杆状病毒（Dioscorea bacillifrom virus,DBV）相似,氨基酸相似度均高于80%。并在小黄姜样品中扩增得到1 883 bp病毒序列。RT和rnase H基序核苷酸序列与来自古巴的Banana streak virus（Gen Bank登录号：KF386733）相似性最高,为74%。根据目前的国际病毒分类委员会（the international committee on taxonomy of viruses,ICTV）病毒分类方案,Badnavirus病毒中RT和rnase H核苷酸基序相似度低于80%的可划为不同病毒种,该病毒可能是Badnavirus中的一种新病毒,暂命名为小黄姜杆状病毒（Zingiber bacilliform virus）。小黄姜杆状病毒在30个田间小黄姜样品中存在且存在多态性,该病毒可能是一个古老的病毒,在小黄姜进化过程中将病毒基因组整合到小黄姜基因组中来防御杆状病毒属病毒的侵染。

摘要：[目的]优化滚环转录及定点酶切中关键技术,提高小rna合成量。[方法]通过在引物与模板之间设计不互补部分,形成泡状凸起,引发滚环转录;使用天然DNAzyme 10-23定点剪切转录产物;另外改变rnase H酶切中Aid-DNA修饰核酸数目及位置,指导rnase H切割;DNaseⅠ降解模板DNA后,不经高温失活,直接进入rnase H酶切体系。[结果]由凸起结构引发转录,转录效率提高约5倍;rnase H在仅有3个修饰核酸间隔分布的Aid-DNA-3b辅助下,可高效定点剪切,而DNAzyme 10-23无法充分切割滚环转录产物;未失活的DNaseⅠ对Aid-DNA-3b的降解仅占8.7%,可直接进入rnase H酶切体系。[结论]引入凸起结构可提高转录效率约5倍;DNaseⅠ可直接进入酶切体系,随后使用Aid-DNA-3b介导酶切,产量可提高1.4倍。

摘要：Real—time Quantitative PCR Detecting System，即实时定量核酸扩增检测系统，也称为实时定量基因扩增检测系统，简称定量PCR（qPCR）。荧光定量PCR-般分为非特异性荧光定量PCR和特异性荧光定量PCR。本文主要介绍一种应用非特异性荧光定量PCR（以SYBRGreen I为例）方法对小rna进行定量分析。SYBRGreen I qPCR分析小rna的优点为：实验设计简单，一般需要一条特异性反转录引物，一条特异性正向PCR引物，反向PCR引物可通用于所有小rna分析，无需象TaqMan方法那样专门设计探针；实验成本相对较低；可通过溶解曲线分析来检测扩增反应的特异性。这些特点有利于初学者掌握该技术，而对于一般的分析也可以完全达到实验目的。操作方法如下：

摘要：rna在生命体内执行着重要的生命功能，并具有丰富的结构多样性与复杂性，成为药物研究的新靶点。当前以rna序列特异性为靶点进行药物研究的工作主要有：①以mrna的序列结构为基础，设计反义寡核苷酸药物抑制基因的表达；②以mrna序列及折叠结构为基础，寻找小rna（srna）或干扰rna（rnai）分子，可以调节和关闭基因的表达，进而调控细胞的各种高级生命活动。

摘要：分离提取高质量的rna是基因表达、调控与基因工程等研究的基础,而rnase、多糖及多酚类物质严重干扰rna的分离提取过程.现利用硅藻土对rnase的吸附性,结合PVP、高盐及乙二醇丁醚沉淀等处理,建立了一种广泛适用的rna提取方法.在富含多糖的玉米胚乳,富含rnase的动物肝脏,多酚多油脂的银杏、麻疯树以及木霉、酵母等10多种rna提取困难的动、植物与微生物材料中都提取出完整性好,得率高的***-PCR实验表明,提取的rna能够用于后续的分子生物学研究.硅藻土-苯酚法提取rna的得率是异硫氰酸胍法的3倍多.此外,将分离提取的总rna经过LiCl与PEG8000加NaCl沉淀步骤有效地去除了大片段rna,以水稻Osa-mir-156的成熟序列设计特异引物做茎环RT-PCR,结果证明,富集得到的小rna可以用于mirna克隆等后续实验.

摘要：目的研究连接适配体的DNA-rna分子作为杂交载体靶向肿瘤细胞并导入功能性rna分子进入细胞的有效性,以及对肿瘤细胞的影响。方法设计合成短的互补DNA、rna分子,组装成DNA-rna杂合链;连接AS1411适配体为靶向分子,再分别连接p21 sarna和TIGIT sirna作为药物分子,记为P21 sarna和TIGIT sirna,构成杂交载体,通用结构式为AS1411-DNA/rna-sxrna;检测AS1411-DNA/rna-sxrna能否靶向结合并进入肿瘤细胞及其对瘤细胞生存、迁移、侵袭和凋亡的影响。结果将设计的杂交载体各部分等摩尔加入杂交缓冲体系并于特定温度条件下孵育,TBM聚丙烯酰胺凝胶电泳检测到AS1411-DNA/rna-sxrna成功组装;AS1411-DNA/rna-sxrna杂交载体在10%血清条件下也显示出良好的抗降解稳定性;荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察,SKOV3细胞表面及胞内存在绿色大量荧光信号,杂交载体成功进入肿瘤细胞。杂交载体孵育后:在mrna水平上,p21基因表达(2.14±0.25)是对照组(1.02±0.10)2倍以上,P<0.05;TIGIT基因表达(0.63±0.09)低于对照组(1.09±0.15),P<0.05;在蛋白质水平上,p21基因表达(1.57±0.16)是对照组(1.10±0.09)1.5倍以上,P<0.05;TIGIT基因表达(0.61±0.12)低于对照组(1.01±0.07),P<0.05。CCK-8实验显示,P21sarna(3.10±0.13)和TIGIT sirna(2.91±0.13)杂交载体孵育组与空白对照组(3.67±0.15)相比,卵巢癌细胞增殖能力显著下降(P<0.05);划痕实验结果显示,P21 sarna孵育组愈合率(42.53±2.90)%、TIGIT sirna孵育组愈合率(36.23±3.43)%,明显低于空白对照组(76.47±3.64)%,P<0.05;Transwell检测迁移能力发现:P21 sarna孵育组(128.25±5.36)、TIGITsirna孵育组(119.50±8.79)低于对照组(186.5±8.56);侵袭能力:P21sarna孵育组(145.5±9.45)、TIGITsirna孵育组(112.25±5.63)也显著低于对照组(202.50±10.12),P<0.05;细胞凋亡率:P21sarna孵育组(11.74%±2.47%)、TIGIT sirna孵育组(17.12%±2.04%)明显高于对照组(5.66%±1.44%),P<0.05。结论所制备的AS1411-DNA/rna-sxrna杂交载体能够有效靶向肿瘤细胞,携带功能性小rna靶向导入肿瘤细胞并调控目的基因表达,使肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力受到抑制;该结果为利用DNA-rna偶联AS1411适配体作为靶向工具的杂交载体,靶向杀伤表面表达NCL蛋白的肿瘤细胞提供了实验基础。

摘要：为深入了解鼠伤寒沙门菌srna GcvB与靶基因的结合位点,在此前报道的鼠伤寒沙门菌GcvB调控基因基础上,本试验首先通过对部分显著调控基因进行荧光定量PCR引物的设计与合成,然后利用无痕基因重组技术分别构建鼠伤寒沙门菌gcvB基因R1、R2和R3功能基序缺失菌株,最后通过荧光定量PCR技术检测各基因在鼠伤寒沙门菌野生型菌株、gcvB基因缺失株、gcvB R1基因缺失株、gcvB R2基因缺失株和gcvB R3基因缺失株中对数期转录水平变化。PCR扩增及测序结果显示,gcvB基因R1、R2和R3基序已被分别敲除且未留下冗余序列。荧光定量PCR检测结果显示,fhuA、aphA、STM2714、STM0298和STM1827基因在gcvB、gcvB R1、gcvB R2或gcvB R3单敲除时转录水平均显著下调,STM0276、exbD和sodA基因在gcvB、gcvB R1或gcvB R2单敲除时转录水平均显著下调,trpE和yifK基因则在gcvB或gcvB R3单敲除时转录水平均显著上调。以上结果表明,GcvB正调控fhuA、aphA、STM2714、STM0298和STM1827基因可能与R1、R2或R3基序相关,正调控STM0276、exbD和sodA基因可能与R1或R2基序相关,负调控trpE和yifK基因与R3基序有关。

摘要：近期,受中国热科院环植所邀请,国际生物多样性中心Guy Blomme,Inge Van den Bergh,Nicolas Roux和SijunZheng博士4位专家来中国热科院开展为期一周的学术交流研讨。来访期间,双方对联合主持的国家自然科学基金国际(地区)合作研究项目“小rna调控香蕉-枯萎菌互作的分子机制研究及抗枯育种分子设计”进行了中期总结。