摘要：背景:目前多数芯片采用玻璃片基,以Cy3和Cy5标记,价格高,主要用于科研,但不能在临床上大规模推广应用。课题组采用尼龙膜为载体制作基因芯片,以期获得一种具有高灵敏度和准确性、快速简便、可同时检测多种疾病且成本低的芯片。目的:对以尼龙膜为载体基因芯片的可行性进行检测,同时对所用探针及目的基因的量进行优化。设计、时间及地点:基因工程探针设计,于2005-10/2006-09在兰大科技园百源基因公司实验室完成。材料:甘肃省肿瘤医院2005-10/2006-04切除的新鲜大肠癌标本,取距肿瘤边缘5～10cm以上的正常组织作为对照,病理证实无癌细胞浸润。尼龙膜带正电荷,购自Amersco公司。方法:从液氮中取出冻存的新鲜组织200mg,采用Trizol法提取组织总RNA,并用Oligo dT纤维素层析法纯化mRNA。使用TaKaRa的M-MLV Rtase cDNA synthesis Kit(code D6130)反转录合成cDNA的第1,2链,产物分为两部分,一部分作为模板进行地高辛标记PCR,所得产物作为目的基因,另一部分作为制备探针的模板。对获得的GAPDH,Actin,Cyclin D1三种基因片段PCR产物进行纯化。以带正电荷的尼龙膜为载体,将不同浓度的三种基因片段作为探针点于其上,所得芯片分别与不同浓度的地高辛标记目的基因进行杂交。结果:目的基因取2.5μL,1.25μL时,加入杂交液后因目的基因的浓度太小,造成各点探针密度相对较高,而无法反映出正确的显色趋势。目的基因取5μL时,探针密度为10～20μL情况下3种探针显色深度较恰当的反映了由强到弱的趋势,ACTIN>CyclinD1>GAPDH。目的基因取10μL时,探针取15μL,20μL的量能较为合理的反映由强到弱的趋势。目的基因取20μL时,此时杂交液中目的基因的浓度对于ACTIN和CyclinD1过高,不能明显反映二者着色深浅变化。结论:以尼龙膜为载体的基因芯片本底清晰,合理目的基因用量为5μL,与其相匹配的优化探针用量为10～20μL。

摘要：目的 建立鉴定布鲁杆菌属及种的膜基因芯片技术方法.方法 试验菌株羊种标准株16M,牛种标准株544A,猪种标准株1330S;临床标本羊种81190,牛种80176、104M,猪种80177、19971、19972,共9个样本,均为中国疾病预防控制中心鼠布基地菌种库保存.提取各菌种DNA,进行PCR扩增,并以耶尔森菌O∶9为对照.设计布鲁杆菌鞭毛蛋白基因flhA保守片段中两个位点（379、576）的单个核苷酸多态性探针,在探针中引物入生物素,并将探针固定在膜上,制成膜芯片,与目的片段进行杂交,用生物素显色技术检测目的片段.结果 9个样本的扩增产物长度均为357 bp,与预期结果一致.与布鲁杆菌有相同抗原的耶尔森菌O∶9无特异性PCR产物产生.在鞭毛蛋白基因序列379和576两个核苷酸位点上,猪种为379G和576C,牛种为379T和576T,羊种为379T和576C,与所设计探针序列完全相同.经膜基因芯片实验验证,猪种菌株在379G、576C及F位点（公共探针）显色;牛种菌株在379T、576T及F位点显色;羊种菌株在379T、576C及F位点显色.结论 膜基因芯片可用于布鲁杆菌属和种的鉴定,且是一种优越的鉴定方法.

摘要：目的　研制线性探针分析法检测结核分枝杆菌 (结核菌 )rpoB基因耐药突变试剂盒。方法　设计 15条结核菌rpoB基因野生型和突变型的线性探针 ,固定尼龙膜上 ;在rpoB基因引物上标记生物素 ,扩增结核菌DNA ,获得生物素标记扩增产物 ,与rpoB基因线性探针杂交 ,加入标记过氧化物酶的亲合素 ,再加四甲基联苯胺显色。结果　应用线性探针分析法检测 87株结核菌 ,其与rpoB基因直接测序法、传统药敏法符合率分别为 98 8% (82 / 83)和 94 3% (82 / 87)。结论　线性探针分析法检测rpoB耐药基因突变是一种操作简便、特异性高、敏感性高 ,易开展的方法。

摘要：目的　研制丙型肝炎病毒 (HCV)基因分型的寡核苷酸探针芯片 ,并用此方法对 76例HCVRNA阳性的肝炎患者进行检测。方法　根据HCV 5′ 非编码区和核心抗原区序列设计聚合酶链反应 (PCR)引物和寡核苷酸探针 ,探针经一定修饰后固定到尼龙膜上 ,即成为HCV基因芯片。采用PCR参入法标记地高辛分子 ,其中 6份标本PCR产物同时进行测序分析。结果　此芯片可分析HCV 11个基因型的 15种亚型。 76例HCV肝炎患者芯片杂交结果均阳性 ,而 2 0名健康对照血清均阴性。 76例患者阳性标本的分型结果 :1b型 6 4例 ,2a型 11例 ,3a型 1例 ,未见混合型感染。 6份标本的序列分析表明 ,芯片杂交和测序的分型结果完全一致。结论　此芯片可初步用于检测血清HCVRNA ,并对HCV基因 (亚 )

摘要：讨论了一种新型酶固定化技术 ,这种技术将葡萄氧化酶和过氧化物酶共同固定在同一载体——尼龙 6 6膜上 ,并制备出可检测血糖浓度的试纸 ,用于临床检验 .在固定过程中 ,酶浓度、染料浓度、固定温度、p H值、固定剂、干燥温度等因素的变化均会对固定结果产生影响 ,出现白斑、色块以及冲刷痕等现象 ,影响试纸的检测结果 .通过对固定剂配比的调整和固定程序的设计 。

摘要：目的建立食源性感染常见致病菌的快速检测方法。方法利用带正电荷尼龙膜为芯片载体,合成寡核苷酸探针,点样于载体制成寡核苷酸芯片,对食源性感染常见致病菌23SrDNA基因片段扩增产物进行杂交检测。结果在同一条件下运用设计的通用引物扩增出16种(属)细菌23SrDNA基因片段。大肠埃希菌、沙门菌、志贺菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、变形杆菌、单核细胞增生李斯特菌、蜡样芽孢杆菌、肉毒梭菌和空肠弯曲菌等10种(属)菌杂交结果显示,高灵敏度和特异性;金黄色葡萄球菌、链球菌、小肠结肠炎耶尔森菌和产气荚膜梭菌等4种(属)菌,未能显示预期的种(属)杂交结果;而应用食源性感染模拟标本,检测肺炎链球菌和绿脓假单胞菌两种与食源性感染无关的致病菌未与芯片上探针出现杂交反应,检出水平可达10CFU/ml。结论建立的寡核苷酸芯片技术在食源性感染常见致病菌的检测上快速准确等优点,为食源性感染的诊治与预防提供了有效的技术手段和方法依据。

摘要：目的　建立基于 2 3SrRNA基因的一种常见病原菌菌种鉴定的分子生物学方法。　方法　使用地高辛标记的通用引物扩增常见病原菌的 2 3SrRNA基因 ,并在尼龙膜上固定根据扩增产物序列设计的菌种特异性探针 ,根据反向杂交结果判断病原菌种类。选取临床分离获得的菌株验证该方法的有效性。结果　通用引物可特异性扩增细菌 2 3SrRNA。应用该方法可鉴定金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、绿脓假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克霍尔德菌。检测临床标本结果显示 ,与常规培养方法的符合率为 99%。结论　该方法可用于常见病原菌的鉴定。

摘要：逃生篇美国：人人掌握＂生命安全101＂据统计,＂9·11＂事件发生当天,共有1.3-1.5万人从大楼撤离,堪称现代史上之最。美国消防专家表示,正是由于很多美国人熟练掌握了逃生秘诀——＂生命安全101＂规范,才幸免于难。＂生命安全101＂全称为建筑物、构筑物火灾生命安全保障规范。此规范紧紧围绕生命安全而制定,要求建筑方按规范来设计,而楼内的人员则应懂得如何在火灾中进行安全自救。

摘要：采用带正电的尼龙膜作为片基,利用手动芯片点样仪将鳗弧菌6个毒力基因的寡核苷酸探针点样于膜基底上,然后进行紫外交联,制备膜芯片。制备好的膜芯片与6个毒力基因的带有地高辛标记的PCR产物进行杂交,通过观察杂交信号来判断是否含有该基因。通过对膜芯片点样浓度、杂交时间及洗膜步骤进行优化,确定所设计膜芯片最适杂交时间为30min、点样探针最适浓度50μmol/L、洗膜过程只需要3步,时间缩短了45min。