摘要：目的建立快速、高效、特异的定量水体中尾蚴的数量和检测水体中日本血吸虫尾蚴残余基因组DNA的方法,来评估水体受日本血吸虫尾蚴污染的程度。方法根据日本血吸虫基因组DNA中的3个多拷贝序列Sjrh1.0(序列号:U92488.1)、18S小亚基单位核糖体核酸基因(18SrRNA)序列(序列号:AY157226.1)和逆转录转座子SjR2的G55A序列(G55A)(序列号:AF412221.1),设计常规PCR引物和实时定量PCR引物,选取较好的靶序列建立SYBR GreenI实时定量PCR方法,绘制尾蚴数的对数与Ct值的标准曲线,并对疫水中日本血吸虫尾蚴残余的基因组DNA进行检测。结果尾蚴数的对数与Ct值的标准曲线有良好的线性关系,相关系数r2为0.918 6,重复性良好。结论本方法特异性高,灵敏,可定量水体中尾蚴数,对疫水检测有一定的预警作用。

摘要：目的设计血吸虫尾蚴富集装置,并探讨对疫水中血吸虫尾蚴富集效果。方法根据血吸虫尾蚴的水面静态生活习性及其生理特点,设计一套血吸虫尾蚴的自动富集装置。分析潜水泵功率、富集时间、滤网目数等因素对血吸虫尾蚴富集效果的影响,并通过正交试验筛选尾蚴富集装置的最佳配置。结果在潜水泵功率40瓦、富集5h和滤网目数为400目时,富集装置对疫水中尾蚴的富集效果最好。结论设计的富集装置可以为血吸虫疫情的现场评价提供技术手段。

摘要：目的克隆表达日本血吸虫钙蛋白酶(Sjcalpain),了解Sjcalpain在尾蚴内的分布及其在尾蚴侵染中的作用。方法根据SjCalpain基因全序列(GenBank登录号为AB016726)设计引物,PCR分别扩增Sjcalpain的催化位点区域和Ca2+结合位点区域的基因片段,克隆入pET-28a原核表达载体,并在大肠埃希菌(***)BL21(DE3)中进行原核表达,组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达和纯化情况。纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备兔多克隆抗体,ELISA和蛋白质印迹(Western blotting)分别检测多克隆抗体的效价和特异性。利用免疫荧光定位技术观察Sjcalpain在尾蚴组织中的分布情况。将尾蚴和钙蛋白酶抑制剂孵育后感染小鼠,计算血吸虫减虫率。结果成功构建了Sjcalpain的催化位点/pET-28a和Ca2+结合位点/pET-28a原核表达重组质粒,在*** BL21(DE3)中成功表达目的蛋白,相对分子质量(Mr)约为43 000和39 000,与预期大小一致,且均为包涵体表达。组氨酸标签亲和层析成功纯化得到目的重组蛋白。间接ELISA结果显示,多克隆抗体的效价超过1∶80 000。免疫定位结果显示,Sjcalpain在日本血吸虫尾蚴头部分布较多。尾蚴侵染抑制实验中,钙蛋白酶抑制剂作用组平均获虫19条,对照组平均获虫23条,减虫率为17.4%。结论 Sjcalpain蛋白产物主要分布在日本血吸虫尾蚴的头部;Sjcalpain被抑制后可以减少入侵宿主的尾蚴数量,说明Sjcalpain在尾蚴感染宿主皮肤过程中发挥一定的作用。

摘要：目的:应用LAMP方法对日本血吸虫尾蚴阶段高表达基因簇进行初步检测,为群体的血吸虫早期预警提供参考。方法:选择日本血吸虫尾蚴期高表达基因,利用在线软件Primer Explorer V4设计目的基因引物。纯水室温孵育感染性钉螺,收集尾蚴,并提取尾蚴和钉螺基因组DNA,用LAMP方法检测尾蚴和感染性钉螺期日本血吸虫的基因表达情况。结果:在所选择的16个基因中,CNUS0000102858.1、CNUS0000103598.1、CNUS0000103614.1等8个蛋白编码基因的LAMP检测尾蚴DNA结果为阳性;CNUS0000038.1、CNUS0000102858.1、CNUS0000103614.1等8个蛋白编码基因的LAMP扩增感染性钉螺DNA结果为阳性。其中,LAMP检测尾蚴及感染性钉螺基因组DNA结果均为阳性的基因有CNUS0000102858.1、CNUS0000103598.1、CNUS0000103614.1、CNUS0000105798.1、CNUS0000106268.1、CNUS0000106483.1、CNUS0000107429.1。结论:在16个备选基因中,这7个尾蚴及感染性钉螺基因组DNA检测结果均为阳性的基因,可考虑作为钉螺及疫水样本LAMP检测基因,为日本血吸虫流行病学调查和群体早期预警提供实验数据。

摘要：目的建立一种检测日本血吸虫尾蚴的方法。方法采用环介导等温扩增技术(LAMP):使用基因释放剂快速提取尾蚴基因组DNA,设计4条扩增尾蚴钙结合蛋白基因的LAMP引物,进行LAMP反应,以华支睾吸虫为阴性对照,LAMP产物经显色、电泳鉴定。用细吸管在解剖镜下分别吸取20、10、5、1条尾蚴进行LAMP反应,检测其敏感性。结果尾蚴检测管经显色后呈绿色(阳性),对照组呈棕色(阴性)。尾蚴LAMP产物电泳后呈LAMP特征性梯状条带,对照组无扩增产物。LAMP可检测到尾蚴的最低数量为1条。结论LAMP方法敏感、特异、简便,可用于检测日本血吸虫尾蚴。

摘要：非常高兴黄一心研究员对我们的研究感兴趣,您说得对,确实疫水暴露测量的回顾性调查方法存在一个回忆准确性的问题,我们也一直对这问题进行思考与探索.但是这种回忆偏倚是可以经过合理的研究设计和统计学处理,减少其对研究结果的影响程度,不致于导致错误的结论.