摘要：目的建立一种具有高敏感性、高特异性的百日咳鲍特菌聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法以百日咳鲍特菌插入序列IS481为目的基因,通过Primer5.0软件设计巢式PCR(Nested PCR,nPCR)外引物,并优化扩增条件和程序,结合IS481目的基因的检测方法,建立nPCR结合Real-time PCR(rPCR)检测百日咳鲍特菌的方法,应用于354份流感样病例标本核酸检测和34份临床疑似百日咳病例标本核酸检测。结果该结合检测方法的最低检出限为0.225 copies/μL,能同时检测百日咳鲍特菌和霍氏鲍特菌,其他参考菌株均呈阴性,具有较好的特异性,进一步通过rPCR区分霍氏鲍特菌。采用该结合检测技术,354份流感样病例核酸标本中17份百日咳鲍特菌阳性,34份临床疑似百日咳病例核酸标本中12份百日咳鲍特菌阳性,而单独针对百日咳鲍特菌的rPCR方法分别仅检测出1份和6份阳性,rPCR检出的阳性标本,本方法均可检出。结论基于IS481基因的nPCR结合rPCR方法可用于百日咳鲍特菌的检测,具有较高的敏感性和特异性特点。

摘要：目的用巢式聚合酶链反应(PCR)对A组轮状病毒常见G、P基因型进行检测。方法根据A组轮状病毒不同型别共有的VP4、VP7基因设计的引物分别用于G、P分型的第1次PCR扩增,然后用可以区分不同G型和P型的A组轮状病毒的引物进行第2次PCR扩增。对不同型别A组轮状病毒标准毒株和68例A组轮状病毒腹泻的粪便标本进行了G、P型别的检测。结果不同型别A组轮状病毒标准毒株分别扩增出不同长度片段的条带。68例被检测的A组轮状病毒腹泻粪便标本中G分型以G3为主,P分型以P8为主,其余型别少见。结论巢式PCR检测A组轮状病毒基因型的分型具有较高的灵敏度,操作简便快速,适用于临床检测。

摘要：桉树焦枯病是威胁桉树生长的首要病害,建立准确、有效的桉树焦枯病巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)快速检测技术是桉树焦枯病前期诊断的必要手段。本研究针对柱枝双孢霉(Cylindrocladium scoparium)菌株的β-微管蛋白(beta-tubulin)基因上保守序列极强的靶基因区域序列进行特异性引物BT-S-1/BTA-1的设计和通用引物BT-T1-S/BT-CYLTUBIR-A的合成,分别利用常规PCR和巢式PCR技术对引物特异性和灵敏度进行检测和比较,同时本研究也对所建立的巢式PCR用于桉树焦枯病原菌快速检测的田间时效性进行验证。试验结果表明:利用beta-tubulin基因序列通用引物BT-T1-S/BT-CYLTUBIR-A对全部供试菌株进行扩增,所有参试菌株均可扩增出1条约500bp的条带;而单独使用特异性引物BT-S-1/BT-A-1进行常规PCR扩增时仅病原菌能够扩增出1条148bp的明亮条带;当利用通用引物作为第1轮引物,以稀释10倍后的第1轮PCR产物作为第2轮PCR模板,利用特异性引物进行巢式PCR扩增时,也可扩增出上述148bp大小的明亮条带,且巢式PCR的扩增效果较常规PCR具有明显的视觉优越性;灵敏度检测试验表明,巢式PCR的灵敏度可检测到5fg/μL,较常规PCR可以扩增出的极限(DNA质量浓度为5pg/μL)至少提高了103倍;田间时效检测试验也说明巢式PCR较常规PCR具有更高的准确度和灵敏性,可达到田间检测的要求。本研究建立的巢式PCR检测技术可有效应用于桉树焦枯病的早期诊断。

摘要：目的　建立用于 SEN病毒 (SENV)检测的巢式聚合酶链反应 (n PCR)方法。　方法　选择 SENV各亚型间高度保守的 5′端非编码区 (5′-NCR)序列设计 2对特异性引物 ,建立可同时检测 SENV所有亚型的 n PCR方法。对 1 73份慢性乙型肝炎 (CHB)患者血清和 96份正常人血清进行 SENV检测 ,并随机选择 3份 PCR阳性产物进行克隆测序。　结果　倍比稀释实验表明该方法的终检稀释度为 1 0 3。PCR产物克隆测序结果显示 :各分离株与 Genbank收录的 SENV序列相应区段同源性为 95 %～ 96%。CHB患者 SENV感染率为 86.1 % ,正常人为 85 .1 % ,二者差异无显著性 (χ2 =0 .3 81 ,P=0 .5 3 7)。　结论　该方法敏感、特异且简便经济 ,适于开展

摘要：目的　用改进的乙型肝炎病毒 (HBV)巢式聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)的基因分型方法初探广州地区HBV基因型分布状态。方法　设计巢式PCR扩增前S基因 ,经限制性内切酶AvaⅡ和DpnⅡ酶切鉴别HBVA～G基因型 ;并对 14 0份乙型肝炎患者血清进行基因分型 ,其中随机挑选 3份进行克隆测序 ,并对 2 0份患者血清进行巢式PCR RFLP重复分型试验 ,以验证此分型技术的稳定性和特异性。同时采用PCR和巢式PCR对 92份乙型肝炎病毒e抗原 (HBeAg)阴性血清进行HBVDNA阳性率检测比较。结果　基因分型与测序结果一致 ;基因分型重复试验符合率10 0 % ;92份HBeAg阴性血清经PCR和巢式PCR扩增HBVDNA的阳性率分别为 2 0 7%和 6 8 5 %。14 0份乙型肝炎患者血清中HBV基因型以C型 (94份 )和B型 (4 2份 )为主 ,偶见A型 (4份 )。结论　巢式PCR RFLPHBV基因分型方法具有良好的敏感性、特异性、稳定性 ,且操作简便 ,适用于临床和流行病学调查研究。

摘要：目的:研究建立巢式聚合酶链反应(nPCR)检测SEN病毒D和H亚型的方法,并将其应用到流行病调查。方法:选择SENV开放读码框1(ORFⅠ)核苷酸序列设计合成特异性引物,建立检测SEN病毒D和H型感染的巢式PCR方法,对216例无偿献血者、65例甲肝患者、152例乙肝患者、79例丙肝患者和83例非甲～非戊肝患者进行了SENV感染的检测。结果:该方法特异性和灵敏度均较高,检测结果显示健康献血者、甲肝、乙肝、丙肝和非甲～非戊型肝炎患者SENVD和/或H总感染率分别为29.1%、38.5%、55.3%、54.4%、38.5%。SENV D和/或H在健康献血者中总感染率显著低于乙肝和丙肝患者(P0.05)。结论:巢式PCR方法可用于检测SENV感染。我国部分地区无偿献血和肝炎等患者中存在SENV感染,其致病性有待进一步研究。

摘要：目的建立一种检测血液中伤寒沙门菌的方法。方法根据伤寒沙门菌特异鞭毛基因设计两对引物 ,通过巢式聚合酶链反应 (PCR)扩增伤寒沙门菌DNA片断 ,扩增产物通过凝胶电泳进行分析。结果用伤寒沙门菌DNA系列稀释液进行试验 ,巢式PCR能够检出 10个伤寒沙门菌。 36份培养阳性标本 ,33份PCR阳性 ;6份培养阴性但临床高度可疑的伤寒病人标本PCR阳性 ;10份其它原因引起发热的临床标本均为阴性。结论巢式PCR能够快速、特异、准确地检出血液中的伤寒沙门菌。

摘要：目的:应用能够同时检测恶性疟(***)、间日疟(***)、卵形疟(***)、三日疟(***)及其混合感染的多重巢式PCR方法,对疑似疟疾混合感染样本进行检测,评价其在疟原虫混合感染及分型中的应用价值,旨在为疟疾流行病学调查、疟疾混合感染的确诊提供一种快速高效、特异性强、灵敏度高的实验室诊断方法,为传统的镜检法提供有效的补充。方法:根据恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫和三日疟原虫的18SSU rRNA基因序列设计5对引物(1对通用引物、4对特异性引物),以等比例混合的4种疟原虫核酸为模板,建立疟疾多重巢式PCR检测方法,并应用该法对28份疑似疟疾混合感染样本进行检测及测序验证,将其结果与镜检法比较。结果:28份疑似混合感染样本中混合感染样品数为6例,其中恶性疟和间日疟混合感染样品5例,恶性疟和卵形疟混合感染样品1例。结论:本研究建立的多重巢式PCR检测方法能够同时用于恶性疟、间日疟、卵形疟、三日疟及其混合感染样本的检测,在疟疾混合感染的确诊与分型上较镜检法有明显的优势和更高的应用价值。

摘要：背景由于肺癌患者的死亡率仍在很高水平，开发敏感的检测方法仍是一项迫切的任务。本文作者设计了普通黑素瘤抗原基因(MAGE)引物用以同时检测出MAGE A1-6亚型。这些引物应用于经痰标本检测肺癌。方法这一研究包括了53例癌症患者组和3个非癌症组(193位健康人，

摘要：目的　建立特异敏感的快速检测贝氏柯克斯体的分子生物学方法。方法　采用巢式聚合酶链反应 (PCR)方法 ,进行实验室模拟检测。结果　以贝氏柯克斯体com1基因 (编码 2 70 0 0蛋白 )为靶标设计了 2对引物 ;该引物特异性实验表明仅贝氏柯克斯体特异性片段可以扩增出来 ,其余相关立克次体均扩不出 ;敏感性测试结果可检测出 1.5fg的贝氏柯克斯体DNA ,可检测出 0 .0 0 1个鸡胚半数致死量 (CELD50 )的立克次体 ;以 10 0 0 0个CELD50 立克次体感染小鼠时 ,可于 2 4h在脾脏中检测出贝氏柯克斯体 ,检出率为 83.3% ;对人工模拟的灭菌牛奶、小鼠脏器研磨液、蜱组织研磨液、小鼠血液标本检测发现该法在牛奶和血液标本中的检测敏感性下降 3～ 4个滴度。结论　巢式PCR是快速检验贝氏柯克斯体的敏感特异的方法 ,经过进一步推广应用 ,有望应用于临床检验。