摘要：目的建立检测巨细胞病毒污染的PCR检测方法，并制备检测试剂盒。方法采用TaqMan探针，选择保守序列CMV-pp65设计引物，荧光定量病毒载量；对试剂盒进行敏感性、重复性和特异性等测试；对31份临床阳性血清标本和106份正常献血者血浆标本进行检测，并与国内同类试剂盒进行比较。结果该试剂盒检测线性定量范围可达202～3．6×10^9copies／ml，敏感性为360copies／ml，CV值在1％左右，特异性高，临床标本检测的符合率为100％。本试剂盒与国内已上市试剂盒比较，具有较好的相关性、更高的敏感性和更宽的定量检测范围。结论制备的试剂盒特异性和敏感性均较高，适用于临床上的病毒检测。

摘要：目的传统的检测CMVpp65抗原的方法是间接免疫荧光,操作麻烦,步骤较多,整个实验需要6个多小时,而且只能定性。需要寻找一种简便的可以定量的方法来检测CMVpp65抗原阳性细胞。因此我们设计了流式的方法来检测CMVpp65抗原阳性细胞。方法我们用间接免疫荧光试剂盒中的一抗和购自invitrogen公司的二抗进行了流式标记移植病人外周血中的WBC,操作步骤明显简便了,只需不到2 h就可完成检测,而且可以定量检测CMVpp65抗原阳性细胞。同时我们用荧光定量PCR检测病人尿中的CMV基因的拷贝数。结果流式检测阳性率高的标本,用间接免疫荧光方法检测也为阳性,同时流式检测强阳性的病人尿用荧光定量PCR检测到CMV基因,表明病人处于CMV病毒血症。结论我们用间接免疫荧光试剂盒中的一抗和购自invitrogen公司的二抗进行流式标记,成功检测了移植病人的CMVpp65抗原阳性细胞的百分比,新方法可以定量,与荧光定量PCR方法检测病人尿中的CMV基因的结果符合率较高,可以推广应用。

摘要：目的建立快速简便的逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）即刻早期（ＩＥ）基因ｍＲＮＡ。方法设计合成跨越ＨＣＭＶＩＥ基因内含子区的一对引物，分别用ＲＴＰＣＲ和ＰＣＲ技术扩增ＨＣＭＶｍＲＮＡ和ＤＮＡ，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定阳性产物。结果ＨＣＭＶＩＥ基因ｍＲＮＡ表达在感染后６小时即可出现，并持续到感染后至少９６小时，ＲＴＰＣＲ检测的最低敏感性为１００ｆｇ总ＲＮＡ，其他病毒和细胞ＲＮＡ不能被扩增。结论ＲＴＰＣＲ技术检测ＨＣＭＶｍＲＮＡ敏感、特异。

摘要：自巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＡＤ１６９株感染细胞中提取的ＤＮＡ，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，在自行设计及合成的两对特异性引物引导下，成功地扩增出口ＣＭＶ即刻早期（ＩＥ）及晚期（Ｌ）基因片段，摸索了最佳Ｔａｑ酶、Ｍｇ￣（２＋）浓度及退火温度的反应条件，并建立了同一体系中同时检测ＨＣＭＶＩＥ及Ｌ基因片段的方法。初步应用该方法检测了１２例肾移植患者尿标本及１０例动脉粥样硬化标本中ＨＣＭＶＩＥ及Ｌ基因，结果ＩＥ阳性率分别为８％及２０％，Ｌ基因阳性率为３３％及５０％，未见有假阳性及假阴性结果的出现，表明该方法具有较好的特异性及灵敏度，可广泛地应用于临床ＨＣＭＶ的诊断。

摘要：为了应用聚合酶链反应同时检测人巨细胞病毒 (CMV)、人乳头瘤病毒 (HPV)、沙眼衣原体 (CT) ,参照文献报道的基因序列 ,设计合成了三对能扩增 370bp、45 0bp、5 10bp基因片段的引物 ,并对PCR扩增条件进行了优化。 0 1fgHPV DNA、CMV DNA、CT DNA即可被检出 ,得到了与设计片段相同的产物 ,且不扩增大肠杆菌、白色念珠菌、解尿支原体等病原的核酸。对 395例标本进行检查 ,各病原体的检出率分别是 :HPV19 2 %、CMV14 9%、CT5 1%。其中混合感染 42例。PCR同时检测CMV、HPV、CT经济、快速、敏感、特异 ,可用于临床诊断和实验研究。

摘要：背景：造血祖细胞被人巨细胞病毒（HCMV）感染后增殖和分化能力受到抑制是否与受染细胞增殖的基因异常表达有关联？目的：观察经人类巨细胞病毒感染的人类造血干祖细胞向粒-巨噬系、红系祖细胞增殖过程中HOXB6mRNA表达。设计：观察对比实验。单位：泸州医学院附属医院分子生物学实验室。材料：所有脐血标本由泸州医学院附属医院产科提供，取自正常足月顺产新生儿断脐后的胎盘段脐血。所有新生儿母亲HBSAg阴性，常规ELISA检测抗HCMV—IgM及PCR检测HCMV—DNA均为阴性，且对本实验知情同意，实验经过医院伦理委员会批准。HCMV—AD169株由中国预防医学科学院病毒研究所提供。全反式维甲酸（ATRA）为重庆华邦制药股份有限公司产品，批号为20010126。方法：实验于2006-04／2007—04在泸州医学院附属医院分子生物学实验室完成。分离脐血单个核细胞，进行造血祖细胞培养。根据实验干预方式不同将细胞分为4组：①对照组：与HCMV组等量的IMDM培养液进行细胞培养。②HCMV组：HCMV-AD169滴度为105pfu，以0．1mL感染培养体系。③ATRA组：在培养体系分组中加入12μL ATRA，终浓度为60μmol／L。④HCMV＋ATRA组：在HCMV感染组中加入ATRA，终浓度同ATRA组。主要观察指标：分别于培养后3，7，12天收获各组细胞，采用实时荧光定量PCR技术分别检测脐血粒-巨噬系祖细胞和脐血红系祖细胞HOXB6mRNA表达水平。结果：①对照组红系祖细胞和粒-巨噬系祖细胞均表达HOXB6-mRNA，随着时间推移，表达水平增加，其中，脐血红系祖细胞表达HOXB6-mRNA于第12天达高峰，脐血粒-巨噬系祖细胞HOXB6-mRNA于第7天达高峰。②HCMV组脐血粒巨噬系祖细胞、红系祖细胞感染人巨细胞病毒后各时间点HOXB6基因表达均低于对照组，差异有显著性意义（P〈0．05）。③ATRA组各时间点脐血粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞HOXB6-mRNA表达均高于对照组，差异有显著性意义（P〈0．05）。④HCMV＋ATRA组各时间点红系祖细胞及粒-巨噬系祖细胞的HOXB6-mRNA表达均高于人巨细胞病毒组，差异有显著性意义（P〈0．05～0．01）。结论：①人类造血干祖细胞向粒单系和红系祖细胞增殖分化过程中，HOXB6-mRNA呈现持续稳定的表达。②人巨细胞病毒能使HOXB6基因表达下调。③ATRA能上调HoXB6基因的表达。

摘要：在利用建立的聚合酶链反应（PCR）技术测定尿中人巨细胞病毒（HCMV）的方法中,自行设计并合成了两对HCMV的DNA引物。经实验证明,这两对引物是HCMV特异和保守的顺序,对正常人基因组DNA和其它疱疹病毒无交叉反应。本方法可测出少至1015g（1 fg）的病毒DNA。对47例疑为HCMV感染患儿的检测结果和病毒分离法测定结果相比较,其中31例两者皆为阳性;12例皆为阴性,4例本方法狲定阳性,病毒分离法为阴性,但同时测定血清HCMV-1gM呈阳性反应,支持本方法的结果。以上结果表明,本方法的特异性和敏感性都不低于病毒分离法,并具有操作简便、反应周期短、对长期保存并已消失感染性的样品也有效等优点,适于临床推广。

摘要：目的　建立套式 聚合酶链反应 (Nested PCR)加限制性酶切分析方法检测人巨细胞病毒 (HCMV)。方法　在HCMV直接早期蛋白EcoRIJDNA片段内 ,自行设计两对引物 ,建立Nested PCR检测HCMVDNA ,同时结合病毒分离检测临床标本。结果　 2 3例新生儿肝炎综合征患儿中 ,10例病毒分离及Nested PCR均阳性 ;1例病毒分离阴性 ,但Nested PCR阳性。对 5 8例妊娠早期孕妇血标本进行检测 ,Nested PCR阳性率为 9% ,病毒分离阳性率则为 7%。结论　Nested

摘要：目的　应用自行研制的压电基因传感器检测巨细胞病毒临床标本的PCR产物 ,探讨压电传感器检测核酸反应的可行性以及各种影响因素。方法　设计特异性DNA探针巯基法固定于传感器晶振表面并调节谐振频率在液相中稳定性达到± 1Hz ,定量加入 65份巨细胞病毒临床标本的PCR产物并观察核酸反应导致的频率变化情况 ,并与PCR产物的电泳结果作对照。结果　加入HCMVPCR阳性产物的传感器谐振频率明显下降 ,3 8例阳性产物的平均频率下降值为73 66Hz ,阴性产物的频率没有变化。与PCR电泳结果的阳性符合率为 86 8%,阴性符合率为 93 10 %。

摘要：目的:探讨黄蓝颗粒体外抗巨细胞病毒(HCMV)、风疹病毒(RuV)活性及其作用机制。方法:根据病毒复制周期,设计3种药物抗病毒作用方式来观察黄蓝颗粒对HCMV、RuV的作用。通过观察细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率,以确定该药物体外抗HCMV、RuV的活性。结果:黄蓝颗粒既不能阻断病毒吸附,亦不能直接杀灭病毒,而是通过抑制病毒生物合成发挥抗病毒活性。黄蓝颗粒对HEL细胞的半数毒性浓度(TC50)为1.71g·L-1,对HCMV半数抑制质量浓度(IC50)为0.09g·L-1,治疗指数(TI)为19.0;黄蓝颗粒对Vero细胞的TC50为1.96g·L-1,对RuV的IC50为0.10g·L-1,TI为19.6。结论:黄蓝颗粒通过抑制病毒生物合成机制发挥抗HCMV、RuV的作用。