摘要：目的建立载体法筛选人巨细胞病毒（HCMV）截短UL54基因（UL54S）小干扰RNA（siRNA）靶位的体系。方法利用质粒pAVU6±27设计并构建2个小发夹RNA（shRNA）表达载体（psiUL54-1和psiUL54-2），与融合蛋白表达载体pUL54S-绿色荧光蛋白（EGFP）共转染AD293细胞，荧光显微镜观察融合蛋白荧光表达，RT-PCR法分析UL54SmRNA水平变化，流式细胞仪评价siRNA对融合蛋白的抑制作用，采用方差分析对流式细胞检测结果进行统计分析，筛选出有效的siRNA作用靶位。结果shRNA表达载体psiUL54—2与融合蛋白表达载体pUL54S-EGFP共转染AD293细胞48h后，pUL54S-EGFP、psiUL54-2共转染组EGFP表达量较pUL54S-EGFP、pAVU6±27共转染组下降；凝胶分析显示，psiUL54—2与pUL54S-EGFP共转染48h后，UL54S mRNA相对表达量为19．6，明显低于pUL54S-EGFP、psiUL54—1共转染组的96．6与对照组的100．0；psiUL54—1、pUL54S—EGFP共转染48h后对融合蛋白UL54S-EGFP表达无影响（P〉0．05），但psiUL54—2、pUL54S-EGFP共转染抑制融合蛋白UL54S—EGFP的表达（19．43×10^4±2．29×10^4比27．89×10^4±5．50×10^4，P＜O．01）。结论成功建立载体法筛选HCMV截短UL54S siRNA靶位体系，UL54S序列中1532～1550位点是有效的siRNA靶位点。

摘要：采用实时TaqMan技术快速定量检测血清中的人巨细胞病毒(HCMV)感染,在HCMV保守性的Ma jorIE基因区段设计了一对引物和一条Taqman探针,在LightCycler及Rotor Gene定量检测仪上检测HCMVDNA.试验证明,两种仪器定量结果具有一致性,以PCR模板浓度来定义,敏感度达到1.0×102拷贝/μL,线性范围为1.0×102～1.0×108拷贝/μL.应用该方法与ELISA法对40例临床婴幼儿患者血清同时进行HCMV检测,结果显示TaqMan法与ELISA法相关性不高,前者更适于HCMV感染早期的定量检测,提示该法可应用于孕妇及新生儿HCMV筛查,并有助于疗效监测和评估.

摘要：背景:巨细胞病毒活动性感染,尤其是巨细胞病毒肺炎死亡率极高,并易合并细菌、真菌、原虫等感染,直接影响患者的长期存活。因此,寻找一种早期、敏感的巨细胞病毒检测方法显得特别重要。目的:探讨酶联免疫吸附法、免疫组织化学法及流式细胞仪检测在自体外周血造血干细胞移植后巨细胞病毒感染的早期诊断价值。设计、时间及地点:对比观察,病例来自2002/2005南方医科大学南方医院。对象:选择行自体外周血CD34+细胞移植的系统性红斑狼疮(16例)和天疱疮(3例)患者19例,其中男5例,女14例,年龄11~38岁。所有受试者均无糖尿病、哮喘、荨麻疹、湿疹、炎症性肠病和其他风湿病。方法:分别于移植前、移植后3,6,12,24个月进行外周血采集。主要观察指标:应用酶联免疫吸附法、免疫组织化学法及流式细胞仪检测19例接受自体外周血造血干细胞移植患者移植前、移植后3,6,12,24个月时的抗巨细胞病毒抗体及巨细胞病毒抗原。结果:19例患者均进入结果分析。血清学检测显示,全部标本抗巨细胞病毒IgG全部阳性,阳性率100%。抗巨细胞病毒IgM阳性3例,阳性率3.2%。免疫组织化学法检测巨细胞病毒抗原阳性14例,阳性率14.7%。流式细胞仪检测巨细胞病毒抗原阳性13例,阳性率13.7%。4种检测巨细胞病毒感染方法的阳性率存在显著差异(χ2=261.929,P<0.01)。结论:自体外周血造血干细胞移植后存在不同程度的巨细胞病毒感染,临床上开展流式细胞仪检测巨细胞病毒感染具有重要意义。

摘要：目的:应用多重PCR技术鉴定体外培养、分离获得的人巨细胞病毒(HCMV)临床病毒株。方法:以先天性感染HCMV的新生儿为研究对象,采集尿液标本进行病毒分离,将分离获得的临床低传代病毒感染HELF细胞,提取病毒DNA,针对较保守基因IE和LA,设计两对引物,同时扩增IE和LA基因,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析。结果:成功分离获得2株HCMV临床低传代病毒株(D2、D3),经多重PCR同时扩增出209bp(IE)和401bp(LA)目的片段。结论:多重PCR可以作为病毒分离后,基础研究中鉴定HCMV临床病毒株的一种方法。

摘要：目的分析获得性免疫缺陷综合征（艾滋病）患者发生巨细胞病毒性视网膜炎及免疫恢复性葡萄膜炎的疾病特征。设计回顾性病例系列。研究对象北京佑安医院眼科诊治的艾滋病合并巨细胞病毒性视网膜炎患者32例。方法对上述患者进行与艾滋病相关的免疫学检测；并进行视力、眼压、眼前节检查、彩色眼底照相及荧光素眼底血管造影等眼科检查，并观察其临床特征。主要指标视力、眼压、眼底、CD4＋T细胞计数。结果32例患者的视力为光感。1．0；眼压8-16mmHg；眼前节检查8例患者（4例为免疫恢复性葡萄膜炎）可见眼前节反应阳性（前房闪辉及角膜后KP）；32例患者彩色眼底像均可见典型巨细胞病毒性视网膜炎眼底改变；8例（25％）CD4＋T细胞〈10个／μL，视力为光感～0．8，其中3例发生免疫恢复性葡萄膜炎，1例发生视网膜脱离；15例（46．88％）CD4＋T细胞在10—50个μL，视力为眼前指数-1．0，其中1例发生免疫恢复性葡萄膜炎，1例发生视网膜脱离；9例（28．12％）CD4＋T细胞〉50个／μL，无患者发生免疫恢复性葡萄膜炎及视网膜脱离。19例患者（含4例免疫恢复性葡萄膜炎患者）合并其他全身机会性感染。结论CD4＋T细胞〈50个／乩的患者更易患巨细胞病毒性视网膜炎，其视力预后差；CD4＋T细胞〈10个／μL的患者更易发生免疫恢复性葡萄膜炎，且眼前节反应明显，更易合并其他全身机会性感染。

摘要：背景 病毒激活输血研究(VATS)为确定是否输血,尤其是在输外源性白细胞、可能激活CMV血清学阳性的HIV感染者体内的CMV复制提供了研究的机会。同时还可以判断这类病人是否因为输血导致另外的CMV毒株的交叉感染。研究设计和方法 选择了共531病人随机接受少白细胞(WBCR)或非少白细胞(NWBCR)的红细胞输血。

摘要：目的　探讨巢式PCR(NestPCR)检测器官移植术后受体人巨细胞病毒 (HCMV)DNA ,并与传统ELISA法作方法学对照。方法　巢式PCR针对HCMVAD16 9株IEA基因设计内外两对引物 ,对 5 9例肝、肾移植术后受体 (肝移植 2 7例、肾移植 32例 )血、尿标本进行HCMVDNA检测。分离血清作ELISA检测IgG、IgM。 结果　血液NestPCR阳性率肝移植 6 2 9% ,肾移植4 6 8% ;ELISA法阳性率 :IgG35 5 % ,IgM2 7 1% ,IgG +IgM18 6 % ,IgM阳性标本 (16例 )DNA检测皆为阳性 ,6例IgG、IgM皆阴性标本DNA检测仍为阳性。结论　巢式PCR是一种敏感特异、简便快速诊断HCMV感染的方法 ,灵敏度及特异性高于传统ELISA ,能弥补ELISA的假阴性 。

摘要：背景防止CMV经输血传播最有效的方法是使用血清反应阴性供血者的血制品。供血者的CMV筛查通常是建立在检测取自CMV实验室提取的AD169抗原的检出。近来有迹象表明大约高达20％的CMV阴性供血者实际上经PCR分析为CMV-DNA阳性。研究设计及方法在本研究中，作者检测了CMV血清反应阴性血清。

摘要：在人巨细胞病毒(HCMV)高度保守区IEA基因内设计一对引物,建立了聚合酶链反应(PCR)检测HCMV DNA的方法,经实验证明有高度的特异性和敏感性,对其它疱疹病毒和正常人DNA无交叉反应,HCMV AD169株DNA EcoRI酶切J片段的最小检出量为0.1fg,相当于6个基因拷贝。对PCR反应体系中的有关实验条件如Mg^(2+)浓度、引物浓度、Taq DNA多聚酶的浓度、循环程序等及尿标本的处理方法进行优化选择。用PGR检测20例肾移植受者尿标本中HCMV DNA,结果11例(55％)阳性。表明PGR是一种快速、特异、敏感的检测方法,适用于肾移植等病人的HGMV感染监测。

摘要：Objective: To determine the relationship between the virus burden in infancy a nd hearing loss in congenital CMV infection. Study design: A cohort of 76 infant s with congenital cytomegalovirus (CMV) infection identified by means of newborn virologic screening was monitored for outcome. The amount of infectious CMV was analyzed in urine specimens obtained during early infancy. Peripheral blood (PB ) samples obtained during early infancy were available from 75 children and CMV DNA was quantitated with a real-time quantitative polymerase chain reaction. Re sults: Infants with clinical abnormalities at birth (symptomatic congenital CMV infection) had higher amounts of CMV in urine (P =. 005) and CMV DNA in PB (P =. 001) than infants with no symptoms. Eight children with and 4 children without symptoms had hearing loss. Among children without symptoms, those with hearing l oss had a significantly greater amount of CMV in urine (P =. 03) and PB virus bu rden (P =. 02) during infancy than those with normal hearing. Infants with < 5 ×103 pfu/mL of urine CMV and infants with < 1 ×104 copies/mL of viral DNA in P B were at a lower risk for hearing loss. Conclusion: In children with asymptomat ic congenital CMV infection, hearing loss was associated with increased amounts of urine CMV and PB CMV DNA during early infancy.