摘要：差异显示技术是分离差异表达基因的重要方法与手段,同其他研究基因差异表达的方法如 RDA, SSH,SAGE相比,差异显示技术是其中使用频率较高的方法。该技术自 1992 年创立以来,经过各国研究者不断完善与改进,现已大大克服了以往诸多不足,扩大了应用领域。文中就差异显示技术的原理及主要优缺点作以简要概述,并着重就引物设计、降低假阳性、鉴定差异表达基因及差异显示技术的衍生技术这 4 个方面的研究进展作一详尽介绍。

摘要：基因表达的变化是调控细胞生命活动过程的核心机制,分析不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下基因的表达状况,可以为研究生命活动过程提供重要信息。mRNA差异显示技术(differentialdisplay,DD)是目前应用比较广泛的在mRNA水平上检测基因表达的方法之一。本文介绍了mRNA差异显示技术原理及其优缺点,对包括引物设计改进、反应条件的优化、差异条带显示方法改进和降低假阳性策略等在内的技术改进进行了概述,对mRNA差异显示技术在动物生理学和病理学、动物胚胎、个体发育、动物遗传育种、动物营养研究中的应用作了概括介绍。

摘要：基因分离可以从蛋白质水平、DNA水平及mRNA水平来进行操作。差异显示反转录聚合酶链式反应是目前使用频率最高的用于克隆未知基因的方法。本文从其本原理出发 ,概述了其优缺点 ,并从引物设计、反转录酶与Taq聚合酶、阳性克隆、应用、差显的衍生等诸方面就差显的研究进展作了综述。

摘要：目的 筛查冠心病血瘀证相关基因。方法 从临床入手,选择符合冠心病诊断和血瘀证辨证标准的患者,设计对照组,择用3个锚定4个随机引物,进行外周血mRNA差异显示,运用差异显示扫描系统扫描电泳胶图。结果 48条泳道中相同引物不同分组间出现了100余条差异条带。结论 mRNA差异显示是筛查冠心病血瘀证病证结合相关基因差异条带的可行方法之一。

摘要：mRNA差异显示技术自1992年建立以来,成为分子生物学领域的一个研究热点,并在许多领域得到了广泛应用。本文综述了mRNA差异显示技术的基本原理,其存在的问题及近几年该技术的改进、完善与发展。如引物设计、PCR参数优化、假阳性克服c、DNA片段克隆测序及完整基因的筛选。此外,对其在植物抗寒基因研究中的应用作了简要介绍。

摘要：目的　建立荧光 m RNA差异显示方法 ,优化实验条件 ,为分离克隆基因差异表达片段奠定基础。方法　提取总 RNA,筛选随机引物和荧光锚定引物各 1条进行差异显示 ,割取差异条带进行重扩增。结果　总 RNA经DNase 处理后 ,展示条带减少明显 ,以未经处理为好 ;提高反转录的温度有利于长片段 c DNA的合成 ;荧光标记锚定引物、长引物设计和采用高分辨率的电泳系统有利于最大限度的减少 DD- PCR中的假阳性率偏高的问题。结论　 DD- PCR方法简便、灵敏、高效 ,完全适用于一般性的基因差异表达研究。

摘要：目的　筛选经辐射诱导后小鼠肠上皮细胞的差异或特异表达基因。方法　通过基因库检索和计算机分析 ,设计出较通用的 5’端武断引物在基因库中其呈现几率要高出数倍到数十倍的 4条 5′端高同源mRNA差示引物 ,应用DDRT PCR ,测序凝胶电泳 ,放射自显影 ,分子杂交等方法 ,分析并筛选小鼠受 12Gyγ射线全身照射后 3h(R1组 )和 96h(R2组 )肠上皮细胞差异或特异表达基因。结果　 5′端高同源性引物mRNA差异结果显示 ,与正常比较 ,小鼠全身 12Gy照射后不同时相的肠上皮细胞基因表达存在差异 ,从近 80 0 0条PCR扩增产物中 ,比较筛选出 12个差异表达基因片段。RNA blot杂交对 11个辐射损伤情况下差异表达基因片段进行了鉴定。R1S1和R1S2差异基因片段在辐射损伤后 3h的肠上皮细胞中呈特异性表达 ;R2S2和R2S5基因片段在辐射损伤后 96h的肠上皮细胞中呈特异性表达 ;R2S1、R2S6和R2S8基因片段是假阳性差异表达基因片段 ;而R2S1、R2S4及R2S8用RNA blot法检测不到表达。序列分析结果显示R1S1和R2S2在基因库中未见高同源的基因序列 ,与R1S1同源性最高 (60 0 0 % )的是一个源于大鼠输卵管特异性糖蛋白基因 ,R2S5与一种小鼠肌细胞钙离子信号传导分子有 67 2 1%的同源性 ;R2S2高度同源于鼠源性肿瘤诱导蛋白p3 2 (91 5 2 % )

摘要：以小麦幼芽为材料,采用mRNA差异显示方法和银染技术,对经过用16%(-0.5 MPa)PEG-6000溶液处理不同时间而诱导表达的小麦基因进行分离,共得到cDNA差异片段16条。其中4条差异条带呈表达减弱,其余差异条带均呈表达增强。测序结果与GenBank数据库比对,2个cDNA片段与已知基因同源,WSI241与编码胚后期丰富蛋白的Em基因同源性达100%,WSI208与ARA-1 mRNA同源性达88%。大部分都是功能未知的EST序列。其中WSI483(454 bp)与小麦干旱胁迫幼苗cDNA同源性达100%;WSI232与小麦干旱胁迫叶cDNA同源性达100%。WSI301与小麦盐胁迫芽鞘cDNA同源性达98%,WSI267与小麦热胁迫旗叶cDNA同源性达93%,WSI289与小麦ABA处理胚cDNA同源性达92%,WSI268与镰刀菌感染的小麦穗同源cDNA同源性达97%。经反向Northern验证,有6个cDNA呈阳性。可用探针或设计引物作进一步研究。

摘要：根据不同发育阶段 ( 1 3,33周 )的人胎脑组织mRNA差异显示分析 (又称DDRT PCR)所得到的具有差异表达的EST的序列 ,设计引物筛选点阵排列的人胎脑cDNA文库 ,得到一个新的全长cDNA克隆 .这个克隆全长 1 2 0 8bp ,包含一个 889bp的开放阅读框 ,一个 1 32bp的 5′非翻译序列和一个 2 0 9bp的 3′非翻译序列以及典型的polyA加尾信号 .其推断的氨基酸序列与人硫氧化还原蛋白同源 ,而且含有硫氧化还原蛋白的保守的活性位点序列 .将它命名为人的类硫氧化还原蛋白基因 (humanthioredoxinlikegene ,hTRXL) .

摘要：mRNA差异显示技术自 1992年建立以来 ,成为分子生物学领域的一个研究热点 ,并在许多领域得到了较为广泛的应用。阐述了mRNA差异显示技术的基本原理 ,综述了其现存的问题及近几年该技术的改进、完善与发展。如引物设计、PCR参数优化、假阳性克服、cDNA片段克隆测序及完整基因的筛选。此外 。