摘要：焦磷酸测序（Pyrosequecing）技术为近年新一代短片段DNA序列分析技术。国外主要用于分子流行病学的单个核苷酸多态性位点大容量快速检测和临床微生物菌种鉴定与分型，但国内尚未开展。本研究刚该技术对针对不同细菌的独特分子标志，设计基于PCR技术的快速菌种鉴定方法，以提供从分子水平快速鉴定菌种的新的可靠方法。

摘要：目的:构建针对21种常见致病菌的快速诊断用芯片。方法:针对细菌的高度保守区域设计特异探针,优化条件下与细菌的PCR扩增产物进行杂交。结果:得到特异的杂交结果。结论:芯片方法可用于快速鉴别不同种类的细菌,该方法简便可行,优于传统诊断方法。

摘要：目的建立食源性感染常见致病菌的快速检测方法。方法利用带正电荷尼龙膜为芯片载体,合成寡核苷酸探针,点样于载体制成寡核苷酸芯片,对食源性感染常见致病菌23SrDNA基因片段扩增产物进行杂交检测。结果在同一条件下运用设计的通用引物扩增出16种(属)细菌23SrDNA基因片段。大肠埃希菌、沙门菌、志贺菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、变形杆菌、单核细胞增生李斯特菌、蜡样芽孢杆菌、肉毒梭菌和空肠弯曲菌等10种(属)菌杂交结果显示,高灵敏度和特异性;金黄色葡萄球菌、链球菌、小肠结肠炎耶尔森菌和产气荚膜梭菌等4种(属)菌,未能显示预期的种(属)杂交结果;而应用食源性感染模拟标本,检测肺炎链球菌和绿脓假单胞菌两种与食源性感染无关的致病菌未与芯片上探针出现杂交反应,检出水平可达10CFU/ml。结论建立的寡核苷酸芯片技术在食源性感染常见致病菌的检测上快速准确等优点,为食源性感染的诊治与预防提供了有效的技术手段和方法依据。

摘要：在临床诊疗过程当中,生物学测验的结果能够为医生提供大量的病痛诊疗依据以及病痛医治方案设计的参考资料。然而临床上常见的微生物标本测验并不是单纯检测以及结果分析那么简单,它所包含的内容非常丰富。只是从标本测验中以及测验结果进行分析就有多种类型,本文在进行分析的过程当中,主要列举了几种常见的致病菌标本来进行分析,具体报道如下。

摘要：目的基于DPO引物在多重PCR检测中的优点,构建一种六重DPO-PCR方法用于检测食品及食源性疾病样本中常见的6种致病菌。方法以霍乱弧菌的vcc、志贺菌的ipa H、单增李斯特菌的iap、副溶血性弧菌的gyr B、金黄色葡萄球菌的nuc以及沙门菌的omp C为靶基因,设计6对DPO引物,经过反应体系优化,建立了六重DPO-PCR方法。结果六重PCR反应体系内部DPO引物之间干扰小;扩增后除靶基因外的其他15种细菌DNA无扩增条带出现;对6种致病菌的最低检出限分别为:霍乱弧菌,220 cfu/ml;志贺菌,150 cfu/ml;单增李斯特菌,190 cfu/ml;副溶血性弧菌,190 cfu/ml;金黄色葡萄球菌,700 cfu/ml;沙门菌,960 cfu/ml。结论用DPO引物构建的六重PCR方法具有特异性强,退火温度范围宽,引物之间干扰小,电泳图谱背景清晰,可以达到一管6检的目的,为食品及食源性疾病样本快速准确检测提供了一种新的高通量的快速检测方法。

摘要：目的　采用反相斑点杂交技术检测下呼吸道感染常见致病菌。方法　分别采用细菌 16SrDNA通用引物和特异探针检测法及各细菌特异蛋白对应特异基因设计特异探针检测法 ,利用反相斑点杂交和基因芯片的基本原理 ,针对临床 10 0份社区获得性肺炎、15 0份医院获得性肺炎、5 0份非肺炎患者痰标本进行检测 ,并与传统的细菌培养法进行比较。结果　两种基因诊断的方法灵敏度和特异性均优于传统的细菌培养法 ,而第二种基因诊断方法的特异性优于第一种。结论　反相杂交技术对致病菌的诊断准确可靠 ,经济快速 。

摘要：目的　探讨应用PCR RFLP和PCR SSCP进行食源性感染常见致病菌鉴定的可行性。方法　选择细菌 2 3SrDNA基因作为靶基因 ,设计合适的通用引物进行PCR扩增 ,对 13种食源性感染常见致病菌扩增产物的酶切片段进行RFLP和SSCP分析。结果　通用引物可以扩增出 13种食源性感染常见致病菌的 2 3SrDNA基因 ,HpaⅡ酶切产物的RFLP分析表明 ,不同种属的致病菌表现出不同的RFLP图谱 ;SSCP分析表明 ,13种食源性感染常见致病菌SSCP图谱变异性更大 ,不利于种属间鉴别 ,但有利于种内的鉴定。结论　运用PCR RFLP和PCR

摘要：目的　研究建立快速检测细菌DNA的方法。方法　设计一对共同引物 ,应用聚合酶链反应 (PCR)法 ,扩增细菌核糖体 2 3S亚单位基因 2 3SrDNA。对 2 3种临床常见致病菌、培养物及临床病例标本采用该方法进行检测 ,并与常规细菌培养法比较。结果　该方法可检测细菌下限为 2 5CFU ,与真菌、乙肝病毒等无交叉反应。对纯菌及培养物均可检出一条明显DNA条带 ,革兰阴性细菌约 35 0bp ,革兰阳性细菌约 4 0 0bp。临床标本 2 3SrDNA检出率明显高于常规培养方法 (P <0 0 1)。结论　应用所设计的共同引物 ,检测细菌 2 3SrDNA ,敏感性和特异性好 ,比常规培养法快速、准确。

摘要：目的建立单核细胞增生李斯特菌PCR鉴定技术。方法选择Hly、Inl基因设计扩展片段分别为300～400bp、600～700bp的二对特异性引物,进行PCR扩增。结果单增李斯特菌标准菌株及本实验室分离保存的单增李斯特菌均扩增出两条明显条带,其它食品中常见致病菌及非单核细胞增生李斯特菌均不见扩增条带。52株李斯特菌生化符合菌中,有30株菌同时扩增出两条明显条带,与MiniVIDSA测定法比较,两者符合率达9231%。结论本实验建立的PCR鉴定技术为一种简便、快速、敏感、特异的单增李斯特菌鉴定方法。