摘要：目的:针对幽门螺杆菌与定植和致病相关的6种蛋白设计作用位点较为全面的多表位疫苗,将其构建到复制缺陷型腺病毒穿梭载体中并分析其表达情况,为后续包装腺病毒并通过动物实验验证疫苗的有效性奠定实验基础。方法:使用IEDB数据库查找和预测幽门螺杆菌UreB、OipA、HomB、HopQ、VacA和CagA的B细胞表位,采用在线工具VaxiJen v2.0、AllerTOP v2.0和AllergenFP v1.0对6种表位与接头KK随机串联得到的720组合进行抗原性和过敏原性分析,选出优势表位组合,将优势表位组合与具有黏膜佐剂活性的NSP4C融合并加Flag标签便于后续检测,综合考虑融合蛋白的抗原性、可溶性和理化性质,评选出最优疫苗蛋白,将其构建到复制缺陷型腺病毒穿梭载体中,通过转染HEK-293T细胞和Western blot实验分析其表达情况。结果:通过对表位组合的抗原性分析找到3个评分>1.0的表位组合,即优势表位组合,三者均无过敏原性。将优势表位组合、NSP4C和Flag随机组合后,选出最优疫苗蛋白NSP4C-Dec663。将NSP4C-Dec663编码序列连入pShuttle-CMV载体中,重组质粒转染HEK-293T细胞进行目的蛋白表达,Western blot结果表明NSP4C-Dec663成功表达。结论:本研究针对幽门螺杆菌设计了多表位疫苗NSP4C-Dec663,其能在HEK-293T细胞中表达,这为后续包装复制缺陷型腺病毒和进行动物实验奠定了基础。

摘要：目的:合成胃癌相关幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)的CagA基因片段,建立原核表达系统,鉴定重组表达产物的抗原性。方法:选取前期研究确定的与胃癌相关的*** CagA基因片段,优化设计并合成CagA基因,将合成的CagA基因从pUC57-CagA质粒中切出,用表达载体pET32a携带该基因转化宿主菌BL21(DE3),通过氨苄青霉素抗性筛选和菌落PCR挑选出阳性克隆pET32a-Ca-gA;以IPTG诱导含pET32a-CagA的宿主菌表达融合蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳分析CagA蛋白表达情况,用Western印迹鉴定融合蛋白的抗原性。结果:设计并人工合成了CagA基因片段,序列测定结果显示,合成的CagA基因序列与设计的序列(AF289435)基本一致;成功构建pET32a-CagA原核表达质粒,对应蛋白序列与AAG09884同源性为100%;含pET32a-CagA的BL21(DE3)宿主菌经IPTG诱导后能表达CagA融合蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳分析结果表明,融合蛋白相对分子质量大小与预期一致(45 kD);Western印迹检测结果显示该融合蛋白可与抗***全菌抗体结合反应。结论:本实验构建的原核表达系统表达的CagA融合蛋白具有良好的抗原性,为临床胃癌相关***菌株的筛选和针对性治疗奠定了基础。

摘要：幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,***)是一种定植于胃内,具有螺旋状结构的微需氧革兰阴性菌,1982年被首次发现,可以导致胃炎、消化性溃疡以及胃癌等疾病的发生。目前,幽门螺杆菌已经感染全球近半数人口,且随着抗生素的大量应用,幽门螺杆菌的耐药问题也愈发严重,亟需能够克服幽门螺杆菌耐药性的新治疗药物。这也促进了大量针对幽门螺杆菌治疗药物的开发,其中已进入临床在研阶段的药物包括以合成抗菌药为主的化学药物和以疫苗、益生菌为主的生物药物。本文简述了幽门螺杆菌的致病机制和治疗现状,对已上市和临床在研的幽门螺杆菌治疗药物进行了总结和评述,以期为后续的幽门螺杆菌治疗药物开发提供思路。

摘要：目的建立幽门螺杆菌(Hp)数字PCR检测体系,为Hp诊断提供一个精准、灵敏的定量检测方法。方法根据Hp 16S rRNA序列设计特异性引物和探针,采用质控菌进行特异性检验;以梯度稀释的DNA为模板,评估检测灵敏度;采用不同浓度的模板进行多重复检测,评估检测精密度;以梯度法设置引物浓度和退火温度,对数字PCR反应条件进行优化。结果所设计的引物和探针可特异性地检测Hp 16S rRNA基因,不受大肠杆菌等细菌干扰;该方法的最佳反应温度为57.1℃,最佳引物浓度为550 nmol/L;该体系的检测限为0.35 copies/μL,检测变异系数CV<10%,浓度梯度线性分析的拟合度R^(2)=0.9968。结论本研究建立的Hp数字PCR检测体系,具有特异、灵敏和精密度高的特点。

摘要：目的　探索幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,简称Hp)vacA基因 (vacuolatingcytotoxingeneA)的变异性及其与产生空泡毒素活性的关系。方法　用自行设计的两两配对的 4条引物对 1 7株Hp的vacA基因进行PCR扩增。结果　每株细菌均可扩增出包括vacA基因不同区域的 4条产物 ,但每种产物在不同菌株间长度有差异 ;对产毒株与非产毒株的扩增产物长度比较 ,未发现与产毒有关的区域。结论　HpvacA基因的变异性相当大 ,变异部位不仅仅局限于某一区域 ,尚不能确定与产毒有关的基因区域。推测Hp表达VacA活性与否可能与分泌的量有关。

摘要：目的设计幽门螺杆菌(Hp)的表位疫苗并对其免疫原性进行研究。方法将Hp的尿素酶B亚单位的三个Th表位及一个B细胞表位串联,表位之间用两个赖氨酸(KK)间隔,合成全基因,克隆到pET22b载体上,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;表达的重组蛋白经鉴定纯化后皮下免疫Balbc小鼠,检测细胞免疫应答及体液免疫应答。结果克隆表达的重组表位疫苗蛋白纯化后纯度达到95%,经N端测序证实为设计的表位疫苗蛋白,Th表位多肽(U546-561、U229-244、U237-251)、表位疫苗蛋白及rUreB均能够刺激表位疫苗致敏的小鼠淋巴细胞增殖(SI>2),并且此疫苗能够刺激机体产生特异性抗体。结论本研究中表位疫苗的设计方法能够使疫苗中包含的四个表位均发挥功能,并且具有较强的免疫原性,为研究Hp预防性和治疗性疫苗提供实验基础。

摘要：文章从GenBank中下载所有含有vacA和cagA基因的***菌株的VacA和CagA全长氨基酸序列,利用ClastalX 2.0和MEGA 5.05软件构建VacA和CagA分子系统发育树,探讨两基因之间的分子系统发育关系和不同聚类群的临床感染结果与基因型特征。结果显示,VacA和CagA具有高度相似的分子系统发育树,并且所有***菌株在系统发育树中具有相同的分布特点,分别聚类为东亚株群1、2和西方株群3个聚类群。其中东亚株群1患萎缩性胃炎比例较高,vacA基因型以s1c/m1b和s1a/m1b为主,cagA基因型以EPIYA-ABD为主;东亚株群2患十二指肠溃疡的比例较高,vacA基因型以s1c/m2和s1a/m2为主,cagA基因型以EPIYA-AB'C为主;西方株群患十二指肠溃疡和胃炎的比例相当,萎缩性胃炎比例较低,vacA基因型以s1a/m1a和s1b/m1a为主,cagA基因型以EPIYA-AB/B'CC为主。这些结果说明,vacA和cagA基因可能具有共进化的遗传关系;东亚株群1、2和西方株群分别具有不同的vacA和cagA基因亚型,这可能与其临床感染结果密切相关,因此,在进行***相关性疾病分析时,有必要结合vacA和cagA基因型的亚型做深入分析。

摘要：目的探究幽门螺杆菌感染与代谢综合征(metabolic syndrome,MetS)的横断面关联,为早期预防提供参考依据。方法利用北京美兆健康体检中心2009―2020年年龄≥18岁人群的体检资料,其中幽门螺杆菌感染情况由13C-尿素呼气试验检测,代谢综合征及其4个组成部分(腹型肥胖、高血糖、血压升高和血脂异常)的诊断参照《中国成人血脂异常防治指南》的定义,采取横断面调查设计,应用多变量logistic回归分析模型探究幽门螺杆菌感染与MetS及其4个组成部分的关联。结果共纳入31369名体检对象,年龄为(45.3±11.6)岁,其中男性占58.7%。幽门螺杆菌阳性检出率为35.7%,MetS患病率为25.6%,其中男性MetS患病率高于女性。在调整了社会人口学、生活方式、高血压和糖尿病家族史等潜在混杂因素后,幽门螺杆菌感染者患代谢综合征(OR=1.18,95%CI:1.11~1.25,P<0.001)及其4个组分的风险更高,其中腹型肥胖(OR=1.18,95%CI:1.11~1.24,P<0.001)、血脂异常(OR=1.14,95%CI:1.06~1.22,P<0.001)的关联强度较高,且女性中血脂异常的关联强度高于男性(P=0.003)。结论我国成人幽门螺杆菌感染与高MetS及其组成部分的患病风险有关。

摘要：目的应用ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析幽门螺杆菌（Ｈｐ）的空泡毒素基因（ｖａｃＡ）多态性，借此区分不同来源的Ｈｐ。方法用ｖａｃＡ为模板设计的引物对１５９例各种胃、十二指肠疾病患者胃粘膜行ＰＣＲ扩增，其产物作ＳＳＣＰ分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交。对３例具不同ＳＳＣＰ带型的十二指肠溃疡（ＤＵ）患者的Ｈｐ进行基因序列分析。结果ｖａｃＡ的两种产物ｖａｃＡ１和ｖａｃＡ２各占７６．５％（１１４／１４９）和２３．５％（３５／１４９），每个胃粘膜仅能扩增出一种产物。８种不同的ＳＳＣＰ带型中以Ｂ型为最多（４５．７％），ＤＵ占８０％。ＤＮＡ测序显示Ｈｐ的ｖａｃＡ信号序列有不同程度的差异。结论不同ＨｐｖａｃＡ基因的变异度较大，利用ＰＣＲＳＳＣＰ可将不同来源的Ｈｐ区分开，从而可用于Ｈｐ流行病学研究和治疗后的追踪观察，鉴别Ｈｐ的感染和重复感染等。

摘要：目的构建含有幽门螺杆菌尿素酶(UreI、UreB)及粘附素(HpaA)的多表位原核表达质粒pET28a(+)/ureI-ureB-hpaA〔pET28a(+)/IBA〕及相应的原核表达工程菌,研究其表达特性。方法通过生物信息学方法从ureI、ureB和hpaA基因中筛选T细胞和B细胞优势表位基因序列,人工合成并构建原核重组表达质粒pET28a(+)/IBA。经限制性内切酶(NdeⅠ,XhoⅠ)酶切鉴定及DNA测序鉴定后导入大肠杆菌BL21(DE3)。该工程菌经IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测重组蛋白(rIBA)的表达情况,以抗幽门螺杆菌悉尼株(SS1株)特异卵黄抗体采用Western blot检测rIBA的抗原性。结果构建的多表位原核表达质粒pET28a(+)/IBA双酶切和测序鉴定与设计序列100%一致。工程菌经IPTG诱导后SDS-PAGE电泳显示在相对分子质量40×103左右有一条明显蛋白条带,Western blot显示有相应位置特异反应条带。结论成功构建幽门螺杆菌多表位重组原核表达质粒pET28a(+)/IBA及相应原核表达工程菌,该工程菌表达的rIBA具有抗原性,表明该重组蛋白与幽门螺杆菌有高度相关性。