摘要：目的探讨MGMT(O6-methylguanine-DNA methyltransferase)基因异常甲基化的血浆检测方法和临床意义。方法首先对SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法进行改良设计研究,寻求最佳的实验方法和条件,然后利用改良的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法分别对肺癌患者和正常人的血浆进行异常甲基化MGMT基因检测。结果在反应体系中增加75℃30s这一步骤可有效消除非特异性扩增产物,使测量定量结果更加精确。18例肺癌患者中,鳞癌1例为阳性,占20%;小细胞肺癌1例阳性,占33.33%;腺癌4例阳性,占40%。结论利用改良的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法可以检测到肺癌患者血浆异常甲基化MGMT的存在;肺腺癌阳性率最高,提示不同肿瘤细胞基因表达存在很大差异;同时也为无创伤性诊断肺癌提供了一种具有临床实用价值的方法。

摘要：目的研究CTNNA1基因启动子区异常甲基化与急性髓系白血病(AML)发生的相关性。方法选取180例AML患者骨髓标本及24例健康供者骨髓标本,通过甲基化特异性PCR方法(MS-PCR)进行CTNNA1基因启动子区异常甲基化阳性率进行检测,提取基因组DNA,设计硫化测序PCR(BS-PCR)引物及甲基化特异性PCR(MS-PCR)引物,进行PCR扩增及测序分析。结果 5例健康者标本及5例AML患者标本DNA经硫化且BS-PCR测序分析,其健康者标本甲基化率分别为1.5%、1.0%、1.0%、1.5%、1.0%,而AML患者CTNNA1甲基化率分别为92.0%、78.5%、86.0%、56.0%、90.0%,远远高于健康供者。MS-PCR分析结果显示,CTNNA1基因在24例健康人中呈完全非甲基化状态,在180例AML患者中其甲基化阳性率为37.2%(P<0.05)。结论 CTNNA1基因启动子区异常甲基化可能参与AML的发生,为疾病的早期监测提供分子理论依据。

摘要：传统的观点认为，基因的缺失和突变是基因失活的主要方式，最近研究显示，基因异常甲基化所导致的基因沉默亦是基因失活的方式之一。在多种恶性血液病中，p15基因发生异常的主要途径是基因异常甲基化和缺失。目前国内文献上p15基因甲基化的检测方法主要集中在甲基化敏感限制性酶切和Herman等总结的甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）方法。我们通过优化MSP方法，设计了p15基因的半巢式-MSP（Hn-MSP）引物对85例急性白血病（AL）患者进行了p15甲基化状态的检测。

摘要：现在普遍认为肿瘤的发生与DNA的异常甲基化有关，所以DNA甲基化状态的研究成为了研究肿瘤发生机制的一个热点，MSP(methylation specific PCR)则是检测DNA甲基化状态的一个简便有效的方法。理想的引物是MSP扩增成功与否的关键因素之一，它决定着MSP扩增的特异性、扩增的效率和扩增的保真度等。