摘要：弓形虫棒状体蛋白（ROP1）存在于速殖子棒状体内。根其已知基因序列设计合成一对引物，用PCR技术从弓形虫RH及ZS2株的基因组DNA中扩增出编码ROP1的基因片段，将扩增产物与pBV220原核高效表达质粒重组，构建成功pBV200-RCP1重组子，转化大肠杆菌TG1，DHSα，以进一步诱导表达RCP1非融合蛋白，用于对弓形虫侵入机制及免疫特性的研究。

摘要：针对人畜共患的寄生虫弓形虫设计特异引物,建立PCR快速检测鉴定方法,并用临床样品和其他6种病原体验证检测方法的特异性、灵敏性等参数,证实了该方法的准确性、可用性。

摘要：为构建弓形虫速殖子期表达的基因的完整长度cDNA文库 ,用CF 11纤维素柱快速提纯速殖子 ,以盐酸异硫氰酸胍 (AGPC)一步法抽提总RNA ,oligo dT纤维素分离mRNA后 ,用ClonTech公司的SmartTMPCRcDNA文库构建试剂盒 ,构建了弓形虫RH株的表达型文库。获得 5× 10 6个独立克隆 ,重组率为 99% ,插入片段的平均长度约为 1kb。根据已知序列设计引物 ,从cDNA文库中扩增出编码棒状体蛋白 1(ROP1)的基因 (不含编码信号肽的序列 ) ,本文库可望用于弓形虫疫苗研究的候选基因的筛选。

摘要：根据已发表的弓形虫主要表面抗原Ｐ３０基因序列，自行设计合成一对寡核苷酸引物。利用ＰＣＲ技术获取Ｐ３０抗原基因整个开放阅读框架的碱基序列。ＰＣＲ产物经ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切后，与经同样两种内切酶切割的质粒载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ连接构成重组质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ－Ｐ３０，转化大肠杆菌ＤＨ５α。通过遗传标记筛选、ＰＣＲ扩增及酶切分析对重组子进行了初步的鉴定，构建了弓形虫主要表面抗原Ｐ３０基因克隆，为进一步选择真核系统或原核系统体外表达该抗原，用于临床弓形虫病的免疫学诊断及弓形虫病的预防打下了必要的基础。

摘要：致密颗粒抗原(CRA1)是弓形虫的排泄分泌抗原之一。据已知的GRA1基因序列。自行设计并合成一对引物，应用PCR技术，从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA1基因片段。扩增产物经1．2％琼脂糖凝胶电泳鉴定。表明获得了正确的GRA1基因扩增片段。

摘要：根据已发表的弓形虫主要表面抗原（ Ｐ３０）的基因序列，设计合成了一对引物，通过聚合酶链反应，扩增出 Ｐ３０ 基因，将 Ｐ３０ 基因克隆入表达质粒ｐ Ｇ Ｅ Ｍ Ｅ Ｘ１ 中，经酶切鉴定后，阳性重组质粒转化宿主菌 Ｊ Ｍ １０９（ Ｄ Ｅ３ ），宿主菌经 Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ 诱导表达后，产物进行 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ和 Ｗ ｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析。结果显示， Ｐ３０ 基因以融合蛋白的形式表达，表达产物具有特异的免疫反应性。

摘要：本文根据弓形虫主要表面抗原基因的序列，自行设计合成了两对寡聚脱氧核糖核苷酸片段，构建了弓形虫特异的ＰＣＲ检测体系。经对弓形虫ＤＮＡ及人、鼠弓形虫病的初步检测，证明本ＰＣＲ体系具有敏感性高、特异性强、适用面广等特点。

摘要：目的克隆并鉴定弓形虫PRU株表面抗原SAG2C基因序列和cDNA序列,对比不同毒力弓形虫株(PRU、RH、ME49)中SAG2C基因序列,进行生物信息学分析。方法根据SAG2C基因已知序列设计合成一对引物,应用PCR技术从Prugniaud(PRU)株弓形虫基因组DNA和总RNA中扩增SAG2C基因,克隆入pMD19-T载体并进行序列测定。应用DNAMAN软件、NCBI网站(http://***/)分析3种虫株之间SAG2C基因的同源性;利用生物信息学网站ExPASy(http://***/)对获得的基因及推导出的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果PCR扩增得到弓形虫PRU株SAG2C基因及其全长cDNA序列,酶切及PCR鉴定获得了正确的重组质粒,测序结果表明,获得SAG2C基因序列1225bp,全长cDNA序列1095bp,编码364个氨基酸。同源性分析显示,弓形虫Prugniaud株和RH株SAG2C基因同源性为97.14%;Prugniaud株与ME49株cDNA序列同源性为96.89%;编码氨基酸序列同源性为92%,N端为信号肽,C端疏水序列预测它为糖基磷脂酰肌醇固着蛋白,存在13个潜在抗原表位及多个保守功能区域。结论成功克隆了弓形虫缓殖子期特异抗原SAG2C基因序列及其全长cDNA序列,序列分析显示其为糖基磷脂酰肌醇固着蛋白。

摘要：根据弓形虫 P30基因序列设计二对引物分别进行了 PCR一次扩增和套式扩增 ,结果这两对引物在一次扩增和套式扩增中分别出现预期的扩增片段 91 4bp、5 2 2 bp和 5 2 2 bp;套式扩增出现的条带比一次扩增出现的条带亮度明显增强。提示套式扩增比一次扩增具有更高的敏感性。用外引物进行扩增后 ,最低可以检测到 1 pg的弓形虫 DNA。说明所建立的反应体系具有高度的敏感性。用内引物对人工感染弓形虫的 ICR小鼠血液、组织进行弓形虫 DNA的检测 ,结果均扩增出 5 2 2 bp的扩增带。根据 B1基因序列设计的引物进行 PCR一次扩增和半套式扩增。结果均出现预期的扩增片段 61 9bp、362 bp和 362 bp;用半套式扩增检测感染弓形虫的 ICR小鼠血液、组织时可扩增出5 2 2 bp的扩增带 ,半套式扩增比一次扩增更敏感。

摘要：本文采用PCR技术，自行设计一对寡核酸引物(P1，P2)，从弓形虫ZS2基因组DNA中特异扩增出编码P30抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用FxcoRⅠ和HindⅢ双酶切后,克隆到真核表达质粒pcDNA3中，转化人大肠杆菌TG1，用氨苄青霉素和PCR初筛，将PCR扩增阳性的重组子用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定。结果成功地构成建真棱型表达质粒pcDNA-P30，从而为进一步进行重组P30抗原的体外表达创造有利条件。