摘要：酯的水解是有机化学实验教学中的一个重要化学反应,传统的酯水解实验设计是利用酸性或碱性环境在加热的条件下进行水解,而本实验设计将酯水解与生物催化相结合,利用弹性蛋白酶的水解功能,在常温及中性环境下实现对4-三氟甲基-7-丙酰氧基香豆素的水解。该实验设计创新性地将酯水解和酶催化相结合,有利于拓展学生的知识面,培养化学生物学复合型人才。同时,生物催化反应具有反应温和、环境友好等特点,符合当代绿色化学的需求。

摘要：外泌弹性蛋白酶是桔黄赛多孢霉(Scedosporium aurantiacum)主要毒性蛋白酶之一,本文在前期研究的基础上,对这种蛋白酶的序列、结构和酶学特性进行了研究。首先通过柱层析技术将***培养上清液中的蛋白进行了分离,然后通过酶谱电泳纯化得到了弹性蛋白酶条带。从凝胶中提取了弹性蛋白酶,通过质谱技术对其序列进行了检测,并对其反应特性、活力和反应动力学参数进行了研究。结果显示,***外泌弹性蛋白酶对弹性蛋白和牛跟腱胶原蛋白(bovine achilles tendon collagen,BATC)具有较好的水解性能,对鱼皮胶原蛋白(fish skin collagen,FSC)的水解效率高于对鱼鳞明胶的水解效率,对酪蛋白的水解性最差。作用于弹性蛋白时,其催化效率小于猪胰腺弹性蛋白酶。Zn^(2+)对酶活力有提升作用,而Ca^(2+)、Mg^(2+)、Na^(+)、(2S)-2-[(4S)-2-氨基-1,4,5,6-四羟基4-嘧啶基]-N-[[[(1S)-1-羰基-3-甲基丁基]氨基]羰基]甘氨酰-N1-[(1S)-1-甲基-2-氧乙基]-L-谷氨酸甲酰胺(elastatinal)和苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)均对酶活有抑制作用。该蛋白酶和青霉(Paecilomyces lilacinus)外泌丝氨酸蛋白酶(PDB Entry:c3f7oB_)的序列最相似,且有多段保守序列的氨基酸个数多于7个,可以作为PCR反应引物设计的模板。酶学特性实验表明,***外泌弹性蛋白酶对肺组织中的弹性蛋白具有降解作用,其蛋白表达和毒性机制需要进一步的研究。

摘要：采用两水平部分因子实验设计 (FFD)研究了产弹性蛋白酶菌株的种子培养基各组分对菌体生长的影响 ,并找出主要影响因子为牛肉膏、酵母膏 ,二者都在 99%的概率水平上对菌体生长有正效应。而蛋白胨对菌体生长影响是负效应 ,但不显著。NaCl对菌体生长影响也极不显著。由方差分析结果可知 ,选取的水平接近最大响应区域。因此不再进行最陡爬坡实验。最后用中心复合设计及响应面分析确定主要影响因子的最佳浓度。由实验结果可知 ,菌株在优化后的种子培养基中生物量比未优化培养基高。

摘要：采用弹性蛋白酶和复合磷酸盐为嫩化剂,选用工程法速溶调味料和真空滚揉技术,开发了嫩化性卤牛肉生产新工艺。通过正交试验设计和对卤牛肉持水性测定及感官评定,确定卤牛肉嫩化的较优工艺参数为:弹性蛋白酶用量为0.001%,溶液注射量为15%,滚揉时间为20-30min,滚揉间歇时间10min,腌制时间为6h,煮制时间15min。

摘要：通过科学的采样、初筛、复筛等合理的试验设计和大量研究工作,筛选到1株弹性蛋白酶高产菌株EL112,该菌株鉴定为Bacillus pseudofirmus。试验采用正交试验得出产弹性蛋白酶菌株的的最佳发酵条件:温度37℃,pH 7.5,转速150r/min。

摘要：一种猪胰弹性蛋白酶的二肽抑制剂类似物胺化酰亚胺（Am）能与靶丝氨酸蛋白酶结合，这种结合物的晶体结构已经弄清楚。已证明这种拟肽化合物与靶蛋白结合的方式和二肽类抑制剂相同。由于Am易从许多简单原料合成，同时Am活性稳定，水溶性极好，不易被酸、碱和蛋白酶降解，故其成为合理药物设计组合化学方法的基础。

摘要：针对提高弹性蛋白酶制剂热稳定性的问题,研究了添加物质对其热稳定性的影响。结果表明:PA对弹性蛋白酶的保护效果最好,其次是PB和氯化钙。黄原胶、甘油和山梨酸钾也起到了微弱的保护作用。而海藻糖等在该研究条件下对弹性蛋白酶没有保护作用。采用正交实验设计优化出最佳保护剂配方即PA2%,PB1.5%以及水合氯化钙1mmol/L。复合保护剂的添加使得弹性蛋白酶的耐热性提高10℃,pH稳定性也有提高。保存实验证明该复合保护剂能明显延长弹性蛋白酶的保存期。

摘要：目的合成选择性中性白细胞弹性蛋白酶抑制剂西维来司钠的衍生物,并探讨其生物活性。方法采用4条不同的反应路线,以改善西维来司钠在水中的溶解性为出发点,合成4类未见文献报道的西维来司钠类似物,并考察其在水中的溶解性。结果与结论设计并合成了4类13个未见文献报道的西维来司钠类似物,结构经IR1、H-NMR、MS分析确证。除Ⅲ类、化合物Ⅱ2外,其余化合物在水中的溶解性均得到明显的改善。初步的体外弹性蛋白酶抑制活性实验显示:所合成的化合物均具有一定的弹性蛋白酶抑制作用。Ⅱ4和Ⅲ1的抑制活性优于其他化合物,分别为85.6%和85.3%。

摘要：本文以香兰素为原料,设计并合成了7-羟基罗汉松树脂酚,并通过^(1)H NMR,^(13)C NMR和HR-MS对目标化合物进行了结构表征.活性筛选中,7-羟基罗汉松树脂酚对弹性蛋白酶的催化活性有抑制作用.通过酶动力学分析发现7-羟基罗汉松树脂酚作为弹性蛋白酶的抑制剂与底物之间呈竞争性抑制关系,抑制常数K_(i)=1.5×10^(-4)mol·L^(-1).并采用分子对接技术对7-羟基罗汉松树脂酚与弹性蛋白酶之间的相互作用进行了模拟.

摘要：介绍了用于筛选弹性蛋白酶抑制剂的化合物阵列（药物筛选生物芯片）的设计与应用。这种化合物阵列芯片由活性蛋白酶膜、化合物阵列及底物微阵构成。其主要原理是弹性蛋白酶与显色底物反应之后，可以催化底物转化为显色产物，根据颜色的差异，可以确定化合物是否对酶活性具有抑制作用以及抑制作用的强弱。为提高检测灵敏度，在反应系统中加入了与反应产物形成颜色反差的生物指示剂溴酚蓝作为背景。当酶与底物反应时，底物转化为黄色的产物，在背景色中呈现绿色；当酶活性被化合物抑制时，无黄色底物生成，点样点呈背景蓝色。使用该化合物微阵列方法对11680个化合物进行了筛选，发现了两个抑制作用较强的化合物，并通过常规的微孔板方法证明了筛选结果的准确性。说明化合物阵列蛋白质芯片方法是有效、灵敏的高通量筛选方法。