摘要：根据新城疫病毒(NDV)融合基因(F基因)的8个区域设计能区分强、弱毒株的3套特异性引物,以样品的cDNA为模板,利用Bst DNA聚合酶,在62℃恒温下进行扩增,扩增产物中加入SYBR GreenⅠ染料直接或在紫外光下观察判定结果,建立了能鉴别检测NDV强、弱毒株的环介导等温扩增方法。该方法可区别不同基因型的NDV强、弱毒株,而对常见鸡源病毒均无扩增反应。该方法对NDV RNA的最小检测限为0.01pg,灵敏度是常规RT-PCR方法的100倍。该方法无需特殊仪器,只需在常规水浴锅中进行,是一种适于基层的简便、灵敏、快速的NDV强、弱毒株鉴别检测方法。

摘要：为建立一种能鉴别鸡毒支原体(MG)强、弱毒株的快速检测方法,本研究根据GenBank中MG强毒株和弱毒株的基因组序列,选取特异性保守区序列设计了2对引物和2条探针,分别用于强弱毒株和弱毒株的检测,优化反应条件,建立了能区分MG强、弱毒株的荧光定量PCR检测方法。该法特异性强,对鸡常见呼吸道病原体的反应均为阴性;灵敏度高,可检测到100拷贝/μL的模板;稳定性好,批内和批间试验Ct值的变异系数小。本研究建立的MG强、弱毒鉴别检测方法简便、快捷,为该病的防控与净化提供新方法、新思路。

摘要：通过设计的特异引物,采用RT-PCR对1996年以来分离的45株国内新城疫病毒分离株进行鉴定和分析,并与其M DT实验结果进行比较,建立了RT-PCR结合Bg lⅠ内切酶分析区分新城疫强弱毒的方法。此方法操作简便、迅速,不仅能区分新城疫的强弱毒株,还可诊断AM PV-1引起的其他禽类的感染。

摘要：通过对大量不同毒力NDVF基因核苷酸序列的分析,根据强弱毒株F0裂解位点的序列差异设计合成了三对引物,建立了快速诊断新城疫并能鉴别其强弱毒株的反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,整个试验过程可在5h内完成。试验表明,该方法具有快速特异和操作简便的特点,不仅适用于对鸡胚毒的检测,而且适用于对病鸡组织匀浆液的检测,是新城疫鉴别诊断和流行病学调查的颇具潜力的分子诊断方法。

摘要：为了建立犬瘟热病毒(CDV)强弱毒株的鉴别PCR检测方法,根据犬瘟热病毒强弱毒株H基因的保守区域各设计了两对特异性引物,制备阳性对照模板,优化反应体系及反应程序;采集CDV自然感染犬只病料样本,利用该方法和胶体金试纸条进行对比检测。结果表明,PCR产物扩增判断为356 bp,最佳扩增体系20μL,最佳模板浓度为5ng/μL,最佳引物浓度6.25μmol/L,最佳退火时间为5 s,最佳延伸温度为15 s,最佳循环数40。CDV感染犬表现出明显的神经症状,对血液样本的检测结果表明,该方法和胶体金符合率100%;PCR检测结果显示心脏和脾脏为CDV核酸阳性,肝脏、肺脏、肾脏、十二指肠(含肠内容物)为CDV核酸阴性。该方法扩增效率高、特异性好,可区分疫苗毒株和野生型毒株,为有效诊断CDV并鉴别强弱毒株提供了保证和技术支撑。

摘要：根据新城疫病毒(NDV)基因结构的特点及强、弱毒株融合基因裂解位点的序列差异设计了4条引物,建立了一种可以快速鉴别NDV强毒株和弱毒疫苗株的多重PCR方法。检测结果显示,强毒株可以扩增出442 bp的特异性片段和671 bp的通用片段,弱毒疫苗株可以扩增出252bp的特异性片段和671 bp的通用片段。该方法只需进行一次RT-PCR,整个过程可在数小时内完成。经敏感性测定,该方法最低能检测到100 pg的NDV RNA。