摘要：为了解日本乙型脑炎病毒(JEV)强、弱毒株非结构蛋白的免疫效果,笔者分析了JEV强、弱毒株非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-2A真核表达的差异。通过观察JE减毒活疫苗(SA14-14-2株)和JEV贵州分离株(GZ株)分别在BHK-21细胞上出现的CPE,并收集强、弱毒株的细胞悬液,提取总RNA,分别设计6对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增非结构蛋白NS1、NS2A和NS1-2A的编码基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-NS1r、pcDNA3.1(+)-NS2Ar、pcDNA3.1(+)-NS1-2Ar、pcDNA3.1(+)-NS1q、pcDNA3.1(+)-NS2Aq和pcDNA3.1(+)-NS1-2Aq,将构建成功的6种真核表达质粒免疫健康小鼠,最后采集小鼠的血液和组织分别进行JEV抗体检测和细胞免疫水平检测。研究结果显示:JEV GZ强毒株与JEV SA14-14-2弱毒株能在BHK21细胞上增殖并产生CPE现象;构建的6种真核表达质粒免疫小鼠后经血常规和T淋巴亚群检测可以极显著或显著增加CD4+和CD8+细胞的含量。表明JEV强毒株非结构蛋白所诱导的细胞免疫略优于弱毒株非结构蛋白诱导的细胞免疫,但差异不明显。本研究结果可为日本乙型脑炎病毒的病原基础研究提供参考。

摘要：为准确快速诊断猪瘟病毒(classical swine fever virus,简称CSFV)强毒,对GenBank已公布的CSFV的基因组全序列进行分析,根据CSFV-5'NTR核苷酸序列设计1对特异的荧光定量引物,建立快速检测猪瘟病毒强毒株SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR方法。结果表明,该法具有很好的敏感性,对猪瘟病毒最低检出量为10拷贝/μL;特异性强,与猪瘟兔化弱毒苗、伪狂犬病毒(简称PRV)、猪细小病毒(简称PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(简称PRRSV)、圆环病毒组织苗(简称PCV2)没有交叉反应;重复性好,变异系数(CV)为0.47%~1.36%。该方法可用于猪瘟病毒的快速检测。

摘要：根据鸡毒霉形体 (MG)强毒株和弱毒疫苗株基因组结构特点 ,分别设计合成 2对引物XZ1、XZ2 和XZ4 5、XZ4 6 ,建立了可检测MG强、弱毒株的PCR方法。以引物XZ1、XZ2 对MG强毒株和弱毒株进行的PCR ,均可扩增出 732bp的特异性片段 ;而以另 1对引物XZ4 5、XZ4 6 对MG弱毒株进行PCR ,可扩增出 5 2 4bp的特异性片段 ,但对鸡毒霉形体标准强毒株和野毒株的PCR ,则扩增不出任何条带。特异性试验表明 ,这 2对引物对其他种类鸡毒霉形体及其他对照禽病病原核酸模板的扩增均为阴性。敏感性试验结果显示 ,2对引物PCR均能检出 10 0fg的MGDNA。研究结果表明 ,通过上述 2对引物的 2次PCR扩增 。

摘要：EIAV(equine infectious anemia virus)疫苗是世界唯一成功的慢病毒疫苗.通过对强毒株和疫苗株EIAV相关蛋白结构的比较研究,可以促进对其致弱过程及免疫机制的了解.gp45(glycoprotein 45)是EIAV介导与宿主膜融合过程的关键蛋白.以EIAV强毒株LN40和疫苗株FDDV13为研究对象,对gp,45核心结构域进行了克隆、表达,并对纯化和晶体生长进行了比较,为进一步的三维结构解析,更好地理解EIAV减毒疫苗的免疫机制及相关疫苗设计奠定了基础.

摘要：本文参照NDV融合蛋白(F)基因序列设计引物,通过一步法RT-PCR扩增到NDV强毒株的170bp大小的特异条带。试验中未检出NDV弱毒株、IBV、AIV、IBDV的RNA,能够检出NDV尿囊液毒的最低滴度为10-5稀释度(相当于103.7EID50病毒量)。对山东省不同地区于1997至2003年所分离的21个NDV强毒株检测全为阳性,而6个NDV弱毒株全为阴性。整个实验操作从病毒核酸提取到判定结果,在5h内即可完成。实验结果表明,该方法特异、敏感。

摘要：为了快速、敏感、特异地鉴别区分新城疫强、弱毒株,根据新城疫病毒F基因序列设计出并合成两对特异性引物,XsXq、XrXa,用来区分新城疫强毒株和弱毒株,其中XsXa可组合用来扩增新城疫所有毒株,利用这三对引物对新城疫病毒的F基因片段进行多联RT-PCR扩增,并对该多联RT-PCR检测方法进行敏感性及特异性试验。结果表明:这三对引物能特异性地扩增出新城疫强、弱毒株及NDV毒株的F基因片段,大小分别为259bpNDV(F48E9)、522bpNDV(LaSota)、757bp(NDV),该检测方法敏感性高,特异性强,初步建立起快速、敏感、特异的鉴别诊断新城疫强、弱毒株的分子诊断方法。

摘要：根据猪伪狂犬病病毒(PRV)gE、gH基因序列,设计合成了2对特异性引物,分别建立gE和gH基因的单项PCR扩增方法。通过对PCR扩增条件的优化,建立了鉴别PRV强毒和疫苗毒的双重PCR检测方法,即利用一次PCR反应,从强毒株基因组中可同时扩增出2条大小分别为429 bp(gE基因)、355 bp(gH基因)的特异性片段,从弱毒株DNA中仅扩增出1条大小为355 bp的片段,而猪圆环病毒2型和猪细小病毒DNA扩增结果均为阴性。敏感性试验表明,所建立的双重PCR检测方法最低有效检测量为1×102TCID50/0.1 mL。该方法适合对PRV强毒和疫苗毒的快速鉴别诊断。

摘要：通过分析比较犬细小病毒 (CPV)弱毒疫苗株和强毒株的基因序列 ,设计了 3条引物并组成 2对引物 ,对弱毒疫苗株和强毒株进行了半嵌套式 PCR扩增。第 1轮 PCR扩增的结果为 CPV弱毒疫苗株和强毒株有相同的目的片段(5 85 bp) ;第 2轮 PCR扩增的结果为 CPV强毒株有 375 bp目的片段 ,而 CPV弱毒疫苗株没有 375 bp目的片段。对PCR产物进行电泳和酶切分析 ,结果证明 PCR产物片段大小和酶切位点与设计的产物完全一致。特异性和敏感性测定结果表明 ,该方法是高度特异和敏感的 。

摘要：参考GenBank中的新城疫病毒（NDV）的基因序列，在F基因的3’端相对保守区设计1对引物，利用RT-PCR方法对华南农业大学兽医学院禽病学教研室近几年来分离并保存的24株新城疫病毒毒株的F基因进行了扩增，其扩增长度为450bp．测序结果表明：近十几年来，我国流行的新城疫毒株主要为基因Ⅶ型，其氨基酸序列均符合F蛋白裂解位点区（112～117）强毒株的氨基酸序列特征，并从分子水平上进一步证明我国最近流行的NDV主要为基因Ⅶ型NDV强毒株．

摘要：根据国外已发表的新城疫病毒 F基因序列 ,设计了 1对引物 ,并以 RT- PCR特异性扩增出新城疫病毒 He B0 2分离株的 F基因 ,基因产物大小为 1.6 3kb,与设计相符。对其进行序列测定后 ,与其他标准毒株 F4 8E9、L a Sota和Clone30的 F基因进行了同源性比较 ,结果表明 ,He B0 2株与国内标准强毒株 F4 8E9及目前广泛应用的弱毒疫苗株L a Sota和 Clone30的 F基因核苷酸序列的同源性分别为 88.1%、84 .9%和 83.8%。由此可以看出 ,He B0 2分离株与标准毒株和疫苗株相比 ,在