摘要：目的构建一种新型10-23脱氧核酶（DZ）真核表达载体，并鉴定其在细胞内表达10—23DZ的能力以及10-23DZ抑制巨噬细胞TACO表达的效果。方法设计1条寡脱氧核糖核苷酸ODN—PSL，其序列包含鼠莫洛尼白血病病毒逆转录酶（MLV—RT）的引物结合序列、1个多克隆酶切位点（MCS）及1个逆转录终止信号序列。将ODN—PSL插入框架质粒pBUDCE4．1中启动子PCMV的下游，获取重组质粒pBUD—PSL。将MLV—RT的编码基因克隆至pBUD—PSL中另一启动子PEF-1a的下游，构建重组质粒pSDE01。将pSDE01转染入鼠巨噬细胞系RAW264．7细胞，采用RT—PCR方法鉴定细胞中MLV-RT的表达及其表达产物的逆转录酶活性。通过计算机软件模拟巨噬细胞TACOmRNA的二级结构，以此确定10-23DZ的作用靶位并设计一相应的10—23DZ——DZ1，将DZ1表达序列插入pSDE01中ODN—PSL的MCS中，获取重组表达载体pSDE01-DZ1。将pSDE01-DZ1转染入RAW264．7细胞，并设未转染对照组。转染后48h，采用PCR法和斑点杂交方法鉴定DZ1在细胞中的表达；并分别采用半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测TACO mPNA和蛋白的表达，各组实验均独立重复3次。结果限制性内切酶酶切及测序结果显示pSDE01构建成功，将其转染入RAW264．7细胞后检测到MLV-RT的表达，而且表达产物具有逆转录酶活性。pSDE01-DZ1转染入RAW264．7细胞后48h，PCR和斑点杂交方法均检测到DZ1的表达；半定量RT-PCR和蛋白质印迹检测结果显示，与未转染组相比，pSDE01-DZ1转染后48h巨噬细胞TACOmRNA表达水平下降了77．7％（0．193±0．008比0．864±0．005，P〈0．05），TACO蛋白表达量下降了73．3％（0．114±0．051比0．427±0．043，P〈0．05）。结论成功构建了一种操作简便的新型10—23DZ表达载体，所携带的特异性10-23DZ可在细胞内有效表达，并抑制相应靶基因的表达。

摘要：目的探讨骨架相关蛋白Transgelin在伴或不伴糖尿病的胰腺培组织中的表达，及其对胰腺癌SW1990细胞运动侵袭的影响。方法采用免疫组织化学法检测Transgelin在92例胰腺癌患者（其中伴精尿病者45例）的痛组织、癌旁组织（距癌边缘〉5cm）中的表达水平．分析其与临床病理特征的关系；设计并体外合成靶向Transgelin的小干扰RNA（siRNA）．将其转染到SW1990细胞中．采用Transwell小室检测转染前后细胞运动侵袭能力的改变。结果Transgelin在胰腺癌组织中的表达阳性率为68．5％（63／92），显著高于癌旁组织[33．7％（31／92），P〈0．05]。伴随糖尿病的胰腺癌组织中Transgelin表达阳性率为84．1％（38／45），显著高于无糖尿病的胰腺癌组[53．2％（25，47）．P〈0．05]。胰腺癌组织中Transgelin表达与胰腺癌的淋巴结转移及TNM分期密切相关（P〈0．05），与性别、年龄、发生部位、分化程度、门静脉或神经受侵犯无关（P〉0．05）。Transgelin siRNA干扰后48h,SW1990细胞迁移能力[穿膜缔胞数为（49．2±9．5）个]明显低于阴性对照组和空白组[（61．9±7．5）和（65．3±10．6）个，P值均〈0．05]；SW1990细咆的体外侵袭能力[穿膜细胞数为（48．0±8．6）个]也明显低于阴性对照组和空白组[（63．5±11．4）个和（67．5±9．6）个，P值均〈0．05]。结论Transgelin可能通过促进胰腺癌细胞的运动侵袭能力，参与伴随糖尿病的胰腺癌的转移发生。