摘要：目的 构建微小rna-206（miR-206）的慢病毒载体转染MCF-7细胞,观察转染效率和细胞生物学特性的改变.方法 针对miR-206有效的靶序列设计合成寡链DNA,经过退火、连接、聚合酶链反应（PCR）筛选、测序鉴定、慢病毒包装、共转染等步骤获得慢病毒LV-hsa-miR-206,将其转染MCF-7细胞,实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测miR-206表达,细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期.结果 PCR扩增出插入片段,目的基因的测序结果与GeneBank序列一致.感染慢病毒后,MCF-7的miR-206表达由1.000增加至120.331±1.801;细胞增殖能力显著降低,在转染后第2天由1.420±0.052降低为1.275±0.147,第3天由1.762±0.089降低为1.387±0.093,第4天由2.045±0.235降低为1.269±0.103,凋亡细胞和G2期细胞比例显著增加.结论 成功构建LV-hsa-miR-206慢病毒载体,并在MCF-7细胞中成功表达,miR-206表达水平增加导致细胞的生物学特性发生明显变化.

摘要：目的探讨甲状腺功能亢进症(简称甲亢)患者外周血单个核细胞微小rna(miR)-206表达水平与Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路中Wnt-1和β-catenin表达水平的相关性。方法采用前瞻性设计,选择2018年1月至2020年6月武威市人民医院收治的甲亢患者79例作为观察组,另选择2019年1月至2020年9月武威市人民医院健康体检者70例作为对照组。观察组使用抗甲状腺药物治疗,于治疗期口服他巴唑10~20 mg/d;血清甲状腺激素正常后减量,维持他巴唑5~10 mg/d,持续治疗12个月。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测观察组治疗前后以及对照组外周血单个核细胞miR-206,Wnt-1、β-catenin mrna表达水平。结果观察组治疗前外周血单个核细胞miR-206表达水平低于对照组(0.28±0.07比0.79±0.15),Wnt-1和β-catenin mrna表达水平均高于对照组(6.75±1.39比2.23±0.65,5.83±1.24比3.21±0.86,P均<0.05)。观察组治疗后外周血单个核细胞miR-206表达水平(0.54±0.13)高于治疗前,Wnt-1和β-catenin mrna表达水平(3.62±1.08、4.34±1.16)均低于治疗前(P均<0.05)。甲亢患者外周血单个核细胞miR-206表达水平与Wnt-1、β-catenin mrna表达水平均呈负相关(r=-0.763、-0.798,P均<0.05)。结论甲亢患者外周血单个核细胞miR-206低表达,而Wnt-1和β-catenin mrna高表达,miR-206表达水平与Wnt-1、β-catenin mrna表达水平均呈负相关。