摘要：根据柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)微线蛋白-2基因的cDNA序列设计-对特异性引物,以***广东株(EtGD)子孢子总RNA为模板,用RT—PCR方法成功扩增出EtGD微线蛋白-2(EtMic-2,GD)的cDNA序列。PCR产物连接到质粒pGEM—T—easy后,转化大肠杆菌DH5α。重组质粒经测序并与***北京株和豪顿株的MIC-2比较,开放阅读框架(ORF)核苷酸序列的同源性分别为99.70％(1023/1026)和99.61％(1022/1026),推导的氨基酸序列间分别有两个氨基酸不同,同源性为99.41％(340/342),经DNA sisst 1.02分析,这种差异可影响EtMic-2的抗原性。

摘要：利用酿酒酵母表面展示系统展示柔嫩艾美耳球虫微线蛋白基因EtMIC2,为下一步研制活载体疫苗奠定基础。参照GenBank中柔嫩艾美耳球虫EtMIC2基因序列设计引物,以柔嫩艾美耳球虫的RNA为模板,利用RT-PCR扩增得到预期长度的产物,双酶切连接到酿酒酵母表面展示的载体pCTCON2,转化大肠杆菌TOP10,提取阳性质粒转化酿酒酵母菌株EBY100,诱导表达后,用抗EtMIC2蛋白质特异性抗体,做间接免疫荧光(IFA)检测EtMIC2蛋白的表达。结果显示,EtMIC2成功展示到酵母细胞表面,测得最佳诱导时间为48h。