摘要：采用本实验室自行设计和研制的 Flow Cham ber血液流动剪切装置 ,从细胞生物力学的角度 ,采用寡聚核苷酸微阵列技术 ,探讨人体脐动脉平滑肌细胞 (VSMC)在脉动流剪应力作用下的基因差异性表达 ,以及相关基因表达的调控 ;比较脉动流和定常流两种剪应力作用下 VSMC基因表达的差异。通过提取细胞总 RNA ,逆转录合成单链 c DNA,双链 c DNA,体外转录合成生物素标记的 c DNA与基因进行芯片杂交 ,经抗体的检测标记荧光染料Cy3,用基因芯片扫描仪进行基因芯片的图像扫描。结果发现 ,与对照组比较 ,经脉动流剪应力作用后 ,血管平滑肌细胞有 1330个基因出现差异表达 ;经定常流剪应力作用后 ,与对照组比较 ,有 2 6 76个基因出现差异表达 ;比较定常流和脉动流两组的血管平滑肌细胞基因 ,有 2 2 97个基因存在表达差异。实验表明 ,近生理状态的脉动流与定常流两种剪应力 ,对体外培养的人体血管平滑肌细胞的基因表达 ,在数量、范围和调控水平上有着很大的差异。提示在生理或病理情况下 ,血液流体力学的变化 ,可诱导血管平滑肌细胞基因在 m RNA表达水平出现不同的应力响应。

摘要：根据黄瓜花叶病毒(CMV)、齿舌兰环斑病毒(ORSV)、建兰花叶病毒(Cym MV)、辣椒褪绿病毒(Ca CV)和落葵皱纹花叶病毒(Ba RMV)等5种危害较大的兰花病毒多重RT-PCR扩增产物序列,分别设计了5′端不同poly(d T)长短的探针,分别是:带poly(d T)15 spacer结构、带poly(d T)5 spacer结构、不带poly(d T)spacer结构,比较了3种探针紫外交联后的杂交效果。结果表明:5′端带poly(d T)15结构的探针杂交效率最高,而5′端不带poly(d T)结构的探针杂交效果极差,提示在探针设计时应选择在5′端带poly(d T)15结构以便获得更好的杂交效果。

摘要：微阵列技术以高通量、大规模、微型化和平行化的显著特点，已越来越多地应用于人类疾病诊断。我们在细菌的16SrRNA基因内设计了一套保守的通用引物，并对脑脊液常见病原菌各设计了2条特异性探针，建立了膜微阵列技术平等检测脑脊液病原菌DNA的方法，在对标准菌株进行检测鉴定的基础上，又对34株脊液临床分离株进行了鉴定，其结果可靠，而且仅用5h即可复写出菌种，具有一定的现实意义。

摘要：目的　研究线粒体DNA(mtDNA)与肿瘤发生的关系 ,提供一种可以对mtDNA进行快速、准确的定量和缺失检测的方法。方法　利用改进的PCR方法对 2例正常人外周血白细胞及 5例胃癌患者癌组织进行线粒体基因组的全序列 (16569bp)扩增 ,同时标记荧光素 ;然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染加以证实。设计出 17对叠加引物扩增mtDNA探针 ,用芯片点样仪将其点到经过氨基化的玻片上 ,制成芯片 ,杂交。GeneTACTM激光扫描仪扫描芯片得出扫描图像 ,最后用ScanAnalyzer得出阵列数据 ,对mtDNA拷贝量准确定量。结果　扩增的 17对探针经聚丙烯酰胺凝胶电泳银染显示 ,设计合理 ,特异性高。改进的PCR方法对线粒体全基因组的扩增效率高 ,银染后结果显示 ,杂带少 ,特异性强 ,产量丰富。芯片杂交后扫描图像清晰、背景低 ;阴性探针信号接近背景信号 ,两者间差异无显著性 (P >0 .0 5)。实验结果与设计的实验完全符合 ,对同一血白细胞和胃癌组织样本的多次杂交后数据分析得出 ,同一样本同一阳性探针数据间差异无显著性 (P >0 .0 5) ,而两种样本间数据差异显著(P <0 .0 1)。杂交信号稳定 ,数据分布集中 (均值两侧一倍标准差范围内 ) ,显示了非常好的可重复性。结论　已知mtDNA的大片段或整个基因组的缺失 ,以及拷贝数量的改变与肿瘤发生?