摘要：目的探讨微小RNA-216a(miR-216a)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、凋亡及自噬的影响。方法体外利用1、5、10、25及50 mg/L ox-LDL诱导HUVEC,采用实时荧光定量PCR检测miR-216a表达。在50 mg/L ox-LDL诱导的HUVEC中转染miR-216a拮抗剂(实验组)和拮抗剂阴性对照(对照组),并设计不给予任何处理的空白组。采用噻唑蓝比色法、Hoechst 33342染色及蛋白质印迹法检测细胞增殖、凋亡及自噬能力。结果随ox-LDL浓度增加,ox-LDL诱导的miR-216a表达呈剂量与时间依耐性上调(P<0.05)。实验组HUVEC中miR-216a表达较空白组和对照组明显降低(0.32±0.07 vs 1.00±0.16、1.04±0.21,P<0.05)。实验组HUVEC转染1、2及3 d吸光度值较空白组和对照组明显升高(P<0.05)。实验组HUVEC单个视野中凋亡细胞数较空白组和对照组明显减少(P<0.05)。实验组HUVEC中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达较空白组和对照组明显降低,Bcl-2、微管相关蛋白1轻链3B和自噬相关基因5表达较空白组和对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-216a在体外ox-LDL诱导的HUVEC中表达上调,干扰miR-216a促进HUVEC增殖和自噬,并抑制凋亡,提示miR-216a可能是ox-LDL相关血管内皮细胞损伤的潜在治疗靶点。

摘要：RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)所引发的靶基因mRNA降解而导致的序列特异性基因沉默,是生物体内抵御病毒感染及由重复序列和突变引起基因组不稳定性的保护机制。随着RNAi研究的越来越深入,能在哺乳动物细胞内持续表达小干扰RNA(sirnas)的表达载体的建立已成为研究的热点,而同时沉默两个或两个以上基因的表达载体的构建还少有报道。现总结RNAi的机制及几种多基因沉默表达载体的设计方案,期待为RNAi在疾病治疗中的应用提供参考。

摘要：微小RNA（miRNA）为长度在20～22个核苷酸的单链非编码小分子RNA，广泛存在于真核细胞中。miRNA通过与靶基因mRNA结合，诱导其降解或阻遏翻译过程，从而调控靶基因表达。miRNA在细胞生长、发育过程中发挥重要作用，其广泛参与细胞增殖、分化、凋亡等过程。miRNA通过不同的调节途径参与肿瘤形成，其异常表达与肿瘤的发生、发展密切相关。近年来，多项研究结果均表明，miRNA不仅在调节造血干细胞（HSC）增殖、分化及凋亡过程中起着重要作用，亦参与白血病的发生、发展。急性淋巴细胞白血病（ALL）为常见的血液肿瘤之一，miRNA异常表达在ALL的发生、发展过程中，亦起着重要的调控作用。同时，miRNA在ALL的疾病分层诊断、疗效判断、预后判断及药物靶向设计中，同样具有潜在的应用价值。笔者拟就miRNA在ALL中的研究进展进行综述。

摘要：目的构建mi R-223敲减慢病毒,为进一步研究mi R-223的功能提供工具。方法采用Invitrogen公司mi R-RNAi在线设计工具,根据mi R-223成熟体序列设计了一对互补寡核苷酸片段,退火产物连接至pc DNA6.2-GW/Em GFP-mi R载体,经酶切连入p CDH-CMV-MCS-EF1-cop GFP载体,构建了mi R-223敲减慢病毒质粒,利用293T细胞将其包装成病毒,并感染ST2细胞,观察感染效率并用q RT-PCR检测mi R-223成熟体表达。结果酶切鉴定及测序结果显示成功构建了mi R-223敲减慢病毒载体,mi R-223敲减慢病毒包装并感染靶细胞,表达绿色GFP荧光蛋白的细胞约占细胞总数的80%-90%,病毒滴度为1×10^9PFU/m L,感染效率达90%。感染mi R-223敲减慢病毒的细胞mi R-223表达量（0.31±0.03）低于阴性对照（1.00±0.09）,为阴性对照的31%,差异有统计学意义（n=3,t=15.091,P〈0.05）。结论成功构建了mi R-223敲减慢病毒,为进一步研究mi R-223的功能准备了条件。

摘要：目的构建miR-196b海绵吸附慢病毒载体,为研究miR-196b在骨髓基质细胞系中的功能奠定基础。方法根据miR-196b的成熟体序列设计与之互补的串联的六重复序列设计成引物,通过PCR反应将该六重复序列亚克隆至pUC19质粒中,再经酶切连接至pLVX-shRNA2慢病毒载体,利用293T细胞将构建成功的miR-196b海绵吸附慢病毒载体进行病毒包装和滴度测定,pLVX-shRNA2慢病毒作为对照组,miR-196b海绵吸附慢病毒作为实验组,将其感染ST2细胞,观察感染效率,并通过Western blotting检测miR-196b靶基因叉头框蛋白O1(FoxO1)的蛋白水平。结果酶切鉴定和测序结果正确,慢病毒包装所测滴度为1×108PFU/mL,将其感染靶细胞,其感染效率达80%。Western blotting结果显示,与对照组相比,其靶基因FoxO1蛋白表达水平有明显增加(P<0.05)。结论成功构建了miR-196b海绵吸附慢病毒载体,并能有效吸附内源性的miR-196b,从而发挥其抑制作用。

摘要：卵巢癌是致死率最高的妇科生殖系统恶性肿瘤。因其起病隐匿,诊断时常已处在较难治愈的晚期阶段,且常反复出现药物抵抗及复发转移,导致不良预后结局,5年生存率仅为25%~30%左右。因此,更敏感、更高效的诊断方法和治疗靶点有待被发现。近年来,长链非编码RNA(lncrnas)成为肿瘤学领域的研究热点,学者们在多种人类恶性肿瘤中发现lncrnas表达异常并参与调控肿瘤的发生发展进程,提示其可作为新兴的诊断标志物或治疗靶点。本文综述近年来卵巢癌中lncrnas的研究进展,分析这些lncrnas在卵巢癌的发生和发展过程中的调控作用,及其与相关微小RNA相互作用的情况。

摘要：目的 构建靶向survivin基因的微小RNA（miRNA）真核表达载体,探讨其对人结肠癌细胞（HT-29）增殖、凋亡的影响.方法 设计合成针对survivin基因的miRNA序列,定向克隆至pcDNATM6.2-GW/Em GFP-miR真核表达载体上,构建靶向survivin的miRNA重组质粒.HT-29细胞接种于6孔板,分为空白对照组、转染试剂组、空质粒组（阴性对照组）以及目的基因组（阳性对照组）4组.瞬时转染后收集各组细胞,应用流式细胞仪检测各组细胞的增殖指数及凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应和免疫印迹法（Western blot）检测靶基因（survivin） mRNA和蛋白的表达.结果 HT-29细胞转染后,目的基因组增殖指数与正常组、转染试剂组、空质粒组相比明显降低（17.98％±2.35％ vs 38.04％±2.11％ vs36.73％ ±2.51％ vs36.57％±3.05％;t=20.05,P ＜0.01;t =18.75,P＜0.01;t=18.59,P＜0.01）,凋亡率明显增高（19.54％±1.74％ vs 3.13％±0.29％ vs 3.70％ ±0.44％ vs 3.61％±0.50％; t=16.40,P＜0.01;t=15.84,P＜0.01;t=15.92,P＜0.01）.目的基因组survivin mRNA与其他各组相比明显降低（=0.68,P＜0.01;=0.58,P＜0.01;t =0.61,P＜0.01）,蛋白的表达亦明显降低（t=0.64,P＜0.01;t =0.62,P＜0.01;t =0.67,P＜0.01）.结论 靶向沉默结肠癌HT-29细胞的survivin基因可以明显抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡.

摘要：目的研究miR-141-3p介导Yes相关蛋白1(YAP1)基因表达对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)细胞侵袭转移和化疗敏感性的影响及其作用机制。方法收集50例晚期NSCLC及癌旁组织标本,采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测组织中miR-141-3p和YAP1表达量。选择NSCLC细胞株,设计miR-141-3p inhibitor和siRNA-YAP1,将细胞分为Blank组、miR-141-3p mimic组、miR-141-3p inhibitor组、YAP1 vector组、siRNA-YAP1组和miR-141-3p mimic+siRNA-YAP1组。取对数生长期的细胞接种于96孔培养板,加10 mg/L顺铂置37℃、体积分数0.05 CO 2条件下培养;观察细胞迁移、侵袭、耐药性的变化,并检测miR-141-3p、YAP1、TGF-β信号通路相关蛋白TGF-β和Smad2表达。结果与癌旁组织相比,晚期NSCLC中miR-141-3p和YAP1呈高表达(t=23.19、17.32,P均<0.05)。过表达miR-141-3p或YAP1能够降低TGF-β和Smad2表达,促进癌细胞侵袭迁移,降低顺铂处理后细胞存活率(Tukey’s检验,P均<0.05);而沉默miR-141-3p或YAP1能够提高TGF-β和Smad2表达,抑制癌细胞转移侵袭,提高顺铂处理后细胞存活率(Tukey’s检验,P均<0.05;F=82.670~181.000,P均<0.05)。结论miR-141-3p下调可能通过抑制YAP1基因表达激活TGF-β信号通路,进而调控晚期NSCLC细胞侵袭转移和化疗敏感性。

摘要：目的:构建miR-3960的真核表达载体,并观察其对成骨细胞矿化的影响。方法:设计引物合成miR-3960的前体序列,将其克隆到真核表达载体pSilencer4.1-CMV puro中,构建成pSilencer4.1-miR-3960重组体。通过酶切及测序证实构建是否成功。随后将miR-3960表达载体转染小鼠基质细胞ST2,Northern blot检测miR-3960表达水平。用BMP-2诱导ST2细胞向成骨细胞分化,通过检测钙沉积量来观察对成骨细胞矿化的影响。结果:pSilencer4.1-miR-3960真核表达载体经酶切及测序鉴定正确。pSilencer4.1-miR-3960转染ST2细胞后,能有效表达miR-3960。经BMP-2诱导分化5d后,稳定转染组钙沉积量较对照组显著增加。结论:成功构建了真核表达载体pSilencer4.1-miR-3960,转染ST2细胞后能有效表达。miR-3960可以促进成骨细胞矿化。

摘要：目的 建立通用型荧光探针用于不同成熟型微RNA的定量检测.方法 基于茎环法发明者发明且目前应用最为广泛的茎环框架,采用Primer Premier 5.0软件在其茎环框架内部设计了一通用的荧光探针及不同的引物对.采用以上探针和引物对对hsa-miR-143-3p,hsa-miR-145-5p,hsa-miR-124-3p,hsa-miR-339-5p,hsa-miR-361-5p,hsa-miR-423-3p和hsa-miR-486-5p进行定量检测.结果 结果表明该通用型荧光探针可用于不同成熟型微RNA（hsa-miR-143-3p,hsa-miR-145-5p,hsa-miR-124-3p,hsa-miR-339-5p,hsa-miR-361-5p,hsa-miR-423-3p,hsa-miR-486-5p）的定量检测.结论该通用型探针可用于茎环法定量检微RNA,可让定量更加准确、实验成本更低.理论上该探针可以用于所有的成熟型微RNA进行荧光定量PCR检测.