摘要：目的应用siRNA技术沉默S100A4基因表达对膀胱癌干细胞增殖及成瘤能力的影响。方法筛选鉴定出MB49膀胱癌干细胞后,应用核素标记相对和绝对定量(i TRAQ)技术,发现MB49膀胱癌细胞与膀胱癌干细胞表达差异的蛋白质S100A4蛋白。设计并合成S100A4基因特异性的siRNA序列,转染膀胱癌干细胞,应用Western blot和q PCR检测在siRNA对S100A4的影响,体内、外实验观察siRNA抑制S100A4后对膀胱癌干细胞增殖及成瘤能力的影响。结果通过i TRAQ核素标记结合液相色谱和串联质谱分析,共鉴定出差异蛋白共65个,S100A4在基因表达水平差异最显著(差异为5.70,P<0.05)。与空白对照组、阴性对照组相比,S100A4 siRNA转染组的S100A4基因和蛋白表达降低(P<0.05)。CCK8实验和裸鼠成瘤实验发现,与空白对照组与阴性对照组相比较,siRNA干扰S100A4表达后,膀胱癌干细胞生长明显受到抑制,成瘤能力受到抑制(P<0.05)。结论膀胱癌干细胞中S100A4表达与膀胱癌的复发、转移有关,S100A4蛋白可能成为消灭膀胱癌干细胞,治疗膀胱癌的分子靶标。

摘要：目的:分析缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)调节视网膜母细胞瘤的干样特性、氧化应激和裸鼠成瘤等作用。方法:设计3组干扰HIF-1α的shRNA转染视网膜母细胞瘤(WERI-Rb-1)细胞株(HIF-1α-shRNA1组、HIF-1α-shRNA2组和HIF-1α-shRNA3组),选择干扰效果最好的shRNA进行后续研究;将WERI-Rb-1细胞分为对照组、shRNANC组和HIF-1α-shRNA组;检测各组细胞增殖能力,氧化应激标志物超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)含量,肿瘤细胞成球情况和干细胞标记物(Oct4、Nanog和ABCG2)蛋白表达情况。结果:对照组和shRNA-NC组所有指标差异均无统计学意义。相比于HIF-1α-shRNA1组和HIF-1α-shRNA2组,HIF-1α-shRNA3组HIF-1αmRNA及蛋白相对表达水平最低。相比于shRNA-NC组,HIF-1α-shRNA3组细胞增殖数量明显减少。相比于shRNA-NC组,HIF-1α-shRNA3组瘤体直径变小,质量变轻,成球数量减少。相比于shRNA-NC组,HIF-1α-shRNA3组Oct4、Nanog和ABCG2蛋白水平相对表达量降低。相比于shRNA-NC组,HIF-1α-shRNA3组MDA和GSH-px含量增加,SOD含量明显减少。结论:干扰HIF-1α基因表达,抑制视网膜母细胞增殖,影响细胞抗氧化能力及干细胞标记蛋白表达,从而抑制肿瘤生长。