摘要：背景:成骨生长肽是新近发现的一种具有促进成骨作用的生长因子,其对骨髓基质细胞增殖分化作用受到越来越多的关注。目的:验证成骨生长肽在体外对骨髓基质细胞增殖和成骨向分化的影响。设计、时间及地点:随机对照实验,于2006-02/06在教育部口腔生物医学工程重点实验室完成。材料:6周龄雄性SD大鼠用于骨髓基质细胞提取;成骨生长肽为Sigma公司产品。方法:体外培养骨髓基质细胞,加入含不同浓度(10-11,10-10,10-9,10-8,10-7mol/L)成骨生长肽及小牛血清的α-MEM培养基培养,以单纯含小牛血清的α-MEM培养基培养作对照。主要观察指标:①骨髓基质细胞的鉴定。②用四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖情况。③酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶的表达。④反转录-聚合酶链反应法检测细胞内核心结合因子1mRNA的表达。结果:成骨生长肽对骨髓基质细胞增殖有促进作用(P<0.05),最大效应浓度为10-9mol/L;能增加细胞内碱性磷酸酶活性(P<0.05),最大效应浓度为10-8mol/L;可诱导核心结合因子1mRNA的表达(P<0.05)。结论:成骨生长肽可促进骨髓基质细胞的增殖,并通过诱导其内核心结合因子1mRNA的表达促进其成骨向的分化。

摘要：背景:采用生物可降解聚合物聚乳酸-羟基乙酸共聚物(Polylactide-co-glycolide,PLGA)为支架材料,包裹多肽、蛋白质药物制成缓释微球,使在体内达到缓释目的,是近10多年来各国学者大力研究的新领域。目的:观察成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)缓释微球对成骨细胞的促分裂增殖作用。设计、时间及地点:对比观察,于2006-06/11在西安交通大学生命科学院完成。材料:新西兰兔,用于制备成骨细胞;PLGA由山东医疗器械研究所提供。方法:以PLGA为载体材料,采用复乳法制备OGP-PLGA缓释微球,并对微球的形态学、粒径分布、载药量和包裹率及体外释药情况进行观察。实验分为2组,OGP组:培养液为含体积分数0.1小牛血清+含50μg/LOGP的DMEM;OGP缓释微球组:培养液为含体积分数0.1小牛血清+含50μg/LOGP-PLGA缓释微球的DMEM,分别测定成骨细胞的增殖数量。主要观察指标:①微球的形态、粒径分布、载药量、包裹率及体外释药性。②OGP缓释微球对成骨细胞增殖的影响。结果:①复乳法制备的OGP-PLGA缓释微球表面光滑圆整,球体均匀度好;微球粒径为(19.6±4.47)μm,载药量和包裹率分别为(83.9±4.21)%,(72.9±5.13)%;微球的体外释药过程较为稳定,56d释药率为85.43%。②培养1,2d时,OGP组的A值高于OGP缓释微球组,差异有显著性意义(P0.05);培养6,8d时,OGP缓释微球组的A值高于OGP组,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:采用复乳法制备OGP-PLGA缓释微球的工艺可行,微球中OGP的生物活性保存良好,能缓慢持续释放活性OGP,促进成骨细胞的体外分裂增殖。

摘要：背景:成骨生长肽是新近发现的一种生长因子,具有促进有丝分裂、促进成骨等作用,在组织损伤后的修复过程中发挥了重要的生理作用。目的:观察成骨生长肽对体外培养的人牙周膜细胞增殖及其碱性磷酸酶活性的影响。设计、时间及地点:细胞水平的对比观察实验,于2006-02/06在教育部口腔生物医学工程重点实验室完成。材料:临床上因正畸需要拔除的牙周健康、无龋的新鲜第1前磨牙牙周膜组织。成骨生长肽购于美国Sigma公司。方法:在体外培养的人牙周膜细胞中加入10-11,10-10,10-9,10-8及10-7mol/L不同浓度的成骨生长肽,用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞的增殖率;以流式细胞仪法检测细胞的增殖周期;应用酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶活性。主要观察指标:细胞培养第1,2,3天观察细胞增殖情况;第6天观察细胞内碱性磷酸酶活性。结果:成骨生长肽浓度在10-11～10-7mol/L时,对人牙周膜细胞的增殖率有明显的促进作用(P<0.05),最佳作用浓度为10-9mol/L。当成骨生长肽浓度在10-9mol/L时,能明显提高细胞S期所占的比例,从而加速细胞的增殖活动。成骨生长肽在10-11～10-7mol/L时,能显著提高细胞内碱性磷酸酶活性(P<0.05),最佳作用浓度为10-9mol/L。结论:成骨生长肽可促进人牙周膜细胞的增殖活性,同时可以提高细胞碱性磷酸酶的活性。

摘要：背景:成骨生长肽在体内外细胞培养中具有明显的促成骨活性,这种促成骨作用的分子机制还不清楚,现已通过人工方法成功制备了合成成骨生长肽。目的:探讨合成成骨生长肽对体外培养的人骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的作用。设计、时间及地点:基因和蛋白水平的细胞学体外观察,于2006-07/2007-12在福建省医学科学研究所基因工程实验室及复旦大学附属中山医院中心实验室完成。材料:骨髓标本来源于福建省立医院骨一科收治的男性髂骨植骨患者,合成成骨生长肽由中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所崔大敷教授惠赠,ERK1/2抑制剂U0126为美国CST公司产品。方法:密度梯度离心法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,单纯矿化液组加入由10mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50mg/LL-抗坏血酸组成的矿化液;10-7,10-9,10-11mol/L合成成骨生长肽组分别加入对应浓度的合成成骨生长肽,再加入矿化液;常规培养组加入含体积分数为0.1胎牛血清的低糖DMEM。主要观察指标:倒置显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR法和免疫组织化学染色检测成骨标志物的表达,Western-blot法分析合成成骨生长肽对ERK1/2信号通路的影响,观察U0126对合成成骨生长肽作用的干预。结果:加入合成成骨生长肽后,骨髓间充质干细胞体积增大,突起增多,呈多角形,胞浆含有较多颗粒状物质,出现致密细胞结节。合成成骨生长肽在mRNA和蛋白水平均能促进成骨标志物碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、骨钙素的表达,定量分析结果显示10-9mol/L合成成骨生长肽促成骨作用最强。加入合成成骨生长肽后能够引起ERK1/2信号通路的持续性激活,经U0126预处理后几乎完全阻断了合成成骨生长肽对骨髓间充质干细胞的促成骨作用。结论:合成成骨生长肽可明显促进人骨髓间充质干细胞向成骨方向的转化,在10-9mol/L浓度下促成骨能力最强,其促成骨作用可能是通过激活MAPK家族ERK1/2途径实现的。

摘要：背景:既往动物实验证实,局部或全身应用成骨生长肽,能够促进骨折愈合。但存在着半衰期短及口服生物利用率低等缺点,限制了其在临床上的应用。目的:用可吸收性生物材料包裹成骨生长肽于微球中,观察成骨生长肽在体外释放的过程及其结构变化,为控制释放系统选取合适的载体材料。设计:分组观察对比实验。单位:西安交通大学生命科学院实验室。材料:成骨生长肽由西安蓝晶生物科技公司按照Fmoc系统合成。质谱分析其纯化后纯度超过98%,Mr1523650符合理论Mr1523750),其序列分析符合理论序列。聚乳酸-聚羟乙酸共聚物(PLGA)(50∶50,Mr30000;75∶25Mr80000)由山东医疗器械研究所提供。方法:应用两种不同Mr的PLGA,用复乳溶剂挥发法包裹成骨生长肽,制备成骨生长肽PLGA微球。利用扫描电镜观察微球的表面结构及形态。应用激光粒度计数仪测量微球的粒径分布。高效液相色谱法检测成骨生长肽的包裹率、缓释时间及制备过程对多肽的结构稳定性的影响。结果:①成功制备了较均匀的圆形成骨生长肽微球。PLGA50∶50微球的平均粒径为(19.6±4.5)μm,包裹率为(83.9±4.2)%,载药率为(83.9±4.2)%;PLGA75:25微球的平均粒径为(35.8±3.6)μm,包裹率为(65.6±6.8)%,载药率为(65.6±6.8)%。②高效液相色谱法结果显示,成骨生长肽在制备过程没有发生化学结构改变及凝集,与制备前的结构一致。两种微球均有突释现象,但成骨生长肽-PLGA75∶25微球突释较重,成骨生长肽-PLGA50∶50微球能够缓释成骨生长肽56d,且累计缓释效果良好,成骨生长肽-PLGA75∶25缓释70d。成骨生长肽-PLGA50∶50微球35d的成骨生长肽累计缓释率低于成骨生长肽-PLGA75∶25,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:与成骨生长肽-PLGA75∶25缓释微球相比,成骨生长肽-PLGA50∶50缓释微球具有较好的控制释放效果,且缓释时间能够满足骨折或骨缺损愈合局部应用需要。