摘要：目的从凋亡相关分子Fas（CD95）、半胱天冬酶-3（caspase-3）和活性氧（ROS）、细胞色素C的角度,研究扇贝多肽（polypeptide fromChlamys farreri,PCF）抑制UVB引起的人角质HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法实验设计为5组：对照组、UVB模型组、UVB＋5.69mmol.L-1PCF组、UVB＋2.84mmol.L-1PCF组、UVB＋1.42mmol·L-1PCF组。应用小干扰RNA（siRNA）干扰UVB辐射的HaCaT细胞的Fas表达;琼脂糖凝胶电泳分析Fas siRNA及ROS清除剂NAC对细胞凋亡的影响;以DCFH-DA为荧光探针,检测细胞内ROS的含量;免疫印迹法检测细胞色素C及用RNAi干扰降低Fas表达后caspase-3的表达。结果干扰Fas后,UVB辐射的HaCaT细胞凋亡受到明显抑制及caspase-3的表达降低;NAC对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.42~5.69mmol.L-1剂量范围内的PCF可剂量依赖性抑制UVB引起的ROS的生成及细胞色素C的释放。结论PCF可抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制Fas-caspase-3及ROS-细胞色素C通路有关。

摘要：目的从p38促细胞分裂剂激活性蛋白激酶(p38MAPK)通路和半胱天冬酶-3(caspase-3)的角度,研究扇贝多肽(poly-peptidefromChlamysfarreri,PCF)抑制紫外线A波(UVA)引起的HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法实验分为6组:对照组、UVA模型组、UVA+5.68mmol.L-1维生素C阳性对照组、UVA+5.69mmol.L-1PCF组、UVA+2.84mmol.L-1PCF组、UVA+1.42mmol.L-1PCF组。以正交实验设计确立UVA诱导HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳分析PCF、p38MAPK抑制剂(SB203580)及caspase-3特异性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)对细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38MAPK及磷酸化p38MAPK表达;流式细胞术检测caspase-3的活性。结果PCF能明显抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡;SB203580和Ac-DEVD-CHO对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.425.69mmol.L-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVA引起的p38MAPK磷酸化及caspase-3的活化。结论PCF可抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38MAPK通路和caspase-3活性有关。

摘要：目的从p38MAPK-HSP27通路方面研究扇贝多肽（polypeptide from Chlamys farreri,PCF）抑制中波紫外线（UVB）诱导的HaCaT细胞凋亡的作用机制。方法复制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型;实验设计为6组：对照组、UVB模型组、UVB＋5.69mmol.L-1维生素C阳性对照组、UVB＋5.69mmol.L-1PCF组、UVB＋2.84mmol.L-1PCF组、UVB＋1.42mmol.L-1PCF组。PCF预处理30min,荧光染色（Hoechst33258）结合琼脂糖凝胶电泳分析PCF在p38抑制剂（SB203580）存在和不存在两种条件下对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38MAPK、HSP27的表达及磷酸化水平的改变,同时分析HSP27在细胞内定位的改变。结果PCF可明显抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡;PCF在1.42~5.69mmol.L-1范围内,可剂量依赖性抑制p38MAPK和HSP27的磷酸化水平,并抑制HSP27由胞质向胞核中的移位。结论PCF通过阻断p38MAPK-HSP27通路来抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38MAPK的活化从而阻止HSP27的磷酸化及其细胞内移位有关。

摘要：以扇贝多肽PCF作为研究对象，制备脂质体制剂，用扇贝多肽在脂质体中的包封率作为衡量制备工艺的指标。在单因素实验基础上，利用中心复合设计方法和响应面分析法，研究三个变量对包封率影响的协同作用。在pH梯度为4-7条件下，确定扇贝多肽脂质体的最佳制备工艺为卵磷脂为200mg，胆固醇加量为56mg，吐温80加量为68mg，PCF添加量为2．15mg／mL，在此条件下，脂质体包封率达到96．05％。对制备的脂质体的质量进行了评价，其粒径在200nm以下，带负电荷，稳定性较好。通过响应面优化得到的扇贝多肽脂质体包封率有了大幅提高，为开发应用奠定了基础。

摘要：目的从凋亡相关分子Fas(CD95)、Fas相关死亡结构域(Fas associated protein with death domain,FADD)及半胱天冬酶-8(caspase-8)的角度,研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制紫外线B(Ultraviolet B,UVB)诱导的人角质形成细胞株(immortalized human keratino,HaCaT)细胞凋亡的作用机制。方法实验设计为6组:对照组、UVB模型组、UVB+5.68mmol·L-1维生素C阳性对照组、UVB+5.69mmol·L-1PCF组、UVB+2.84mmol·L-1PCF组、UVB+1.42mmol·L-1PCF组。以正交实验设计确立UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳和荧光染色(Ho-echst33258)分析PCF对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;琼脂糖凝胶电泳分析caspase-8抑制剂(z-IETD-fmk)对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测Fas(CD95)mRNA的表达;蛋白质印迹法检测FADD及caspase-8蛋白的表达。结果PCF能明显抑制UVB引起的HaCaT细胞凋亡;z-IETD-fmk对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡有明显抑制作用;1.42～5.69mmol·L-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVB引起的Fas,FADD的表达增加及caspase-8的活化。结论PCF可剂量依赖性抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制Fas,FADD的表达及caspase-8的活化有关。

摘要：目的研究UVA对HaCaT细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumour necrosis factor related apoptosis inducing ligand，TRAIL）表达的影响；复制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡模型，探究TRAIL在UVA诱导的HaCaT细胞凋亡中的作用及扇贝多肽（Polypeptide from Chlamys farreri，PCF）对UVA诱导的TRAIL凋亡通路的影响。方法实验设计分为5组：对照组、UVA模型组、UVA＋5．69mmol·L^-1PCF组、UVA＋2．84mmol·L^-1PCF组、UVA＋1．42mmol·L^-1PCF组。Real-Time PCR检测TRAIL mRNA表达；蛋白质印迹法检测TRAIL蛋白表达及caspase-8活性；琼脂糖凝胶电泳分析TRAIL中和性抗体对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡的影响。结果8J·cm^-2UVA照射HaCaT细胞后TRAIL mRNA及蛋白表达增加，与对照组相比差异有显著性（P〈0．01）；TRAIL中和性抗体对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用；1．42～5．69mmol·L^-1剂量范围内的PCF可剂量依赖性抑制UVA引起的HaCaT细胞TRAIL mRNA及蛋白表达（P〈0．05，P〈0．01）；PCF对UVA引起的HaCaT细胞caspase-8的活化有抑制作用，且呈量效关系。结论UVA可增强HaCaT细胞TRAIL表达；TRAIL参与了UVA诱导的HaCaT细胞凋亡；PCF对UVA诱导的HaCaT细胞TRAIL表达有抑制作用，也可减弱UVA诱导的caspase-8活化，以其抗氧化活性抑制TRAIL凋亡通路而发挥抗凋亡作用。

摘要：目的:制备了扇贝多肽脂质体凝胶,并进行了扇贝多肽水溶液、脂质体、脂质体凝胶的离体皮肤透皮的实验研究。方法:采用非平衡透析技术进行了脂质体包封率测定,正交设计优化其处方及工艺,离体皮肤法评价透皮效果。结果:脂质体的磷脂和药物的比例对脂质体的包封率影响最大;其次为磷脂∶胆固醇、油∶水比例和超声处理时间。优化后脂质体的包封率为(85.2±1.6)%,粒径为(224.2±5.3)nm,脂质体和脂质体凝胶的储留量分别是同等载药量溶液剂的2.13倍和1.94倍。结论:脂质体和脂质体凝胶有助于提高扇贝多肽在皮肤内的储留量,且制成凝胶前后皮肤储留效果无显著性差异,从而提高了在皮肤的停留时间,满足临床用药需求。