摘要：目的明确扶正化瘀复方抗肝纤维化的作用是否与其抑制自噬有关。方法C57小鼠随机分为正常组(N组)和造模组,造模组采用四氯化碳腹腔注射诱导小鼠肝纤维化模型,正常组注射等剂量橄榄油,1周后将造模组随机分为模型(M)组、雷帕霉素(Rapa)组、雷帕霉素加氯喹(Rapa+CQ)组、雷帕霉素加丹参酚酸B(Rapa+SalB)组、雷帕霉素加扶正化瘀方(Rapa+FZ)组,各药物组每日相应药物灌胃,N组、M组等剂量饮用水灌胃。5周后处死小鼠,HE和天狼猩红染色分别观察各组肝组织炎症和胶原沉积情况,碱水解法测定羟脯氨酸含量。蛋白质印迹法检测肝组织中自噬的表达变化和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ(LC3II/I)、p62、α-平滑肌肌动蛋白(ɑ-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白表达,冰冻切片免疫荧光染色观察各组肝组织ɑ-SMA及LC3B免疫荧光定位。两独立样本间的比较用t检验,多个样本均数比较采用LSD检验或DunnettT3检验。结果N组与M组小鼠体质量差异无统计学意义,各药物组小鼠体质量均明显下降(F=14.041,P<0.001)。M组和各药物组小鼠的肝质量/体质量比和脾质量/体质量比较N组均有明显增加(F值分别为26.992、6.589,P值均<0.001)。与M组比较,各用药组小鼠肝组织p62蛋白表达降低,其中Rapa组和Rapa+SalB组差异有统计学意义(F=3.085,P值分别为0.039、0.003),Rapa+SalB组则更低;与M组比较,Rapa组LC3BⅡ的表达显著升高(F=7.514,P=0.01)。免疫荧光染色显示N组小鼠肝脏内未见LC3B与α-SMA共染细胞,M组小鼠肝内见到共染细胞,各药物组小鼠肝内共染细胞明显多于M组,其中Rapa+FZ组的共染细胞较少。与N组相比,M组和各药物组胶原显著增加,各药物组胶原沉积较M组减少,各药物组间差异无统计学意义。与N组(值为77.75±48.79)相比,M组小鼠的肝组织羟脯氨酸明显升高(值为293.48±84.43)(F=3.015,P=0.005),各药物组小鼠肝组织羟脯氨酸含量均较M组减少,但差异无统计学意义(F=0.750,P=0.573)。与N组相比,M组α-SMA和I型胶原蛋白的表达均明显增加(F值分别为27.718、18.893,P值均<0.01)。Rapa组和Rapa+SalB组的α-SMA的表达与M组相似;而Rapa+CQ组和Rapa+FZ组较Rapa组和M组有显著降低(P值均<0.01)。Rapa+CQ组的I型胶原蛋白表达明显高于Rapa组(P=0.017),而Rapa+FZ组的I型胶原蛋白表达则明显低于M组(P=0.013)。结论四氯化碳诱导的肝纤维化模型中,观察到肝星状细胞的自噬;雷帕霉素能促进肝细胞和肝星状细胞的自噬;扶正化瘀方和丹参酚酸B均能对抗雷帕霉素促自噬的作用。

摘要：目的:筛选出抗肝纤维化中成药"扶正化瘀胶囊"中主要组分的最佳配伍,优化形成扶正化瘀复方的有效组分配方。方法:1筛选。运用二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化模型,以"扶正化瘀胶囊"中主要组成中药的6种提取物(a:虫草粗多糖、b:虫草菌丝体CO2超临界提取物、c:丹参酚酸、d:苦杏仁苷、e:绞股蓝皂苷、f:绞股蓝多糖组)为研究对象,用均匀设计的方法,以大鼠肝脏羟脯氨酸(Hyp)含量为主要筛选指标,用DAS3.0软件NONMEN的方法分析获得最佳有效组分配伍和最佳剂量。2验证。以扶正化瘀浸膏为对照,在最佳组分基础上设计分组,A组(扶正化瘀复方浸膏组)、B组(a+b+c+d+e+f组)、C组(a+b+d+e+f组)、D组(a+b+c+e+f组)、E组(a+b+e+f组)、模型组和正常组。观察大鼠血清肝功能、肝脏Hyp含量、肝组织病理及胶原纤维程度的变化,对所得最佳配伍进行验证,最终确定有效组分配方。结果:1筛选。经统计分析明确了虫草组分为主药,c和d无明显作用。最佳组合为:a 240 mg/kg+b0.1 ml/kg+e 20 mg/kg+f 7.3 mg/kg组分配伍。2验证。模型组ALT、AST、Alb和TBi L与正常组比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);A组、D组和E组的ALT均明显低于模型组(P<0.05,P<0.01);仅E组的AST明显低于模型组(P<0.05);A组、B组和C组的Alb则明显高于模型组(P<0.01,P<0.05);TBi L在A组、B组、C组的含量均显著低于模型组(P<0.01)。模型组肝脏Hyp含量明显高于正常组;A组、B组、C组和E组Hyp含量与模型组相比差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。大鼠肝纤维化胶原沉积半定量则仅C组与模型组间差异有显著性统计学意义(P<0.01);各治疗组除A组外胶原纤维面积均比模型组减小(P<0.01,P<0.05)。结论:均匀设计的实验方法可靠,但结果需结合临床进一步优化;扶正化瘀复方有效组分虫草粗多糖、虫草菌丝体CO2超临界提取物、绞股蓝多糖、绞股蓝皂苷、丹参酚酸和苦杏仁苷的合理配伍能重现原复方药效。