摘要：根据抑癌基因 ING1基因的序列设计并合成了检测 ING1转录产物的分子信标核酸探针 ,发展了一种快速测量从正常细胞系和鼻咽癌肿瘤细胞系提取的 ING1转录产物的方法 ,所得结果与用逆转录结合 PCR法 ( RT-PCR)得到的结果相吻合 .并且 ,将能表达 ING1基因的质粒转入肿瘤细胞进行培养后 ,再将分子信标转入肿瘤细胞 ,发现转导了质粒的肿瘤细胞比未转导质粒的肿瘤细胞内的荧光明显增强 ,从而进一步证实了所设计的分子信标核酸探针与

摘要：目的观察阻断MBD1基因对胰腺癌抑癌基因表达的影响，探讨MBD1基因在胰腺癌发生发展中的作用。方法设计并合成2条MBD1小干扰RNA（siRNA）序列，克隆进入pGCsi—U6／Neo/绿色荧光蛋白（GFP）构建重组质粒。重组质粒和空质粒转染人胰腺癌细胞系BxPC-3，将3组细胞（转染MBD1-siRNA重组质粒组、转染空质粒组和未转染组）接种于裸鼠，8周后取移植瘤行逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测MBD1基因和甲基化相关抑癌基因的表达情况。结果成功构建MBD1-siRNA重组质粒并稳定转染胰腺癌细胞系BxPC-3，转染组中MBD1基因表达明显低于空质粒组和未转染组，而CDH1、RASSF1A、TIMP3、P14ARF、Rb等甲基化相关抑癌基因的mRNA水平转染组（179．7±8．1、155．6±10．0、256．7±15．7、199．0±7．9、210．1±9．4）要高于空质粒组（21．0±6．8、22．0±2．7、99．4±10．3、86．0±5．4、15．0±4．9）和未转染组（11．4±6．0、15．3±1．9、110．7±14．1、74．3±4．8、17．4±7．8，均P〈0．05）。结论通过RNA干扰技术，可降低MBD1在胰腺癌中的表达，上调抑癌基因的转录，MBD1介导的转录抑制作用可能在胰腺癌的发生发展中起重要作用。

摘要：目的探讨肝细胞肝癌(HCC)患者血清中癌基因、抑癌基因的表达水平及其临床意义。方法选择2017年8月至2018年9月经临床确诊的肝病患者135例作为研究对象,其中肝癌组为HCC患者55例、良性组80例(急性肝炎患者20例、慢性肝炎患者20例、肝硬化代偿期患者20例、肝硬化失代偿期患者20例);对照组为同期健康体检人员20例。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各研究对象血清中癌基因[包括增殖相关基因(C-myc)、转化基因(N-ras)、丝/苏氨酸激酶(PLK)1、成纤维细胞生长因子(FGF)2]、抑癌基因[细胞周期依赖性蛋白激酶抑制剂(P16)、清道夫受体(SCAR)A5、铁调素(Hepcidin)]的蛋白含量。结果与对照组比较,癌基因C-myc、N-ras、PLK1、FGF2在良性组和肝癌组均明显升高且三组间差异有统计学意义(P<0.05);抑癌基因P16、SCARA5、Hepcidin在良性组和肝癌组均明显降低且三组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HCC患者血清中癌基因的上调、抑癌基因的下调揭示了HCC的部分发病机制,为HCC的早期诊断、治疗及设计相应治疗药物提供了有价值的想法和思路。

摘要：目的:构建野生型PTEN基因真核表达载体pcDNA3.0PTEN,并进行鉴定。方法:参照野生型PTEN基因mRNA全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自的酶切位点。从正常人外周血淋巴细胞中提取mRNA作为模板合成PTENcDNA第一链,并扩增目的基因全表达序列片段,经双酶切后定向克隆至pcDNA3.0真核表达载体中,蓝白斑试验筛选阳性重组质粒。分别经双酶切、特异PCR及测序法对重组质粒进行鉴定。结果:双酶切和特异PCR结果表明克隆的基因片段约为1.2kb;测序法进一步证实该基因为野生型PTEN编码基因,经NCBIBLAST分析与GenBank中PTEN基因序列同源性为99.92%,编码的氨基酸同源性为100%。结论:成功构建了PTEN真核表达载体pcDNA3.0PTEN,为研究PTEN在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。

摘要：目的:研究RASSF1基因2个转录本基因在胃癌组织及相对应的癌旁组织中表达情况以及RASSF1 2个转录本基因与肿瘤发生的相关性。方法:设计特异性的引物,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测胃癌及癌旁组织中RASSF1家族中2种不同转录本mRNA的表达情况。结果:40例胃癌组织中RASSF1A基因表达缺失率为60.2%(24/40),RASSF1B基因表达缺失率为37.5%(15/40)。结论:RASSF1A和RASSF1B2种转录本在胃癌组织中的表达下调,RASSF1A基因在胃癌的发展中起重要的抑制作用,RASSF1B的表达还可能与细胞的分化程度有关。

摘要：对付恶性肿瘤,核酸药物因良好的靶向性和治疗效果,近年来受到了越来越多的关注.科学家仍在努力寻找新的靶向药物和研究方向,在对付肿瘤时唤醒人体自身的免疫机能,让抑癌基因不再做“沉默的羔羊”.南开大学药学院杨诚教授课题组研究了肿瘤恶性演进中抑癌基因共沉默现象,并针对这一现象设计了通过纳米微球运载的人工单链环状DNA,通过吸附miRNA以提高机体抑癌基因的表达水平,从而抑制肿瘤进展.今年8月出版的国际知名学术期刊美国癌症协会会刊《癌症研究》（Cancer Research）封面文章报道了杨诚教授课题组研究成果.

摘要：目的对大鼠抑癌基因Mob1a进行基因扩增,体外表达载体构建并且体外表达,为了进一步研究大鼠癌症发生分子机制提供支持。方法采用RNA提取技术获得总RNA后,进行体外反转得到c DNA。利用依据大鼠Mob1a基因序列设计合成的一对特异性引物,以大鼠c DNA为模板,RT-PCR扩增得到了预期大小的DNA片段。利用NheⅠ和HindⅢ限制性酶切位点将该目的 DNA片段与p CDNA3.1-HA载体酶切后进行连接。转染HEK293T细胞系,获得总蛋白后通过Western Blot分析检测该基因在体外是否成功表达。结果通过RT-PCR方法扩增了Mob1a基因,并且将该基因克隆至p CDNA3.1-HA。Western Blot分析显示Mob1a-HA融合蛋白在体外表达。结论成功克隆了Mob1a基因并且成功在体外表达该蛋白。

摘要：对付恶性肿瘤，核酸药物因良好的靶向性和治疗效果，近年来受到了越来越多的关注。科学家仍在努力寻找新的靶向药物和研究方向，在对付肿瘤时唤醒人体自身的免疫机能，让抑癌基因不再做“沉默的羔羊”。南开大学药学院杨诚教授课题组研究了肿瘤恶性演进中抑癌基因共沉默现象，并针对这一现象设计了通过纳米微球运载的人工单链环状DNA，通过吸附miRNA以提高机体抑癌基因的表达水平，从而抑制肿瘤进展。

摘要：目的 :探讨死亡相关蛋白激酶 (DAPK1)在肿瘤的形成、转移中所起作用 ,克隆DAPK1基因的开放读码序列 (ORF)。方法 :根据GenBank提供的核苷酸序列 ,自行设计引物 ,用RT -PCR从K562细胞中扩增DAPK1基因的ORF ;用质脂体将pcDNA3 1(+ ) -DAPK1转染到Raji细胞 ,Hoechst 3 3 2 58染色观察细胞凋亡 ,MTT法观察DAPK1基因对细胞生存的影响。结果 :DAPK1基因的ORF克隆到质粒pMD18-T ,测序鉴定 ;分析结果显示 ,从K562细胞成功扩增 43 0 0bp的DAPK1基因ORF有 7处突变 ,其中 6处是同义突变 ,1处是基因的单链核苷酸多态性 ;DAPK1基因的ORF克隆到真核表达载体pcDNA3 1(+ ) ,转化到Raji细胞 ;转染 48h后 ,可以检测到DAPK1的表达 ,并可以观察到细胞发生凋亡。结论 :大片段的基因可以采用RT -PCR法直接克隆 ,采用常规的转染技术可以将大片段基因转染到宿主细胞 ;成功克隆具有活性功能DAPK1基因ORF 。

摘要：目的:探讨p53第72密码子Arg/Pro多态、第3内含子16bp副本和第6内含子G/A多态与乳腺癌的关系。方法:采用以自然人群为基础的病例对照设计,对84例乳腺癌患者和以1∶2频数匹配原则获得的168例对照进行研究,p53基因3种多态的基因分型采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法分析。单体型分布采用EHlinkage software 1.2分析软件进行估计和比较。结果:乳腺癌患者组和对照组吸烟状况的分布差异有统计学意义,病例组曾经或现在吸烟的个体比例为7.1%,明显高于对照组的1.2%(χ2=6.455,P=0.018),年龄、饮酒状况及一二级亲属家族恶性肿瘤史等基本特征因素分布差异均无统计学意义(P>0.05)。p53的这3种多态基因型在两组间的分布均无统计学意义上的差异(P>0.05)。经上述因素校正后发现,p53的3种基因多态与乳腺癌发病亦没有统计学意义上的关联(P>0.05)。应用EHlinkage software 1.2单体型分析软件显示,上述3种基因多态在对照组内存在连锁不平衡现象,Arg-A-G和Pro-A-G是最常见的2类单体型。单体型组间分布亦不具有显著性差异(P>0.05)。结论:p53基因的上述3种多态与乳腺癌发病风险可能不存在关联,各基因多态存在连锁不平衡现象,Arg-A-G和Pro-A-G是最常见的2类单体型。