摘要：中医药治疗胃上皮异型增生(Gastric epithelial hyperplasia,GED)具有多成分、多靶点、多基因调控的特点,抑制原癌基因(CerbB-2原癌基因、Bcl-2蛋白),调控抑癌基因(p53、p16),下调增殖相关基因(增殖细胞核抗原、Ki67),调节血管内皮细胞因子,影响肿瘤坏死因子-α表达等改善细胞免疫,改善胃黏膜炎症,达到治疗目的。中药逆转GED机制相当复杂,是多因素综合作用结果,并非是现代药理学某种机制能全部解释的。主要问题①缺乏科学和客观观察指标、疗效评价、诊断及辨证施治标准;②缺乏符合RCT设计及大样本多中心临床研究;③远期疗效不明,随访研究较少提及。

摘要：目的探索BRD7(bromodomain-containing protein7)是否具有抑癌基因的功能。方法根据NCBI提供的BRD7基因序列设计特异性引物扩增其编码区序列,经酶切、连接转化后进一步挑取单克隆菌落进行菌液PCR筛选及测序鉴定得到阳性重组质粒。共转293T细胞后收集浓缩病毒上清并感染U2OS细胞,24h后用嘌呤霉素(puromycin)筛选稳定表达BRD7的细胞株。结果菌落PCR扩增及DNA测序分析证明重组pMSCV-BRD7-GFP质粒克隆成功。GFP绿色荧光结果显示,绝大部分细胞成功整合了pMSCV-GFP或pMSCV-BRD7-GFP外源质粒;Western blotting检测发现感染重组质粒pMSCV-BRD7-GFP的细胞株中BRD7蛋白的表达水平显著高于对照组。功能结果显示,过表达BRD7显著抑制U2OS细胞的增殖,促进下游靶基因p21与MDM2的表达。结论本研究成功构建了针对BRD7基因的逆转录病毒稳定系,且初步证明了BRD7发挥抑癌基因的功能,为下一步深入研究其被调控的机制与功能奠定了基础。

摘要：构建具有EGFP标签的抑癌基因p53表达载体,并验证其对肺癌细胞A549的影响。以质粒pcDNA3.1-p53为模板,设计引物并进行PCR扩增获得目的基因p53,将获得的目的基因克隆至载体pcDNA3.1-EGFP上,用琼脂糖凝胶电泳检测目的条带,双酶切以及测序验证。将克隆好的载体,利用脂质体法转染A549细胞,荧光显微镜下观察,同时用MTT法测不同时间段细胞OD值。结果表明,琼脂糖凝胶电泳结果显示,目的基因扩增成功。双酶切及DNA测序结果均证实,成功构建了载体pcDNA3.1-EGFP-p53。转染A549细胞后,荧光显微镜下观察到绿色荧光。MTT法测定结果表明,目的基因转染的A549细胞组所测得的OD值明显低于对照组(p<0.01)。因此,具有EGFP标签的抑癌基因p53表达载体pcDNA3.1-EGFP-p53构建成功,转染A549细胞后,对A549细胞具有一定抑制作用。为后续继续研究p53-MDM2生物发光能量共振转移作用奠定了基础。