摘要：寻常型天疱疮（pemphigus vulgaris，PV）是一累及皮肤与黏膜的自身免疫性皮肤病，属于表皮内大疱病，临床上较常见，可表现为广泛的红斑、松弛的水疱及糜烂、结痂面，尼氏征阳性。患者血清中存在针对桥粒黏蛋白1（desmoglein1，Dsg1，相对分子质量160000）和（或）抗桥粒黏蛋白3（desmoglein3，Dsg3，相对分子质量130 000）的IgG型抗体，

摘要：本试验根据猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白表位,结合文献报道及软件预测,设计合成肽抗原;再用PCV2阳性血清进行筛选,优选出4条肽的混合肽段作为包被抗原;继而通过最适条件摸索,建立PCV2合成肽间接ELISA抗体检测方法,并从该方法的敏感性、特异性、重复性及其他试剂盒进行比对试验等关键性指标进行评估。结果显示,间接ELISA的敏感性为95.0%,特异性为97.5%,批内变异系数在3.4%~7.2%,批间重复性变异系数在4.8%~8.6%。比对试验结果显示,本间接ELISA与PCV2 Cap蛋白包被试剂盒符合率为91.5%;与猪圆环病毒2-dCap-ELISA抗体检测试剂盒(锐捷)符合率为94.6%。因此,本试验建立的猪圆环合成肽间接ELISA抗体检测方法敏感性好、特异性强和重复性好,可用于临床PCV2血清抗体检测及作为疫苗免疫效果评价的技术手段。

摘要：为建立一种敏感、特异、高通量的猪细小病毒抗体检测方法,参照猪细小病毒(PPV)VP2蛋白的基因序列设计合成1对特异性引物,PCR扩增了VP2蛋白主要抗原区域,将目的片段克隆至p ET30a原核表达载体中,获得了以可溶形式表达的重组VP2蛋白,重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测显示具有良好的抗原性;以纯化蛋白为包被抗原,经间接ELISA反应条件的优化,建立了检测PPV抗体的间接ELISA方法。结果表明:用该方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)阳性血清,结果均为阴性;批内重复性试验的变异系数小于5%,批间重复性试验的变异系数小于10%;与血凝抑制试验(HI)方法的符合率为94.49%;应用该方法检测869份疫苗免疫猪血清样品,免疫合格率为87.92%;检测248份未免疫疫苗猪血清样品,阳性感染率为7.25%。

摘要：通过外源表达PCV2 ORF3蛋白,为ORF3蛋白的抗体制备和检测提供基础材料。根据PCV2的ORF3基因序列设计特异性引物,克隆ORF3全基因,构建重组原核表达质粒,转入大肠埃希菌进行表达,将纯化的蛋白包被ELISA板,建立ORF3抗体检测ELISA方法。结果表明,获得了重组pGEX-6p-1-ORF3原核表达质粒,最佳表达条件为37℃,225 r/min,IPTG 1.0 mmol/L诱导5 h;建立的ELISA检测方法可以检测PCV2阳性血清,与猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清无交叉反应。本试验为ORF3抗体制备提供了基础材料,也为PCV2抗体检测提供了可选择方法。

摘要：为建立一种敏感、特异、快速、高通量的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体血清学检测方法,本研究利用原核表达技术表达了PRRSV M蛋白,将纯化后的重组M蛋白作为包被抗原建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。参照已发表的PRRSV基因组M基因序列,设计合成1对特异性引物,RT-PCR扩增了长约435bp的M基因片段,将目的片段亚克隆至pET32a(+)表达载体中,经IPTG诱导获得了以包涵体形式表达的重组M蛋白,重组蛋白纯化后,免疫印迹检测结果表明具有良好的抗原性和特异性。以重组M纯化蛋白为包被抗原,经间接ELISA反应条件的优化,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法,该方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪圆环病毒2型(PCV2)其他6种常见猪病病原的阳性血清均为阴性;该方法批内与批间重复性试验的变异系数分别小于5%和10%;该方法与商品化ELISA试剂盒的符合率为95.3%。本研究建立的M-ELISA检测方法将为猪群免疫PRRS疫苗后抗体水平监测及PRRSV野毒感染的快速诊断与流行病学调查等提供了一种简便易行、快速、高通量的血清学抗体检测方法。

摘要：为使牛日本血吸虫病抗体检测试纸条尽早在我国血吸虫病流行区用于牛血吸虫病的检测、普查、监测和检疫,受湖北省动物疫病控制中心委托,按照浙江省农科院畜牧兽医研究所《牛日本血吸虫病抗体检测试纸条临床试验设计方案》,我们承担了200头试验任务。

摘要：布鲁氏菌IgM/IgG抗体检测试剂属于体外诊断试剂,该类试剂需向国家药品监督管理局提交相关技术资料进行注册申报,获得医疗器械注册证后方可在医疗机构使用。按照法规要求,该类试剂应通过临床试验路径开展临床评价,以证明其安全性和有效性。如何科学合理地开展临床试验对于该类试剂的注册申报至关重要。为了指导申请人能够科学地设计和开展临床试验,基于笔者对于该类试剂的技术审评经验,本文对该类试剂注册临床试验时应关注的重点问题,包括临床试验机构选择、对比方法的选择、样本量和统计分析等要点进行了解析。

摘要：目的:为了评估儿童尿酶联免疫吸附试验(ELISA) 抗幽门螺杆菌免疫球蛋白G抗体试剂盒(尿- HpELISA)的准确性,笔者将其同13C尿素呼吸试验(UBT)和幽门螺杆菌粪便抗原试验(HpSA)做一对比, 以分析其敏感性和特异性。研究设计:选择没有明显上腹部症状的100例日本儿童分别用UBT、HpSA及尿- HpELISA法进行测试(平均年龄7岁,介于2-15岁之间)。结果:通过UBT和HpSA试验,100例儿童中,36例幽门螺杆菌阳性,64例阴性。36例阳性试验者中尿- HpELISA法测试出34例为阳性,而64例阴性者中用尿-HpELISA法测试出62例为阴性,因此,尿-HpELISA 法有94.4%的敏感度及96.9%的特异性,准确率达到了96.0%。结论:尿-HpELISA法是诊断儿童幽门螺杆菌感染的迅速、廉价、可靠并易于操作的一种方法。它不仅对诊断儿童幽门螺杆菌感染有价值,而且对儿童群体大规模流行病学筛查也有价值。

摘要：伪狂犬病,也称阿氏病(Aujeszky'sdisease),是由伪狂犬病毒(PRV)引起的一种高度传染性疾病。在没有特定宿主的情况下,伪狂犬病毒可以侵入多种哺乳动物,包括猪、牛、羊等,从而导致易感动物发生严重的临床症状和急性死亡。我国于20世纪50年代首次报道猪伪狂犬病,且自2011年以来,部分地区出现新的猪伪狂犬病变异株,致使养猪业遭受严重的经济损失。尽管科学家们一直在致力于诊断方法的设计和相关疫苗的开发,但伪狂犬病仍在养猪业广泛存在,近些年发现其对人类的健康也存在着潜在威胁,从而引起了世界范围内的强烈关注。目前我国的猪场普遍实行伪狂犬疫苗免疫,因此检测免疫后疫苗产生的抗体水平至关重要。本文总结目前对PRV的抗体检测方法,针对其优缺点进行对比分析,以对猪场临床上选择抗体检测方法提供参考。

摘要：为了解某猪场猪瘟、蓝耳病及伪狂犬病三大疫病的免疫与感染状态,评价免疫效果及潜在风险,为免疫程序制定提供理论依据。采集各猪群血液样品,用ELISA方法进行了猪瘟、蓝耳病及伪狂犬病的抗体检测,结果表明,该猪场猪蓝耳病免疫效果比较理想。但保育猪猪瘟抗体阳性率及阻断率偏低,初免设计不合理,存在一定的感染风险,各猪群存在较高比例的伪狂犬病野毒感染,基于抗体检测结果建议调整优化免疫程序并加强生物安全体系建设。