摘要：为了探究昆明某鸡场沙门氏杆菌耐药表型与耐药基因的相关性,试验采用平板凝集试验对昆明市某鸡场2115只成鸡和771只育成鸡进行感染现状检测,从病死鸡只中分离培养沙门氏杆菌,对其进行革兰氏染色和PCR鉴定,并测定分离株对7类13种常见抗生素的敏感性,设计7类常见抗生素的6种耐药基因[aac(3)-Ⅳ、sulⅠ、tetA、qnrA、blaTEM、catAⅠ]对分离株进行检测并分析其相关性。结果表明:该鸡场感染的总阳性率为23.84%,成鸡阳性率为20.52%,育成鸡阳性率为32.94%。共分离得到21株沙门氏杆菌,对青霉素、阿莫西林、复方新诺明、林可霉素为完全耐药;对庆大霉素、头孢拉定、卡那霉素、呋喃唑酮、恩诺沙星的耐药性高,耐药率分别为85.71%(18株)、47.62%(10株)、42.86%(9株)、33.33%(7株)、33.33%(7株);对氟苯尼考较敏感,耐药率为28.57%(6株);对头孢噻肟、丁胺卡那、环丙沙星不耐药。21株菌全部检出耐药基因sulⅠ,18株菌检出耐药基因bla TEM、tetA和qnrA,19株检出耐药基因aac(3)-Ⅳ,17株检出耐药基因catAⅠ。说明该鸡场鸡群严重感染沙门氏杆菌,该菌广泛存在且具有多重耐药性,其耐药表型与所携带的耐药基因存在密切关系。

摘要：新型冠状病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染人体后可引起发热、咳嗽等呼吸道症状,重症者可发生新型冠状病毒肺炎(Coronavirus Disease 2019,COVID-19)、严重急性呼吸综合征、甚至死亡。目前针对新型冠状病毒的感染无特效治疗药物,主要依靠疫苗接种来阻断其传播。在新型冠状病毒的结构蛋白中,刺突蛋白(Spike,S)和核衣壳蛋白(Nucleocapsid,N)是其主要的抗原蛋白,也是制备新型冠状病毒疫苗和研发抗体检测试剂的重要候选蛋白。使用原核表达系统表达重组新型冠状病毒抗原表位融合蛋白,并对其免疫原性进行验证。本研究通过分析筛选出新型冠状病毒结构蛋白S1、N及E蛋白的抗原表位,将筛选出的含强抗原表位的片段串联成融合蛋白,利用基因工程技术构建了表达融合蛋白的工程菌,纯化复性后获得了可溶性的融合蛋白。不同剂量的融合蛋白配伍不同的佐剂后进行小鼠免疫实验,通过检测抗血清的效价及相关细胞因子的水平,评价融合蛋白诱导的体液免疫和细胞免疫效果。设计的融合蛋白以包涵体的形式表达,经透析复性后得到可溶性的融合蛋白;小鼠免疫后产生了高效价的特异性抗体,并引起了较强的细胞免疫;高浓度的融合蛋白产生的免疫效果优于低浓度的融合蛋白;MF59佐剂诱导的免疫效果与铝佐剂无显著差别。本研究为新型冠状病毒融合蛋白的设计拓宽了思路,研制的融合蛋白有望用于新冠病毒重组蛋白疫苗及诊断试剂的研发。

摘要：基于GenBank登录的产气荚膜梭菌α毒素的氨基酸序列进行抗原决定簇及抗原性的分析,确定优势抗原区(101 aa~334 aa)。设计合成1对引物,以A型产气荚膜梭菌的DNA为模板,应用PCR方法扩增出702 bp大小的基因片段,克隆至表达载体pET32a(+)中进行原核表达。经亲和层析纯化的蛋白,Western blot鉴定相对分子质量约为43 kDa。以纯化的截短α毒素蛋白为包被抗原建立了间接ELISA方法,最适条件:2 mg/L重组蛋白100μL/孔、4℃过夜包被,血清样本1∶50稀释、37℃孵育40 min,HRP标记二抗1∶2500稀释、37℃孵育40 min,底物37℃显色10 min后终止反应。使用建立的方法对226份临床羊血清进行检测,阳性率为71.68%。结果表明,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于羊群疫苗免疫后的抗体监测及流行病学调查,为试剂盒的开发奠定了基础。

摘要：人腺病毒(Human adenovirus,HAd Vs)可引起包括急性呼吸道感染、胃肠炎、流行性角结膜炎等多种人群疾病。其中儿童、新兵及免疫力低下人群是最易感人群。到目前为止,HAd V-B3、B4、B7和新近出现的14型、55型等基因型,常导致严重肺炎。目前美国FDA批准在17~50岁的军人中使用口服4型和7型腺病毒活疫苗,大量的临床试验和正在进行的发热性呼吸道疾病监测均证明此口服活疫苗是安全和高效的。然而,目前没有批准在儿童和成人中普遍使用的疫苗。六邻体蛋白是腺病毒主要的抗原蛋白,该蛋白前中段含有大量的保守区,有很好的抗原性,是制备通用型腺病毒疫苗的重要候选蛋白,也是研制抗体检测试剂的理想抗原。本研究通过计算机分析,从六邻体蛋白内筛选出高度保守的抗原表位,将多个抗原表位串联成融合蛋白。利用基因工程技术,构建了高表达抗原表位融合蛋白的工程菌,纯化获得了表达的融合蛋白,并建立了融合蛋白的复性方法。复性的融合蛋白配伍不同的免疫佐剂分别免疫小鼠,检测抗血清免疫效价及相关细胞因子水平,评价其体液免疫和细胞免疫特性,结果,免疫后的小鼠产生了高效价、高特异性的血清抗体,并引起了较强的细胞免疫,显示表达制备的抗原表位融合蛋白可以引起体液免疫和细胞免疫,有希望用于研制通用型腺病毒疫苗。用制备的表位融合蛋白作抗原,研制的腺病毒抗体免疫层析检测试剂,具有很好的检出率和特异性。

摘要：随着基础医学和临床医学的发展,检验医学作为“古老”而又“新兴”的综合学科在临床诊断工作中发挥着越来越重要的作用。先进的高新技术和现代化仪器的广泛应用,特别是20世纪末,数理科学在生物学领域广泛渗透,在结构基因组学、功能基因组学和环境基因组学蓬勃发展的形势下,分子诊断学技术取得了突破性进展。这些工作正逐步从实验室基础研究进入临床实践,也给检验医学带来崭新的领域,为学科发展提供了新的机遇,同时也使检验医学的管理模式和人才结构发生了根本变化。

摘要：为建立绵羊鹦鹉热衣原体(Cp)间接ELISA抗体检测方法,本实验将编码Cp主要外膜蛋白MOMP的omp A基因序列按大肠杆菌密码子偏好性优化后,合成质粒p ET-28b(+)-omp A,另外设计特异性引物,分别将omp A截短克隆至p ET-28b(+)载体中构建重组表达质粒p ET-28b(+)-omp A_(1-182)和p ET-28b(+)-omp A_(183-390),测序鉴定正确后分别转化至*** BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导并纯化后,经western blot鉴定3个重组蛋白,结果显示,重组MOMP_(183-390)蛋白(r MOMP_(183-390))表达效果最好。以r MOMP_(183-390)作为包被抗原,采用方阵滴定法优化各反应条件,初步建立了检测Cp抗体的间接ELISA方法。采用建立的该方法检测羊痘病毒、布鲁氏菌、羊口疮病毒、小反刍兽疫病毒、口蹄疫病毒等羊临床常见病的阳性羊血清,结果显示,除Cp外,该方法与其他阳性羊血清均无交叉反应,特异性强;将Cp阳性血清2倍倍比稀释(1∶50~1∶6400)后采用该方法检测,结果显示,当Cp阳性血清稀释达1∶1600时,仍可检测到抗体,敏感性高;批内、批间重复性试验结果显示,变异系数均小于10%。采用本研究建立的ELISA方法,以及间接血凝(IHA)试验和western blot分别检测随机选取的120份临床羊血清,结果显示该方法与IHA、western blot的总符合率分别为85%和91.67%;进一步采用建立的间接ELISA方法检测381份吉林省5家羊场的绵羊血清样品,结果显示阳性率为22.83%(87/381)。本研究建立的绵羊Cp omp A重组截短蛋白的间接ELISA抗体检测方法敏感性高、特异性强、重复性好,为Cp临床样品检测及流行病学调查提供了可靠的技术手段。

摘要：Objective: The purpose of this study was to determine syncytiotrophoblast intercellular adhesion molecule- 1 expression in villitis and in normal chorionic villi from term (37- 42 weeks of gestation) placentas with or without villitis. Study design: A cross-sectional study was conducted to determine syncytiotrophoblast intercellular adhesion molecule- 1 expression in villitis (n = 16) and in normal villi from placentas with or without villitis (n = 16). Villitis was diagnosed with antibodies to human leukocyte antigen- DR and CD3 and hematoxylin and eosin staining of serial sections; intercellular adhesion molecule- 1 reactivity in syncytiotrophoblast was confirmed with antibodies to intercellular adhesion molecule- 1 and cytokeratin. Results: Villitis lesions had higher syncytiotrophoblast intercellular adhesion molecule- 1 expression than normal chorionic villi from placentas with (19.9% vs 3.5% villi; P < .001) or without (19.9% vs 0.31% villi; P < .001) villitis. Normal villi from placentas with villitis had higher syncytiotrophoblast intercellular adhesion molecule- 1 than villi from placentas without villitis (3.5% vs 0.31% villi; P <.001). Conclusion: Placentas with villitis have significantly more syncytiotrophoblast intercellular adhesion molecule- 1 expression than placentas without villitis. The finding that normal villi from placentas with villitis have more syncytiotrophoblast intercellular adhesion molecule1 than normal villi from placentas without villitis suggests that syncytiotrophoblast intercellular adhesion molecule- 1 could be the first step in villitis development.

摘要：目的建立基于AllGlo探针Real—time RT—PCR技术检测发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）的方法。方法根据SFTSV基因组S片段的相对保守序列设计引物和AllGlo探针，建立和优化Real—time RT—PCR反应体系，对其敏感性、特异性和稳定性进行评价，并检测临床疑似SFTSV病例标本，与普通RT—PCR法、病毒分离法和抗体检测法进行比较。结果 所建立AllGlo探针Real—time RT—PCR法检测SFTSV核酸，标准曲线方程为Y=3．38x＋46．03（Y为ct值，z为核酸拷贝数log值），r2〉O．998，扩增效率为97．6％，Ct值变异系数（CV）均〈1．2％，检测限为1．00×10^3copy／mL。与汉坦病毒、H1N1、H3N2、登革病毒1～4型均无交叉。检测362份疑似病例标本，SFTSV核酸阳性检出率11．9％，高于普通RT-PCR法、病毒分离法和抗体检测法（P值均d0．05）。结论建立的AllGlo探针Real—time RT-PCR法，操作简单、快速，灵敏性、特异性较高，可用于SFTSV核酸检测。

摘要：目的　寻找高灵敏度、高特异性、检测结果定量、简便易行的梅毒螺旋体抗体酶联免疫检测方法。　方法　采用重组技术 ,在现有已公布的梅毒螺旋体基因组中筛选出公认抗原性最强的三个基因片段 Tpp1 5、Tpp1 7、Tpp47进行克隆。为了获得水溶性高、特异性强、可标记性好的重组抗原蛋白 ,有针对性地设计引物以便对表达的梅毒螺旋体膜蛋白进行修饰和改造 ,同时在收获高效表达的目的蛋白后采取了一系列针对性切割和高特异性纯化。以纯化的重组梅毒螺旋体膜蛋白 (r-KTp1 5 ,r-KTp1 7及 r-KTp47)为抗原 ,建立了诊断梅毒螺旋体抗体的双抗原夹心酶联检测方法 (DAGS ELISA)。　结果　在大肠杆菌中获得了重组梅毒螺旋体膜蛋白的高效表达 ,经修饰纯化之后的目标蛋白水溶性提高 ,特异性增强 ,可标记性优于常规不修饰的重组蛋白。应用该三种蛋白为抗原建立的双抗原夹心法血清学诊断试剂盒共检测各期梅毒阳性患者 2 1 0例 ,灵敏度达 98.6% (2 0 7/2 1 0 ) ,检测正常献血者 1 3 2 7例 ,特异性达 1 0 0 .0 % (1 3 2 7/1 3 2 7) ,优于常规梅毒血清学初筛诊断方法 RPR及 TRUST法 ,与 TPHA法的符合率为 1 0 0 .0 %。　结论　以双抗原夹心法酶联免疫诊断试剂盒在梅毒血清学初筛实验室进行梅毒螺旋体抗体的筛查 ,在灵敏度、特异?

摘要：6月9日,北京第二中级法院开庭审理了北京玛诺生物制药有限公司诉北京捷乐生物科技有限公司侵害外观设计专利权纠纷案。中国法院网、北京法院网及该院官方微博进行了图文直播,该院首次在北京法院审判信息网进行了同步视频直播。