摘要：肿瘤的免疫疗法是利用人体自身的免疫系统去治疗肿瘤的一种方法,程序性死亡受体1(PD-1)是肿瘤免疫疗法中的一种免疫检查点,利用PD-1或PD-L1的单克隆抗体,可以阻断PD-1/PD-L1信号通路,恢复T细胞的免疫杀伤功能,实现肿瘤的免疫治疗.为了研究PD-1抗体药物与人体PD-1抗原的结合有效性,以PD-1蛋白质分子为实验对象,用纳米孔传感器件开展了PD-1、PD-1抗体及其结合物的辨识.分别对纯PD-1蛋白质分子和其抗体分子进行了纳米孔过孔实验研究,发现PD-1及其抗体的相对堵塞电流幅值比分别为0.00404和0.01297,实现了抗原抗体分子的区分.并对Si3N4纳米孔内壁进行了PD-1抗体修饰,再将PD-1蛋白质分子通过经抗体修饰后的纳米孔,以期实现结合物的检测,实验结果显示部分抗原抗体实现了特异性结合,剩下部分呈游离状,所以纳米孔技术可实现抗原抗体结合物的区分.未来,纳米孔有望成为无标志检测药物有效性的一种新手段.

摘要：以过渡态理论为基础 ,以羧肽酶 A(CPA)的天然肽底物马脲酰 -苯丙氨酸为模型 ,分别以磷原子和硫原子为四面体过渡态类似物的中心原子来设计和合成了半抗原和全抗原 ,将两类抗原用免疫方法诱导制备出抗体 ,然后对两类抗体水解肽键的活性进行比较。

摘要：目的　应用分子设计技术设计治疗性多肽 ,以探讨基于乙型肝炎病毒 (HepatitisBvirus,HBV)核心抗原优势细胞毒性T淋巴细胞 (CytotoxicTlymphocyts,CTL)表位的多肽设计与启动HLA Ⅰ限制性HBV特异性CD8+ T细胞应答的关系。方法　合成含HBcAg免疫优势CTL表位、Pre S2蛋白优势B细胞表位和破伤风类毒素通用TH 表位的多肽 ,并进行HLA A2 + 人PBMC体外和Balb/c小鼠体内免疫学功能研究。结果　上述多肽可在体内外诱导CD8+ CTL应答。以棕榈酸为分子内佐剂的Palm p4 4可诱导较强的CD8+ CTL应答 ,与单纯多肽比较不需另加佐剂。结论　脂类分子内佐剂可显著提高多肽的免疫原性 ;Palm p4 4可作为乙型肝炎治疗性多肽疫苗设计较有效的候选分子。

摘要：目的： 为增强猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ 的免疫保护作用而构建一表达猪白细胞介素４（ Ｉ Ｌ４）与 ｃ Ｃ１ 抗原融合蛋白的 Ｄ Ｎ Ａ 疫苗载体。方法： 通过聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ），分别扩增猪 Ｉ Ｌ４ｃ Ｄ Ｎ Ａ 和ｃ Ｃ１ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段并进行融合，获得的嵌合基因 Ｉ Ｌ４ｃ Ｃ１ 中含有１０ 个氨基酸的中间接头序列，同时对其５’ Ａ Ｕ Ｇ 侧翼序列进行翻译优化突变。结果：经酶切鉴定，证实有一１．５ ｋｂ 的片段插入载体，其 Ｄ Ｎ Ａ 序列分析结果与文献报道和实验设计完全一致。结论：表达猪 Ｉ Ｌ４ 与猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ 融合蛋白的 Ｄ Ｎ Ａ 疫苗载体构建成功。

摘要：犬瘟热和水貂病毒性肠炎是在毛皮动物养殖业中广泛流行的两类急性、接触性传染病,病原分别是犬瘟热病毒（CDV）和水貂肠炎病毒（MEV）。疫苗接种是主要的预防手段。但当前市售MEV灭活苗更新速度慢、灭活剂致癌,不能诱导细胞免疫反应;CDV弱毒苗易受母源抗体干扰,存在一过性免疫抑制、返祖散毒等问题。

摘要：目的为哮喘等Ⅰ型变态反应性疾病的靶向信号转导分子治疗寻找药物设计新靶点提供基础。方法应用钙离子荧光指示剂Fluo-3，通过流式细胞仪和激光共聚焦荧光显微镜分析肥大细胞RBL-2H3活化时细胞内钙离子浓度（［Ca2＋］i）的变化和细胞外钙离子浓度对释放组胺的影响，观察钙离子信号与肥大细胞活化的关系。结果抗原可使致敏RBL-2H3细胞迅速释放组胺和升高［Ca2＋］i，90~110s时最强达（525±42）nmol／L（n＝12），激光共聚焦荧光显微镜观察到胞浆内充满绿荧光；胞外加入钙离子螫合剂EDTA后［ca2＋］i为（80±4）nmol／L，与基础［Ca2＋］i（79±3）nmol／L差异无显著性（P＞0．05，n＝12）；但显著增高磷酸酪氨酸浓度；加入佛波酯后再加入DNP－BSA，前后［Ca2＋］i差异无显著性（P＞0．05，n＝8）。结论　钙离子参与致敏肥大细胞的抗原活化过程。

摘要：目的　克隆并表达中国莱姆病螺旋体阿弗西尼疏螺旋体基因种参照菌株FP1的外膜蛋白A(OspA) ,并对其抗原性进行初步研究和基因序列分析 ,为研制中国莱姆病疫苗提供资料。方法设计引物 ,用聚合酶链反应 (PCR)从莱姆病螺旋体FP1全基因组DNA中扩增出OspA编码基因 ,经酶切、连接 ,插入原核表达载体pET 11d ,构成重组质粒pET 11d ospA ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达 ,表达产物用SDS PAGE、Westernblot分析 ,并进行基因序列测定。结果　rOspA在宿主菌内获得高效、稳定表达 ;相对分子质量 (Mr)约为 31× 10 3,Westernblot显示其与抗OspA的多抗有良好的免疫反应性 ;经测序显示该rOspA的基因片段长度为 783bp ,编码 2 6 1个氨基酸 ,与欧洲标准菌株Pko和瑞士标准菌株VS4 6 1的OspA的DNA碱基序列比较 ,同源性均为 94 %。结论　在国内首次成功地对中国莱姆病螺旋体阿弗西尼疏旋体基因种的代表菌株FP1的OspA基因进行了克隆和表达。并且证实rOspA有良好的抗原性 ,可进一步对其免疫保护性进行研究 ,以便为研制有效的莱姆病疫苗提供数据。

摘要：根据已知A抗原基因设计并人工合成了两段寡聚核苷酸片段并进行末端标记作为探针,与pAcyc184 MDV BamHI-B 质粒经过 EcoRI、pvu Ⅱ酶切电泳后作 Southern 转印杂交,其中2.2kb 片段杂交阳性.将此片段与 pBluescript(PBS)载体连接转化 *** JM109菌株,经原位杂交、酶切分析鉴定,得到3株 pBSA2.2k 阳性克隆.进一步酶切证明,A 抗原基因存在于此片段中.

摘要：背景:有研究表明小鼠胰岛细胞永生化以后增殖能力明显增强,但功能减弱。然而,小鼠的端粒和人类的端粒有差别,大鼠的端粒与人类的相似。目的:设计和构建SV40T荧光真核表达载体,导入大鼠胰岛细胞中进行表达鉴定。设计、时间及地点:细胞观察实验,于2007-10/2008-04在深圳市人民医院中心实验室完成。材料:选用成年雄性SD大鼠2只;pCMV-SV40T质粒;pSC-A质粒;pIRES2-ZsGreen1质粒。方法:用NotⅠ和XhoⅠ将SV40T片断从pCMV-SV40T质粒上双酶切下来,回收后克隆到载体pSC-A中成为pSC-SV40T,再用XhoⅠ和SacⅡ将SV40T片断双酶切下来,回收后正向克隆到荧光真核表达载体pIRES2-ZsGreen1中,酶切鉴定重组质粒;用脂质体转染的方法将构建的载体导入原代培养的大鼠胰岛细胞;检测SV40T基因在胰岛细胞中的表达。主要观察指标:绿色荧光蛋白的表达;SV40T的转录和翻译。结果:①经XhoⅠ和SacⅡ双酶切后,重组质粒被切成5.3kb和2.4kb2个片段,与理论预期长度相符。②pIRES2-ZsGreen1-SV40T重组基因经脂质体法转染,G418筛选,在胰岛细胞内可见绿色荧光,反转录-聚合酶链反应及细胞免疫荧光染色可见SV40T mRNA转录及其蛋白的表达。结论:实验成功构建了SV40T荧光真核表达载体,并可在大鼠胰岛细胞中表达。

摘要：目的　利用 pGEX 4T 2表达系统表达制备重组人B型钠尿肽 (BNP)抗原。 方法　根据NCBI核苷酸数据库编码为 gi :2 172 6 39人BNPDNA序列 ,设计合成编码BNP 32蛋白的DNA ,并分别在 5′端和 3′端设计BamHI及XhoI位点 ,经两步聚合酶链反应 (PCR)、T A克隆后 ,亚克隆至经BamHI及XhoI酶切的 pGEX 4T 2载体 ,把重组质粒转化大肠杆菌DH5α ,经IPTG诱导表达 ,Glutathionesepharose 4B亲和层析制备GST BNP。通过DNA测序、融合蛋白的分子量分析和Western blot来证实GST BNP质粒及表达的B型钠尿肽 (BNP 32 )抗原的正确性。结果　限制性内切酶和DNA测序结果表明 ,编码BNP 32的DNA准确插入 pGEX 4T 2多克隆位点 ,成功构建了GST BNP的表达质粒 ;诱导表达超声破碎后 ,GST BNP蛋白主要存在于上清液中 ,经亲和层析回收融合蛋白 ,每升诱导菌可得融合蛋白 10 6mg ;Western blot证实制备的融合蛋白是人BNP 32。 结论　通过基因工程技术制备的人BNP抗原 ,既具有免疫原性又具有反应原性 ,能很好地解决酶免分析中的基本要素抗原 (被检测物 )和相应的抗体。