摘要：背景:最新研究表明,γδT淋巴细胞与微生物产物接触后,可表达树突状细胞的特征性标志同时表现出专职抗原提呈细胞的功能,引发CD4+CD8+αβT细胞强烈的免疫应答。目的:初步验证γδT细胞在移植排斥反应中具有专职抗原提呈细胞的特性,摸索一种体外大量扩增γδT细胞的简便方法,并利用基因修饰方法转染FasL至γδT细胞。设计、时间及地点:动物观察实验,于2007-08/2008-08在解放军第四军医大学第一附属医院中心实验室完成。材料:节段性异位小肠移植模型供、受体大鼠分别为清洁级成年健康封闭群雄性Wistar大鼠及SD大鼠,共60只,体质量200～320g。方法:采用三袖套血管吻合法建立大鼠节段性异位小肠移植模型。利用流式细胞仪获取受体大鼠血液中γδT细胞,并初步验证其功能。常规分离获取SD大鼠单个核细胞,以Mtb-Ag进行体外诱导扩增。主要观察指标:观察细胞增殖情况,以TCRγδ磁珠分选试剂盒进行阳性分选,并进行淋巴细胞中γδT细胞所占比例的检测。建立pLXSNFasL反转录病毒转移体系,检测转染后的γδT细胞。结果:活化γδT细胞表现出与树突状细胞相似的细胞黏附功能,在移植排斥反应中γδT细胞具有专职抗原递呈细胞的特性。新鲜分离的单个核细胞中γδT细胞仅占4.5%,Mtb-Ag刺激培养10d后,γδT细胞所占比例可高达72.2%。经免疫磁珠阳性分选,γδT细胞比例高达99.1%。获得的285bpFasL片段,证明PA317细胞中有FasL基因整合。以pLXSNFasL反转录病毒转移体系转染的γδT细胞FasL+细胞占97.3%。结论:实验验证了γδT细胞在移植排斥反应中发挥专职抗原提呈细胞的功能,实现了γδT细胞的体外大量扩增;成功构建了PA317/pLXSN2FasL+病毒上清转染体系,并以Fas配体基因修饰γδT细胞。

摘要：目的:研究瘦素(Leptin)基因佐剂在体内对抗原提呈细胞的影响。方法:根据小鼠瘦素基因设计引物,采用RT-PCR方法获得瘦素cDNA,与pVAX1连接构建瘦素真核表达载体作为基因佐剂,制备无内毒素重组质粒,转染B16细胞鉴定瘦素的表达,并采用肌注方式分析瘦素基因佐剂在体内对小鼠抗原提呈细胞表型的影响。结果:克隆得到的瘦素编码区全长序列,经DNA测序后证明与已报道序列相同,成功构建小鼠瘦素的真核表达载体,可在B16细胞表达;瘦素基因佐剂在体内对CD3-CD19-CD11c+细胞的MHC II和CD83的表达无明显影响,但能显著上调CD3-CD19-CD11c-免疫细胞表面MHC II类分子的表达。结论:成功构建小鼠瘦素基因佐剂,体内试验可促进免疫细胞上调MHC II类分子,提示瘦素基因佐剂有可能通过增强免疫细胞尤其是抗原提呈细胞的活化而促进免疫应答。

摘要：寻找佐剂来加强特异性免疫应答已经成为疫苗领域的主要工作。对能产生Th1免疫应答的新型疫苗设计的兴趣日益增加。对免疫应答生理了解的新进展为设计和筛选新佐剂提供了新的道路 ,在合成或天然分子的基础上模拟和重演能启动自然免疫和过继免疫机理的促炎信号。因而 ,将来的佐剂可能是混合分子 ,它具有显著的吸引、靶向或激发专职抗原提呈细胞 (APC)的能力 ,这种分子应使抗原容易被专职APC提呈并且能导致T细胞介导的效应分子以及免疫记忆的产生。

摘要：1引言疫苗开发作为一种最成功的公共卫生干预措施有着辉煌的历史,历史上疫苗的开发是以路易斯·巴斯德的＂分离物、灭活、注射＂这一典型模式为基础的。因为疫苗开发驱动了逐渐增强的合理设计疫苗现代观念,故候选疫苗的数量越来越多。大多数的候选疫苗表现出其最低程度的构成,显示出较低的免疫原性。

摘要：随着免疫调节机理日益清楚,疫苗和佐剂的设计变得更加科学化。为了理解这些机理,需要弄清楚三种细胞之间的相互作用。抗原提呈细胞(APC)启动了免疫球蛋白级联反应。这些细胞中最重要的是树突状细胞,该细胞必须首先捕获抗原,颗粒物质、天然或获得性抗体或激活补体能力有助于此过程的进行。然后T细胞通过加工的抗原肽以及APC表面和分泌的分子的联合作用而被激活。T细胞介导炎症、发挥细胞毒性作用和有助于抗体形成。究系1型细胞为主还是2型细胞为主,可影响细胞和体液应答的方向。然后激活B细胞,导致抗体形成和更好的抗原提呈。长龄淋巴细胞群中的T细胞和B细胞记忆有助于再次接触抗原时增强免疫反应性。最好的疫苗应能刺激强烈记忆。