摘要：目的获得高效抑制前列腺癌细胞株Lncap中前列腺癌特异性膜抗原（PSMA）表达的shRNA序列。方法根据PSMA基因信息，设计siRNA1、siRNA2、siRNA3三条针对PSMA基因cds区的siRNA序列及无意义的对照序列，组建与之对应的4对互补的单链DNA序列，包括siRNA的正义链和反义链；正义链序列按5’向3’顺序依次为：酶切位点（BamHⅠ）、干扰序列（19bp）、loop环（TTCAAGAGA）、干扰序列的反向互补序列（19bp）、中止信号（TTTTT）、酶切位点（EcoRⅠ）。将合成的序列插入空载体pSIH1-H1-copGFP shRNA Vector中，转染前列腺癌细胞后，通过real-time PCR检测不同序列片段对PSMA的mRNA抑制效果并通过Western blot检测对目的蛋白PSMA的抑制效果。结果设计的3条针对PSMA的序列中第2条的抑制效果最好，目的序列位于PSMA（NM_0004476）的1207到1226，茎环序列为5’-GATCC GTCTCAAAGTGCCCTACAA TTCAAGAGA TFGTAGGGCACTTTGAGAC TTTTT G-3’。其对前列腺癌细胞株中PSMA的mRNA的抑制率为60．0％，对其蛋白表达的抑制率为86％。转染细胞后，细胞可以稳定低表达PSMA。结论成功获得高效抑制前列腺癌细胞株Lncap中PSMA表达的shRNA序列。

摘要：采用固相多肽合成技术对人免疫缺损病毒-1型(HIV-1)gp41蛋白的一段代表优势抗原表位的22肽进行了化学合成,经反相高效液相层析(HPLC)和多肽序列测定表明,合成肽成品均质性良好,其氨基酸序列与设计相符。利用该合成肽作为包被抗原,以间接 ELISA 法检测 HIV-1血清抗体,其特异性、灵敏性和重复性均达到与国外生产的 gp41合成肽抗原相同的水平.

摘要：目的　获得粉尘螨Derf 2cDNA克隆及亚克隆 ,并进行测序。方法　设计合成引物 ,从粉尘螨螨体中提取RNA ,经RT -PCR获得cDNA ,PCR扩增目的片段经纯化回收后克隆至 pMD - 18T ,转化大肠杆菌E coliJM10 9,经PCR初筛挑选阳性克隆并测序 ,将PCR筛检阳性重组子及pET - 32a(+)表达载体分别用SacⅠ和NotⅠ双酶切 ,连接转化至E coliCompe tentCellJM 10 9中过夜培养 ,挑选菌落进行酶切鉴定。结果　从粉尘螨基因组RNA中扩增出Derf 2cDNA片段 ,成功构建pET - 32a(+) -Derf 2亚克隆 ,酶切产物的大小与预期相符。 结论　成功地对粉尘螨Derf 2cDNA进行体外扩增并构建pET - 32a(+) -Derf 2亚克隆。

摘要：根据伪狂犬病病毒 Rise毒株 g E基因序列 ,设计合成 1对引物 ,采用 PCR方法 ,从伪狂犬病病毒闽 A株 DNA扩增出 5 5 8bp片段。将该片段克隆到 p UC19质粒中 ,测序正确后再将其克隆到表达质粒 p ET- 2 8a中 ,以 BL 2 1(DE3)为宿主菌 ,在 IPTG诱导下获得了高效表达。经 SDS- PAGE及 Western- blotting鉴定分析 ,表达蛋白大小约 2 30 0 0 ,蛋白薄层扫描分析表明 ,该蛋白约占菌体总蛋白的 30 %。

摘要：0引言 肿瘤抗原及其编码基因的理论研究和实验技术使肿瘤抗原的筛选和肿瘤免疫的研究进入一个新阶段。肿瘤抗原的筛选与鉴定是临床特异性免疫治疗的前提和关键，随着对肿瘤生物学和肿瘤免疫学的深入认识，设计了基于体液免疫的重组cDNA文库的血清学分析（serological analysis of recombinant cDNA expression libraries，SEREX）方法，简便易行。

摘要：目的　克隆并表达人CD38抗原分子的胞外段基因。方法　采用RT PCR法 ,从高表达CD38抗原的Daudi细胞系中 ,扩增CD38全长cDNA ,并将其插入 pGEM T载体中。重新设计引物 ,从重组 pGEMT载体中 ,扩增CD38抗原分子的胞外段基因 ,再亚克隆到表达载体 pET2 8a(+) ,转化大肠杆菌BL2 1,用IPTG诱导表达。结果　经酶切鉴定及序列分析表明 ,克隆的CD38胞外段基因的序列与文献[1,2 ] 的报道完全一致。将该片段亚克隆到表达载体 pET2 8a(+) ,经IPTG诱导在大肠杆菌BL2 1中获得表达。结论　获得了人CD38抗原分子胞外段基因及其原核表达产物 ,对进一步制备单克隆抗体。

摘要：设计并合成了四种农药的人工半抗原,其结构经1H NMR表征。分别以牛血清蛋白和卵清蛋白为载体蛋白偶联得到对应的人工抗原,为建立四种农药的酶联免疫吸附分析方法奠定基础。

摘要：目的制备HSV-gB、gD蛋白串联表位重组蛋白,为单纯疱疹病毒(HSV)疫苗的研制提供新型抗原蛋白以及新的抗原制备方法。方法应用生物信息学软件laser gene DNASTAR分析HSV1-gB、gD和HSV2-gB、gD蛋白的抗原表位。选取9个表位,设计并合成表位串联重组蛋白编码基因X,构建其原核细胞表达重组体,在大肠杆菌BL21(DE3)表达该重组表位蛋白X,Western blot法(抗His标签)鉴定重组蛋白。结果构建了HSV-gB、gD蛋白串联表位重组蛋白X的原核表达体,在BL21菌中表达了X蛋白,Western blot法(抗His标签)鉴定了重组蛋白X。结论建立了制备HSV-gB、gD蛋白重组抗原表位蛋白的方法,为HSV疫苗的研制提供了可能的新型抗原蛋白。

摘要：本文选择、设计并合成了含天然HDAg上的部分片段的27肽,用于建立检测抗HD的ELISA方法。试验结果表明,包被的合成肽抗原与已知抗HD阳性冻存血清呈抗HD阳性反应;它能与天然HDAg竞争抗HD,具天然HDAg上相应片段的抗原活性;该合成肽抗原专一性强,与正常人血清,正常小鼠血清,单纯甲型、乙型、丙型肝炎抗体阳性血清无免疫交叉反应。用建立的ELISA法,检测1992年1～5月的部分献血员及住本科各型肝炎患者血清标本的抗HD。300例献血员中1例抗HD阳性(0.33％),其ALT增高2倍以上。非乙型肝炎41例,甲型肝炎52例,抗HD均阴性。各型乙型肝炎211例,抗HD阳性21例(9.95％)。其中,携带者2/82例(2.5％);急黄肝6/43例(13.95％);慢活肝6/60例(10.00％);重肝4/18例(22.20％);肝炎肝硬化3/8例(37.50％),结果与本科已往报告基本一致。

摘要：背景：基础研究表明，肝细胞移植可以改善急性肝功能衰竭动物的生化参数及提高生存率。但其广泛应用于临床之前，还有细胞来源和免疫排斥、移植肝细胞在受体中的分布、形态结构变化等方面的问题需要解决。目的：观察大鼠脾内移植SV40LT抗原基因转染肝细胞的早期组织形态学和超微结构特点。设计、时间及地点：随机对照动物实验，细胞病理学观察，于2001-03／12在卫生部肝胆肠外科研究中心实验室完成。材料：选用Wistar大鼠60只，制作脾内肝细胞移植模型。方法：将60只大鼠按随机数字表法分4组，每组15只。原代组、原代＋环孢素A组脾内注射原代肝细胞；SV40LT抗原基因组、SV40LT抗原基因＋环孢素A组脾内注射SV40TL抗原基因转染的肝细胞。移植前24h至术后14d，原代组、SV40LT抗原基因组每天经尾静脉注入0．5mL生理盐水：原代＋环孢素A组、SV40LT抗原基因＋环孢素A组每天经尾静脉注入环孢素A10mg／（kg·d）。主要观察指标：术后每天每组取1只大鼠，取脾脏行光镜及电镜检查，观察移植肝细胞的存活率、组织形态学和超微结构特点，共观察14d。结果：①与原代组、SV40LT抗原基因组比较，原代＋环孢素A组和SV40LT抗原基因＋环孢素A组移植肝细胞的组织形态学及超微结构改变较小，移植肝细胞的存活数增高（P〈0．05）。②SV40LT抗原基因＋环孢素A组、原代＋环孢素A组移植肝细胞的存活率在术后1～7d差异无显著性意义（P〉0．05）；术后8～14d，SV40LT抗原基因＋环孢素A组肝细胞存活率高于原代＋环孢素A组（P〈0．01）。结论：SV40LT抗原基因转染的肝细胞脾内移植后，在使用免疫抑制剂的情况下能长时间保持较高的存活细胞数，维持完整的组织形态学结构。