摘要：目的对细粒棘球蚴抗原b(EgAgb)的3个亚单位(EgAgb1、EgAgb2和EgAgb4)的反应性表位的结构进行预测分析并进行基因重组,鉴定构建的多表位重组抗原的反应性。方法用bioedit和Discovery Studio Visualizer分析软件和I-TASSER在线服务器对EgAgb1、EgAgb2和EgAgb4等3个亚单位抗原序列及其不同组合方式的组合序列进行分析和结构预测。选择结构预测评分较高的表位或亚单位组合方式进行基因重组。设计特异性重叠引物,用重叠延伸PCR技术扩增目标序列。将目标序列克隆至pET32a(+)载体中构建表达质粒表达重组蛋白,表达产物经纯化后即为多表位重组抗原。采用蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定多表位重组抗原的反应性。结果结构预测显示,EgAgb1、EgAgb2和EgAgb4等3个亚单位的主要表位均呈"Z"字型结构,且主要表位区域亦均位于序列的中部;对拟进行组合的3个EgAgb亚单位和4个主要表位(KK36、RK30、b4-2和b4-3)的57种不同的组合方式进行了结构预测,选择6种组合方式进行重组表达。对6个多表位重组抗原(MEA-8、MEA-20、MEA-26、MEA-36、MEA-49和MEA-52)进行的Western blotting分析显示,多表位重组抗原与细粒棘球蚴病患者血清的反应条带明显强于Agb亚单位抗原。结论构建的6个多表位重组抗原与细粒棘球蚴病患者血清的反应性明显强于EgAgb亚单位抗原。

摘要：目的研究细粒棘球绦虫抗原b(EgAgb)8 ku 1和3亚单位基因家族成员(EgAgb8/1、EgAgb8/3)在虫体发育各阶段(虫卵、棘球蚴生发层、原头蚴及成虫)基因表达的差异,为包虫感染中间宿主和终末宿主的免疫学诊断筛选期特异性优势表达抗原。方法分别从细粒棘球绦虫成虫、虫卵、原头蚴和棘球蚴生发层提取总RNA,用Avian Myelo-blastosis Virus Reverse Transcriptase XL反转录成cDNA,根据EgAgb8/1和EgAgb8/3序列设计跨越内含子的基因特异性引物。基因表达差异应用SYbR GreenⅠreal-time PCR进行定量分析,并用内参对照基因actinⅡ来标准化定量结果。结果Real-time PCR检测显示,EgAgb8/1在棘球蚴生发层大量表达,SQ/Actin=68.874;EgAgb8/3在成虫阶段大量表达,SQ/Actin=1 905.512。结论EgAgb 2个亚单位基因的表达在虫体发育各个阶段显现出明显差异。提示EgAgb8/1可作为包虫感染中间宿主免疫学诊断最佳候选目的抗原,而EgAgb8/3可作为包虫感染终末宿主免疫学诊断的靶抗原。EgAgb 2个亚单位基因的阶段差异表达可能与其虫体发育不同阶段特有的生物学功能有关。