摘要：目的探讨基因芯片技术对于颅内感染致病菌快速检测的应用价值。方法选择4种常见致病菌以及6种常见耐药基因的特异DNA序列设计相应的引物与探针，对30例颅内感染患者的脑脊液标本（脑脊液培养阳性12例，阴性18例）进行多重PCR扩增、基因芯片检测，进行菌种鉴定和耐药基因检测，与脑脊液细菌培养及药敏检测结果进行比较。结果15例标本鉴定出菌种并检出耐药基因；8例未鉴定出菌种但检出细菌及耐药基因；7例未检出细菌及耐药基因。结论基因芯片可以相对灵敏、快速地用于颅内感染患者脑脊液中致病菌检测。

摘要：近年来,鲍曼不动杆菌的耐药问题日趋显著。科学家通过改良现有抗生素结构或改变作用靶点的方法,针对耐药菌尝试设计新型抗生素。本文总结了新型抗生素氟环素类、铁载体头孢菌素、新型氨基糖苷类、二氮杂二环辛烷衍生物、多黏菌素B衍生物、基于联苯乙炔的LpxC抑制剂在耐药鲍曼不动杆菌感染治疗中的作用机制、抗菌活性以及安全性。

摘要：目的 从耐亚胺培南革兰阴性杆菌中筛查金属β内酰胺酶（MBL）及1型新德里金属蛋白酶（NDM）-1,为NDM-1携带菌感染的治疗及防控提供试验依据.方法 回顾性对广州市妇女儿童医疗中心2010年从7例患者分离的7株耐亚胺培南革兰阴性杆菌进行NDM-1基因筛查,使用亚胺培南-EDTA双协同试验筛查MBL阳性菌株,设计特异性引物PCR扩增NDM-1基因,并将其克隆入pMD-T载体,转化Dh5a,提取重组质粒进行EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切鉴定,并将重组质粒菌进行测序验证.结果 从7株亚胺培南耐药革兰阴性杆菌中筛出2株MBL阳性株,分别为1株鲍曼不动杆菌和1株琼氏不动杆菌,其中MBL阳性琼氏不动杆菌PCR扩增出NDM-1目的产物,将NDM-1成功克隆入pMD-T,双酶切鉴定见目的条带,重组质粒测序验证了其为NDM-1基因,序列同源性分析显示其与已知NDM-1基因序列高度一致（99.9％）,813碱基中仅第468核苷酸G-A突变,其演绎的氨基酸序列与已知NDM-1完全一致,其序列已登录GenBank,登录号为HQ603057.药敏试验显示此琼氏不动杆菌对除氨曲南、头孢哌酮/舒巴坦外的其他所测试的β内酰胺类抗生素均耐药,但对替加环素、氟喹诺酮、氨基糖苷类敏感.结论 在住院儿童血液中筛查出携带NDM-1琼氏不动杆菌,提示临床试验室应加强亚胺培南耐药革兰阴性杆菌NDM-1基因的筛查,为NDM-1携带菌感染的治疗及防控提供试验依据.

摘要：目的 建立基于CycleavePCR技术的肺炎支原体及其大环内酯类耐药突变株快速检测方法.方法 收集102株分离自2005-2008年上海市交通大学附属儿童医院住院患儿的肺炎支原体及136份2009年11-12月上海市交通大学附属儿童医院呼吸道感染的住院患儿经鼻采集鼻咽部痰标本,根据肺炎支原体无突变敏感株与突变耐药株23S rRNA基因2063/2064位的碱基差异及上下游保守序列分别设计新型特异性探针（Cycling探针）及引物,建立肺炎支原体及其大环内酯类耐药突变株检测方法,以含有被检测靶序列的重组质粒为阳性对照,以常见呼吸道病原菌DNA为阴性对照,评价其敏感度及特异度.采用自建方法检测所有标本,并与常规PCR及测序结果比较.结果 该方法可准确检出并鉴别大环内酯类敏感及耐药突变株阳性对照,102株临床分离株中83株对大环内酯类耐药,测序表明82株发生23S rRNA基因A2063G突变,1株A2064G突变,与CycleavePCR检测结果相符,136份痰标本检测结果也与常规PCR扩增及测序结果相符.所有阴性对照样品均未出现假阳性.与常规PCR及测序方法相比,CycleavePCR法的敏感度和特异度均达100%.该方法的检测下限为10拷贝/PCR反应,扩增检测可在1.5 h内完成.结论 建立了一种基于CycleavePCR技术的肺炎支原体及其大环内酯类耐药突变株快速检测方法,可同步提供病原菌及其耐药性信息,为肺炎支原体感染诊断及临床合理选用抗菌药物提供参考.

摘要：目的建立一种寡核苷酸微阵列检测幽门螺杆菌23S rRNA基因A2142G、A2143G及C2182T点突变的方法。方法根据23S rRNA基因A2142G、A2143G及C2182T突变位点设计相应探针，样本经不对称PCR扩增后，其产物与芯片杂交。非荧光标记引物扩增PCR产物克隆至T载体，测序验证芯片结果，并结合临床最低抑菌浓度实验判断该方法的正确性。结果寡核苷酸微阵列技术与测序检测幽门螺杆菌23S rRNA基因多态性结果完全一致。经培养及鉴定幽门螺杆菌阳性的54份标本，杂交结果显示A2142位点均为野生型（54／54）；A2143G突变率为11．11％（6／54），尚未发现A2143C和A2143T的突变；C2182T突变率为12．96％（7／54），尚未发现C2182A和C2182G的突变，其余均为野生型，上述结果与菌株体外试验MIC结果完全一致。结论建立一种寡核苷酸微阵列技术检测幽门螺杆菌克拉霉素耐药的23S rRNA基因多态性的方法，可以高通量并直接检测胃黏膜而不需进行细菌培养，推动个体化治疗方案的实施。

摘要：目的考察合肥市第一人民医院社区获得性肺炎(community acquired pneumonia,CAP)和医院获得性肺炎(nosocomical pneumonia,NP)患者致病菌耐药性。方法收集2010年2月～2013年2月在合肥市第一人民医院确诊为CAP和NP患者的痰液标本,实验室分离细菌,鉴定致病菌菌种以及检测耐药性。结果 CAP和NP患者主要致病菌均为G-,主要包括肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌,其中肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌分别占CAP组患者致病菌总数的43.7%、11.2%;而铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌则分别占NP组致病菌总数的31.7%、14.8%;主要致病G+菌和G-菌对临床常用抗生素均具有一定耐药性,其中对致病G+菌敏感性相对较高的抗菌药有万古霉素和莫西沙星,耐药率均低于20%;对致病G-菌敏感性相对较高的抗菌药为阿米卡星、亚胺培南、莫西沙星和头孢匹罗。结论及早的致病菌分析和耐药检测能提高抗菌药对CAP和NP的疗效。

摘要：目的了解多重耐药肺炎克雷伯菌的基因型和整合子存在情况。方法设计TEM、SHV和CTX-M型及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因特异性引物,并将聚合酶链反应(PCR)扩增获得β-内酰胺酶编码基因,分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型。结果该多重耐药株与TEM-1、SHV-12及CTX-M-3型编码基因序列的同源性为100%,Ⅰ类整合酶基因检测阳性,Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因检测阴性。结论Ⅰ类整合子存在产ESBLs肺炎克雷伯菌中。