摘要：目的:分析设计抗菌肽MagaininⅡ多拷贝串联体表达质粒并进行构建验证。方法:根据GeneBank中提供的抗菌肽MagaininⅡ氨基酸序列,结合表达菌株毕赤酵母密码子偏爱性,设计出MagaininⅡ的表达序列,并于其两端插入一对同尾酶SalⅠ和XhoⅠ的酶切识别序列及裂解位点AGA,人工合成后插入质粒载体pUC19中,利用同尾酶法构建抗菌肽MagaininⅡ多拷贝串联体。结果:经M13引物进行PCR及SalⅠ/PstⅠ双酶切进行鉴定,成功构建出抗菌肽MagaininⅡ1-5拷贝串联体重组质粒。结论:该研究设计的MagaininⅡ串联体构建方法可行。

摘要：背景:抗菌肽作为一种可从自然来源提取并用于对抗抗生素耐药细菌的潜在候选物,引起了科学家们的广泛关注,熟悉抗菌肽的抗菌机制有利于将抗菌肽的临床应用。目的:综述近年来对抗菌肽抗菌机制的研究进展。方法:由第一作者应用计算机检索PubMed、Springerlink、Web of Science、ScienceDirect等数据库2013年1月至2019年3月发表的文献,选择与抗菌肽抗菌机制及其研究进展相关的文献。结果与结论:抗菌肽是一类特殊的分子,为具有广谱抗菌性的宿主防御多肽,在一些生物体中其被认为是先天免疫系统的重要组成部分。抗菌肽的抗菌机制从作用模式上可以分为直接致死和免疫调节2类主要的模式,直接致死作用机制可进一步分为膜靶向和非膜靶向。与此同时基于抗菌肽的广泛应用,预计在葡萄球菌、口腔细菌(包括链球菌)和肠道细菌(包括沙门氏菌)等微生物环境中已发展出许多抵抗策略,主要分为被动抵抗和诱导或适应性抵抗机制。在未来的研究和应用中,阳离子肽是解决多重耐药性日益增多的一个有效选择,除了应设计新的方法来对抗细菌对抗菌肽的耐药性外,也应该预防由常规抗生素产生的耐药性。

摘要：根据抗菌肽Fowlicidin-3氨基酸序列,选用大肠杆菌(Escherichia coli)偏嗜密码子,设计合成117bp的Fowli-cidin-3a和102bp的Fowlicidin-3b基因。将这2个基因克隆到突变载体,构建出表达载体pET-32a-C-Fowlicidin-3a和pET-32a-Tev-C-Fowlicidin-3b,分别转化至*** BL21Rosetta-2中,IPTG诱导表达融合蛋白Trx-Fowlicidin-3a和Trx-Fowlicidin-3b并进行纯化。结果表明:肠激酶裂解Trx-Fowlicidin-3a和Tev酶裂解Trx-Fowlicidin-3b效率都较高,获得的裂解液都对指示菌*** DH5α显示出抑菌活性。Fowlicidin-3a和Fowlicidin-3b对指示菌*** DH5α的最小抑菌浓度均为2μ***-1。

摘要：抗菌肽是生物体在抵抗外来微生物入侵时产生的一类防御性小肽,在自然界分布广泛,是机体先天免疫系统的重要组成部分。与传统的抗生素相比,抗菌肽分子质量小、水溶性好、热稳定性好、抗菌机理独特、具有广谱的抗细菌、抗病毒、抗真菌、抗肿瘤等活性,且不易诱发细菌产生耐药性等特点。随着细菌耐药问题不断出现及新型抗菌肽的陆续发现,抗菌肽的抗菌活性、溶血性及细胞毒性的机制已成为研究的热点。笔者主要对抗菌肽的分子改造及活性机制的最近研究进展进行阐述,以期为抗菌肽的分子设计改造和应用提供科学的参考依据。

摘要：抗菌肽是一类有望解决全球范围内抗生素耐药性问题的新型抑菌多肽。抗菌肽主要有3种抑菌机制:其一是针对细菌细胞膜作用,膜作用主要针对两种不同菌膜结构特性的细菌,革兰氏阴性菌外膜富含脂多糖,革兰氏阳性菌细胞壁富含磷壁酸,抗菌肽可靶向作用于此类细菌菌膜结构特定组分。此外,抗菌肽可抑制细菌生物被膜形成,分解已形成细菌生物被膜。抗菌肽作用于特异性酶或靶向作用于DNA产生抑菌效果,其抑制作用可抵抗细菌耐药性产生。基于抗菌肽改变菌膜结构并抑制细菌外膜及酶合成的特性,此杀菌策略已应用于抗菌药物设计。

摘要：抗菌肽是基因编码、经外界诱导产生的一类多肽。在抗生素引发"耐药性"难题的时代,抗菌肽以广谱杀菌、不易产生耐药性、抗肿瘤、抗病毒等特点而拥有超越抗生素、造福人类的巨大潜能。然而,天然抗菌肽还需进行增强抗菌性和稳定性、降低细胞毒性等改造,并通过工业化改良实现大规模生产。因此现从抗菌肽改造设计、生产应用等最新研究做较为详细的综述。

摘要：为获得Omiganan抗菌肽并研究其抑菌活性,根据Omiganan抗菌肽的一级结构(NH2-ILRWPWWPWRRK-COOH),通过基因工程技术,参考大肠杆菌和毕赤酵母偏爱密码子原则,分别获得Omiganan核苷酸序列,再以Omiganan核苷酸序列为模板,设计特异性引物,通过PCR技术扩增Omiganan基因,分别与pET32a表达载体和pPIC9K连接构建pET32a-Omiganan原核表达载体和pPIC9K-Omiganan毕赤酵母表达载体,对含pET32a-Omiganan重组质粒的菌株分别采用IPTG 25℃,IPTG 37℃2种温度和自诱导方式表达获得Omiganan重组蛋白,对含pPIC9K-Omiganan毕赤酵母菌株采用1%甲醇诱导获得Omiganan抗菌肽。结果表明,自诱导14 h后Omiganan重组蛋白的表达量最高,IPTG 25℃,IPTG 37℃2种温度皆能诱导Omiganan重组蛋白的表达,但两者之间无显著差异。通过毕赤酵母表达的Omiganan抗菌肽对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有很强的抑菌活性。

摘要：随着传统抗生素的大量使用,许多病原微生物对抗生素产生了耐药性。不断寻找新一代的抗菌药物已经成为制药科研工作者的共有目标。阳离子抗菌肽具有相对分子量小、抗菌谱广、热稳定性好和抗菌机理独特等优点,有望成为新一代的抗菌药物。最大限度地提高其活性和稳定性、降低毒性和成本,是抗菌肽新药开发的首要问题。用分子设计手段改造抗菌肽已成为解决这一问题的关键。国内外的研究者在抗菌肽的分子设计方面做出了大量的努力,本文对抗菌肽的人工设计方法进行综述,分析了各种设计方法的优缺点,同时对抗菌肽分子设计的发展前景进行了展望。

摘要：目的构建高活性、低毒性的新型抗菌肽,对其抗变异链球菌及其他口腔致病菌的活性进行评价,探讨其在防治龋病中的潜在应用价值。方法以天然抗菌肽Histatins5的类似物Dhvar4为模版合成新型抗菌肽KR-1、KR-2。通过所设计抗菌肽对变异链球菌的最小抑菌浓度(MIC)实验,兔血红细胞溶血试验以及CCK-8法,筛选出高活性、低毒性的目标抗菌肽;使用96孔板培养变异链球菌生物膜,分为实验组(用浓度梯度为0.6×、0.8×、1×、2×MICs的KR-1进行处理)与阳性对照组(用浓度梯度为0.6×、0.8×、1×、2×MICs的洗必泰进行处理),通过结晶紫染色定量法观察生物膜量的改变;使用10×MIC浓度KR-1作用于变异链球菌生物膜后通过激光共聚焦显微镜观察结构的改变;通过KR-1作用口腔链球菌后杀菌所需的时间探讨目标抗菌肽对口腔链球菌的抗菌效率。结果实验测得KR-1及KR-2的MIC分别为3.2μmol/L和12.8μmol/L,有效浓度下,兔血红细胞溶血率分别为0.35%和48.8%,24 h牙龈成纤维细胞存活率分别为72.96%和21.94%,将活性较高、生物相容性较好的KR-1作为目标抗菌肽;经结晶紫染色后测定KR-1的50%生物膜最小抑制浓度(MBIC50)低于1.92μmol/L,且浓度为2.56μmol/L时效果优于阳性对照组洗必泰(P=0.001),共聚焦显微镜下观察可见经KR-1处理后生物膜结构疏松;KR-1在5 min内可杀灭约90%细菌。结论KR-1抗菌肽具有较强的抗菌活性和较低的毒性,且有良好的抗变异链球菌生物膜作用。

摘要：【目的】根据螺旋轮模型设计以亮氨酸(L)为疏水面,赖氨酸(K)为亲水面的新型α-螺旋抗菌肽LK,并对该抗菌肽的生物学活性进行检测。【方法】利用圆二色光谱分析LK的二级结构,同时,评价LK的抑菌活性、稳定性和细胞选择性。【结果】在模拟细胞膜的环境中LK呈α-螺旋型结构。LK对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有很强的抑菌活性,最小抑菌浓度(MIC)在2-4μmol/L之间。LK具有很强的酸碱盐稳定性。肽浓度为2-4μmol/L时,LK表现出较低的溶血活性和细胞毒性。【结论】根据螺旋轮模型结构,以疏水性的L和正电荷性的K设计的新型抗菌肽LK具有较高的细胞选择性及稳定性,具有替代抗生素的发展潜力。