摘要：目的针对G^(-)菌外膜阻挡裂解酶发挥作用的情况,设计抗菌肽-裂解酶双机制抗菌蛋白,并优化表达体系,获得可溶性表达的抗菌蛋白质。方法采用同源模建方法将绵羊骨髓细胞抗菌肽与源自噬菌体JD010的裂解酶融合设计新的抗菌蛋白质(SMAP-Lysin)。通过构建pET30a、pBV220表达载体的方式,利用小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)的促溶作用,促进SMAP-Lysin的可溶性表达。结果仅在pBV220载体上,SMAP-Lysin有明显的表达,但其表达过程会诱导宿主细菌的死亡,无法有效分离纯化目标蛋白质;通过SUMO标签的促溶作用,可实现SMAP-Lysin的融合表达,且SUMO肽段的融合避免了宿主细菌的死亡;采用亲和层析,酶切步骤处理后,可得到纯化的抗菌蛋白质SMAP-Lysin。结论大肠杆菌是用于表达重组蛋白质的重要工程菌,采用SUMO标签融合表达的方式可有效降低抗菌蛋白对表达菌宿主的毒性,提高抗菌蛋白的可溶性表达,有利于抗菌蛋白的纯化。

摘要：通过DEAE SephadexA 5 0离子交换层析和SephacrylS 2 0 0分子筛层析并采用抑菌活性和SDS PAGE跟踪检测 ,从多粘类芽孢杆菌 (Paenibacilluspolymyxa)WY110菌株中分离纯化到一种对稻瘟病菌具有拮抗活性的抗菌蛋白P2 (分子量约 2 6kD)。平板抑菌试验表明 ,在PDA培养基上 1 5 μg纯化的P2 蛋白即可有效地抑制稻瘟病菌菌丝生长 ,并对所测试的稻瘟病菌不同菌株均表现出抑菌活性。对P2 蛋白的N 端测序结果表明 ,N 末端 2 4个氨基酸序列为H2 N Ala Asn Val Phe Trp Glu Pro Leu Ser Tyr Tyr Asn Pro Ser Thr Trp Gln Lys Ala Asp Gly Tyr Ser Asn 。以此为靶序列在网上用BlastP程序对蛋白质序列数据库进行了类似性检索 ,发现其与来源于芽孢杆菌的β 1,3 1,4 葡聚糖酶前体具有很高的同源性。进一步用此酶的特异底物地衣多糖进行了定性检测 ,验证了P2 蛋白具有 β 1,3 1,4 葡聚糖酶的活性。在此基础上 ,根据P2 蛋白N 末端氨基酸序列及此酶C 端保守性序列设计合成了两端引物 ,以WY110基因组DNA为模板 ,通过PCR高保真扩增获得了P2 蛋白编码基因的全序列 ,并克隆到pMD18 T载体上。核苷酸序列分析表明 ,其 5′端 72个核苷酸序列与蛋白N 端已知的 2 4个氨基酸序列完全吻合 ,序列全长为 6 36bp (GenBank登录号 :AF2

摘要：解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)12-7是从发病棉田土壤中分离得到的1株生防细菌,其对棉花黄萎病致病菌大丽轮枝菌Verticillium dahliae Kleb.V190具有明显的拮抗作用,已证明其抗菌物质为蛋白质。采用响应面法对该生防菌株的产抗菌蛋白条件进行优化,以期为棉花黄萎病生物农药的研制开发以及抗菌蛋白的后续研究奠定基础。以发酵液上清液对大丽轮枝菌的抑菌圈面积为考察指标,首先采用单因子试验考察培养时间、温度、初始pH、碳源、氮源、无机盐等因素对菌株12-7发酵产抗菌蛋白的影响;再根据响应面分析法的基本原理和方法,对发酵条件进行优化。得出该菌株产抗菌蛋白的最优发酵培养基和培养条件为:1.5%(质量分数)蔗糖、1.5%(质量分数)大豆蛋白胨、0.3%(质量分数)NaCl、0.1%(质量分数)K2HPO4、初始p H7.3的培养基,31℃发酵培养60 h。优化后抑菌圈面积从试验设计初期的171.95 mm2提高至320.3 mm2,且经过验证试验证实预测值与实际值之间具有较好的拟合度。

摘要：在前期研究绿豆中的系列抗菌蛋白——非特异性脂转移蛋白、几丁质酶、溶菌酶、苹果酸脱氢酶和胰蛋白酶抑制剂的基础上,从豆科植物入手,扩展到植物界和整个生物界防御蛋白的多样性及进化趋势。分析并讨论植物防御蛋白的色谱行为,植物防御蛋白的生物多样性,生物界防御蛋白的生物多样性和生物界防御蛋白的进化趋势。在理论上验证了生物界功能分子效率及进化趋势的基本原理,以期为蛋白质工程及功能分子设计提供有价值的思路与线索。

摘要：本实验拟采用Plackett Burman(PB)试验设计筛选出影响Bacillus axarquiensis TUBP1产抗菌蛋白关键因素,并采用响应面设计中Box-Behnken(BB)实验设计对其产抗菌蛋白最佳配比进行优化。本文使用Plackett Burman设计对影响*** TUBP1产抗菌蛋白的8个因素进行筛选,得到影响抗菌蛋白产量显著的因素为葡萄糖、蛋白胨和发酵p H。在此基础上进一步采用Box-Behnken设计对这3个显著因素的最佳配比进行优化,得到葡萄糖、蛋白胨、p H最佳配比为葡萄糖2.53%、蛋白胨1.76%和p H7.17,与优化前相比蛋白产量提高了34.55%。

摘要：查阅近10余年国内外相关文献,总结归纳从鲎体内纯化的各种抗菌抗内毒素蛋白的结构和生物活性。较为全面地叙述了鲎的先天防御体系以及从其体内提取纯化的抗内毒素因子、各种外源凝集素和C反应蛋白的结构特征和抗菌抗内毒素的生物活性,指出了该类生物蛋白在抗菌抗内毒素药物开发应用中的重要价值。这些蛋白可以作为理想的药物先导化合物进行深入开发研究。它们的结构也为基于结构的新型药物设计合成提供了丰富的数据资料。

摘要：目的　从人的子宫颈黏液分离和鉴定新抗菌多肽,探讨子宫颈黏液抗菌机制。方法　用5%乙酸提取人子宫颈黏液可溶物,应用电泳凝胶抗菌蛋白分析法分析其抗菌蛋白,制备酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳及反相高效液相色谱分离纯化抗菌多肽。凝胶琼脂糖弥散法抗菌检测抗菌活性。纯化的抗菌多肽进行氮端氨基酸序列测定,根据其序列设计简并引物,利用简并聚合酶链反应(PCR)技术扩增其全长cDNA。通过BLAST硷基比对程序分析比较与已知蛋白的同源性。进一步应用常规基因重组技术构建其原核表达质和制备重组多肽。采用最小抑菌浓度和最小杀菌浓度检测重组多肽的抗菌效能。结果　从子宫颈黏液中分离纯化到一个具抗菌活性的多肽,通过蛋白测序、简并PCR及BLAST等方法鉴定该蛋白为HMGN2高游动性蛋白。制备获得重组HMGN2多肽,重组HMGN2抗大肠杆菌和铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度分别为10 .42μg/ml±3. 13μg/ml和27. 78μg/ml±8 .33μg/ml,与人中性粒细胞防御素相当;最小杀菌浓度分别为20 .83μg/ml±6 .25μg/ml和55 .56μg/ml±16 .67μg/ml。结论　除已知的抗菌肽外,HMGN2亦可能是宫颈黏液含有的抗感染效应分子之一。

摘要：目的:从人的子宫颈粘液分离鉴定抗菌多肽,探讨子宫颈粘液抗菌机制.方法:用5%乙酸提取人子宫颈粘液可溶物,应用电泳凝胶抗菌蛋白分析法(gel overlay assay)分析其抗菌蛋白,制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳(AU-PAGE)及反相高效液相色谱(HPLC)分离纯化抗菌多肽.凝胶琼脂糖弥散法抗菌检测抗菌活性.纯化的抗菌多肽进行氮端氨基酸序列测定,根据其序列设计简并引物,利用3'-RACE-PCR技术扩增其全长cDNA.