摘要：目的　基于整合子在细菌耐药机制中的重要作用 ,对来自正常人体内耐药沙门菌的整合子分布及其结构特征进行分析。方法　应用PCR方法 ,设计第一类整合酶基因intI1和耐药基因盒的特异性引物 ,用PCR方法检测整合子阳性菌株并对其整合的耐药基因进行测序和序列分析。结果　发现 1株S .hadar和 3株S .tshiongwe为第一类整合酶阳性菌株。耐药基因盒进行扩增的结果 ,从 2株中分别得到 10 0 9bp的扩增产物。 1株得到 16 6 4bp的扩增产物。 1株菌得到 10 0 9bp和 16 6 4bp的扩增产物。序列分析结果表明 ,10 0 9bp的扩增产物为携带aadA2 ,对氨基糖苷类抗生素药物壮观霉素、链霉素产生耐药的基因盒 ;16 6 4bp为携带aadA5和dfr17,对氨基糖苷类抗生素药物壮观霉素、链霉素和磺胺类药物甲氧氨苄嘧啶产生耐药的基因盒。结论　首次揭示了健康人携带由整合子介导的耐药菌这一现象 。

摘要：目的第一类整合子在介导细菌耐药中起重要作用。本研究采用反向PCR方法对第一类整合子旁翼序列进行分析。方法以具有典型第一类整合子结构的茨昂威沙门菌(***)S191为研究对象,分别用EcoRⅤ和HindⅢ两种限制性内切酶对基因组DNA进行酶切。并对酶切产物进行自身环化,通过设计第一类整合酶基因的反向引物来扩增第一类整合子的旁翼序列。结果分别扩增得到1500和6000bp左右大小的第一类整合子旁翼序列。结论进一步明确了第一类整合子的结构,并为第一类整合子调控因子的分析和克隆奠定研究基础。

摘要：目的确定临床分离变形杆菌中不典型第1类整合子的结构。方法在26株第1类整合酶基因阳性可变区扩增失败的变形杆菌临床分离株中，选取6株通过反向PCR扩增第1类整合酶基因周围DNA片段，PCR产物测序结果通过BLAST进行比对分析，确定同源目标序列后，查看GenBank该提取码对应序列文件靶序列周围序列，再根据周围序列设计合成引物进行重叠PCR并测序验证。结果通过反向PCR及重叠PCR测序分析，26株变形杆菌临床分离株中，25株细菌第1类整合子可变区结构全部或部分确定，其中22株细菌第1类整合子可变区结构为estX-psp-aadA2-cmlA1-aadA1a-qacI-tnpA-sul3，另3株第1类整合子可变区分别为estX-psp-aadA2-cmlA1、dfrA14、IS26，均缺失3′保守区。结论反向PCR可用于临床菌株中不典型第1类整合子结构分析，在临床分离变形杆菌中首次检出基因盒psp及基因盒组合estX-psp-aadA2-cmlA1-aadA1a-qacI-tnpA-sul3、estX-psp-aadA2-cmlA1。

摘要：为了建立一种能同时检测1类整合子、4类超级整合子和1型插入序列共同区的多重PCR检测方法,根据Gen Bank中1类整合子整合酶基因int1、4类超级整合子整合酶基因intSXT和1型插入序列共同区转座酶基因ISCR1的序列,应用Primer Plex 2.61设计3对特异性引物,通过改变引物浓度和退火温度对多重PCR体系进行了优化。此后,评价了所建立多重PCR体系的特异性和灵敏度,并应用于222株海水养殖源弧菌中3种整合子相关元件的检测。结果显示,设计的3对引物能分别单独且特异性地扩增出569 bp、430 bp和651 bp的目的条带;当int1、intSXT和ISCR13对引物(10 pmol/μL)的体积依次为0.3μL、0.6μL和0.6μL,退火温度为50℃时,多重PCR体系能特异性地扩增出3个条带清晰、区分度良好的目的条带,方法的灵敏度达到0.02 ng/μL弧菌基因组模板DNA;利用所建立的方法对222株临床分离弧菌进行3种整合子元件检测得到的结果与文献报道的单引物检测结果一致。从上述研究结果可以看出,该多重PCR方法能快速准确地检测Int1、SXT和ISCR1,适用于整合子相关元件流行监测及整合子相关的耐药性研究。

摘要：目的建立快速筛选细菌耐药整合子的分类方法,并对21株来自临床的菌株进行整合子筛选和分类。方法根据G enB ank/EM BL内的第一、第二和第三类的整合酶序列,通过软件C lustalW的多重比对分析设计出各类整合子的特异性引物,用对照菌株建立多重PCR方法并对21株临床菌株进行PCR扩增,通过其PCR扩增产物片段大小的不同进行整合子分类。结果对照菌株实验结果显示,21株临床分离菌株中,15株在565bp处有扩增片段,即为含有第一类整合酶基因;4株在403bp处有扩增片段,即含有第二类整合酶基因;1株在565bp和403bp处均有扩增片段,提示其同时含有第一、二类整合酶基因;1株没有得到任何扩增片段,即不含有这三类整合酶基因;在被测菌株中未发现第三类整合酶基因的阳性菌株。结论本文报道的筛选细菌耐药整合酶基因分类的多重PCR方法效果良好,具有可行性,为更加全面细致研究整合子类型以及整合子介导的细菌耐药机制提供了一种简单易行、快捷有效的方法。

摘要：为研究自乳房炎奶牛分离的大肠杆菌整合子携带情况与其耐药表型之间的相关性,在获得菌株对20种抗菌药物耐药谱的基础上,设计Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子简并引物扩增菌株的整合酶基因,并结合内切酶限制性片段长度多态性分析,调查菌株携带的各类整合子,然后进一步扩增菌株整合子的基因盒插入区,测序分析其携带的基因盒。结果发现,80株自奶牛乳房炎病例分离的大肠杆菌中有37株检出Ⅰ类整合子(检出率46.25%),未检出Ⅱ类和Ⅲ类整合子。Ⅰ类整合子阳性菌中31株扩增出3种不同大小的基因盒插入区片段,插入基因盒主要是二氢叶酸还原酶基因(dfr)和氨基糖苷类抗生素耐药基因(aadA),最主要的基因盒排列为dfrA17-aadA5。分析表明,Ⅰ类整合子集中分布在耐受7种以上抗菌药物的菌株中,与菌株的多重耐药性高度相关,而菌株Ⅰ类整合子携带的耐药基因盒与其耐药谱缺乏对应关系。

摘要：目的了解临床分离铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药特征;调查金属β-内酰胺酶在铜绿假单胞菌的流行状况和基因型以及与整合子之间的关系。方法收集广东省4家三甲医院临床分离的铜绿假单胞菌,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验;双纸片协同法和增效法筛选金属β-内酰胺酶表型阳性菌株;设计合成金属β-内酰胺酶和整合子的引物序列进行PCR扩增和测序分析,检测金属β-内酰胺酶基因型并分析其与整合子之间的关系。结果 287株铜绿假单胞菌对11种抗生素的耐药率分别为:亚胺培南(33.80%),美罗培南(33.45%)、头孢他啶(27.87%)、头孢吡肟(36.24%)、庆大霉素(45.30%)、阿米卡星(36.94%)、环丙沙星(33.10%)、左氧氟沙星(37.63%)、氨曲南(47.39%)、哌拉西林(35.19%)、哌拉西林/三唑巴坦(28.57%);多重耐药菌占34.84%(100/287),泛耐药菌株占9.41%(27/287);共有9株铜绿假单胞菌呈金属β-内酰胺酶表型阳性,其中2株产IMP-9型MBL,1株产IMP-25型MBL,4株产VIM-2型MBL;有8株金属β-内酰胺酶表型阳性菌株携带了I类整合子,但只有2株成功扩出可变区,其中1株携带了IMP-9基因。结论铜绿假单胞菌耐药情况严重,本地区铜绿假单胞菌中MBLs的基因型以IMP-9、IMP-25和VIM-2为主;MBLs的基因环境较为复杂,部分MBLs为整合子所携带。

摘要：整合子在细菌获得和传播耐药基因方面起着重要的作用。为了建立一种快速检测细菌整合子的方法,根据已知基因序列,通过分析筛选出三种整合子(Ⅰ类、Ⅱ类、Ⅲ类)的特异保守序列,设计LAMP引物组,建立多重LAMP检测方法。结果表明,该方法可以特异性扩增含有整合子的参考菌株。对365株不同来源分离株的检测表明,共有192株检测到整合子,其中Ⅰ类整合子阳性比例最高(187/365),其次是Ⅱ类整合子(5/365),未检测到Ⅲ类整合子,也未发现Ⅰ类整合子和Ⅱ类整合子均为阳性的菌株。

摘要：随着合成生物学应用领域的拓展，用于快速构建全新生化反应途径的策略和工具将越来越有价值。复杂的生物学途径的纯理性化设计一直受限于现有的知识，从随机基因文库中选择基因元件的最佳排列将是用于成功基因操纵的一个有用方法，因此本研究提出利用一个天然的细菌位点特异性重组系统即整合子的天生基因改组活性构建并优化代谢途径。

摘要：为探究施用有机肥对土壤中抗性基因和整合酶基因分布的影响及其与土壤环境因子的相关关系,利用高通量PCR技术监测了鸡粪有机肥施用120 d后土壤中四环素类抗性基因、大环内酯类抗性基因、整合酶基因和土壤理化性质的变化情况。研究结果表明,施肥土壤的电导率、pH、有机质含量均明显增加,而土壤氧化还原电位由217.27 mV降低到154.47 mV。施肥土壤中钾、氮、磷、铅、铜和锌含量均上升。施加鸡粪有机肥120 d后,土壤中tetM、tetQ、tetW、tetG和tetX 5种四环素类抗性基因相对丰度分别增加了2.90、0.97、6.80、0.98和0.94倍,而erm35、ermB、ermT、ermX和ermF 5种大环内酯类抗性基因相对丰度分别增加了0.98、136.68、0.95、2.89和2.89倍;但erm36相对丰度降低了0.75倍,其中施肥后土壤中ermB丰度最高而erm36丰度最低。施用鸡粪有机肥后,土壤中intI1和intI3的丰度分别降低了4.71×10-5和2.57×10-7,而intI2的丰度增加了3.74×10^(-6)。Network分析发现intI3与除ermB外的基因均呈显著负相关关系(R=-1.00,P<0.05)。