摘要：CA 6DL2-35发动机台架试验的建立,目的是解决因烟炱引起的粘度增长而导致油品的使用性能下降,使发动机无法正常运行。通过技术人员的前期论证,结合CA 6DL2-35发动机设计特点,选用了国内的测功机和控制系统,并设计了操作参数和控制程序。通过所选油品的验证,建立的CA 6DL2-35发动机台架试验具有一定的重复性和区分性,操作参数控制正常,运行平稳,已在重负荷柴油机油研究与开发中得到应用。

摘要：为建立一种快速准确检测鸡传染性支气管炎病毒的方法,根据鸡传染性支气管炎病毒的核衣壳蛋白基因进行引物和探针设计,建立了一种能够检测鸡传染性支气管炎病毒的实时荧光RT-PCR方法,并对该方法进行特异性和灵敏度检测,同时与国家标准检测方法进行对比。结果显示,本检测方法特异性好,不与其他相关病毒发生交叉反应,灵敏度可达到10-4 ng/μL,与国标检测方法的符合率达100%。结果表明,本研究建立的检测方法可以准确鉴定鸡传染性支气管炎病毒,具有良好的应用前景。

摘要：为建立猪附红细胞体病的PCR-ELISA检测方法,试验根据猪附红细胞体ENO基因序列,设计合成1对分别标记生物素(BIOT)和地高辛(DIG)的引物,进行PCR-ELISA检测。通过对包被液的种类和浓度、结合抗体的反应条件、封闭条件、PCR产物的稀释度及显色时间等条件进行优化,确定阴性、阳性判定的阈值,并进行特异性、敏感性及重复性验证。结果表明:该方法与猪链球菌、猪大肠杆菌、猪肺炎支原体、弓形虫等均无交叉反应;敏感性比常规PCR高10倍,最低检出量为1.77×10^6拷贝/μL;对40份猪血液样品的,阳性检出率为22.5%。该试验建立的方法具有特异、敏感、安全等优点,将为猪附红细胞体病的临床诊断提供更准确、实用的检测方法。

摘要：研究通过比对鸽源和鸡源新城疫病毒M基因的序列,找到其差异位点并在保守区设计引物和TaqMan探针,建立了一种可以特异性检测鸽新城疫病毒的实时荧光定量PCR方法。以鸽新城疫病毒M基因阳性质粒为模板制作标准曲线并对检测方法的指标进行系统评价。结果显示,该方法的标准曲线为方程为:y=-3.334logX+37.837,相关系数R^2=0.992;重组质粒标准品检测下限为1×10^1 copies/μL,比普通PCR灵敏100倍;特异性试验显示,该方法与鸡新城疫病毒不同毒株及其他常见禽类病毒无交叉反应;重复性试验的组间及组内的变异系数均小于2%,说明本研究建立的实时定量PCR检测方法敏感性高、特异性强、重复性好,可应用于鸽新城疫病毒的早期检测,为鸽新城疫病毒的防控提供了技术支持。

摘要：目的建立猴巨细胞病毒(SCMV)的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并研究实验猴群和猴源性生物制品中SCMV感染或污染情况。方法比对分析多株SCMV序列,设计SCMV特异引物和探针引物。建立的方法经验证后检测实验猴群和猴源性生物制品。结果建立的荧光定量PCR方法特异检测SCMV,与人巨细胞病毒(HCMV)、小鼠巨细胞病毒(MCMV)、单纯疱疹病毒(HSV)、猫疱疹病毒(FHV)以及犬疱疹病毒(CHV)无交叉反应,标准曲线相关系数0.999,最低检出限可达10拷贝/μl。结论经测序验证,两种检测方法具有很好准确性,初步应用表明我国实验猴群中SCMV高度流行,应加强实验猴群及相关生物制品中SCMV的监测,避免人类感染SCMV的潜在风险。

摘要：为建立一种快速、灵敏的赤羽病病毒(Akabanediseasevirus,AKAV)核酸检测方法,以AKAV S基因为靶基因,设计特异性引物和Taq Man探针,通过优化反应体系和条件,建立了AKAV荧光定量RT-PCR检测方法,随后开展了敏感性、特异性及重复性评估,并利用该方法与AKAV检疫行业标准推荐方法同时对临床采集的80份牛羊血液样品进行检测,以检验方法的临床应用效果。结果显示:本研究建立的检测方法敏感性较高,最低检测限为13.4 copies/μL;特异性良好,与口蹄疫病毒、牛冠状病毒、牛结节性皮肤病病毒、牛病毒性腹泻病毒、传染性牛鼻气管炎病毒、蓝舌病病毒、牛白血病病毒等均无交叉反应;组内试验变异系数为0.93%~2.47%,组间试验为1.25%~2.76%,重复性良好;利用建立的方法从80份临床样品中检出AKAV阳性样品21份,该检测结果与AKAV检疫行业标准推荐方法的符合率为98.75%。结果表明,本研究建立的AKAV荧光定量RT-PCR检测方法敏感性高,特异性及重复性好,适用于赤羽病临床检测,为赤羽病病原学监测和诊断技术标准开发提供了技术支撑。

摘要：本研究建立了食品中致泻大肠埃希氏菌的多重实时荧光PCR定性检测方法,通过检测多种类人工污染样品进行方法验证。设计并筛选致泻大肠埃希氏菌14个目标基因的引物和探针,确定多重实时荧光PCR反应条件,同时用PCR和多重实时荧光PCR方法检测208株菌的14个目标基因,对不同浓度的阳性样本进行多重实时荧光PCR重复性检测,对结果进行灵敏度、特异性、准确度及重复性分析。PCR和多重实时荧光PCR方法检测7种食品类别的15种人工污染食品基质,验证多重实时荧光PCR方法在食品检测致泻大肠埃希氏菌的可行性。多重实时荧光PCR方法的灵敏度为100%,uidA特异性为97.1%,准确度为99.5%,eae特异性为94.8%,准确度为95.2%,其余12个目标基因的特异性、准确度均100%,两种检测方法的结果判定一致。多重实时荧光PCR方法在检测范围内各浓度水平上变异系数均小于2%,线性关系良好。结果表明,建立的多重实时荧光PCR方法能够灵敏、特异、准确、高效地定性检测食品中致泻大肠埃希氏菌。

摘要：目的建立特异敏感的荧光定量PCR (FQ-PCR)方法,用于新型H7N9流感病毒的快速检测。方法针对GenBank中新型H7N9流感病毒(2016年以后)的血凝素基因和神经氨酸酶基因序列的保守区域分别设计两对特异性引物和两条探针,经优化反应条件,建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和稳定性,对2017年采集的临床疑似感染样品进行检测,并与普通PCR方法进行比较分析。结果本研究成功建立的新型H7N9FQ-PCR检测方法在101～106拷贝/μl模板范围内有很好的线性关系,所得相关系数为0.999;对人工合成的H7和N9基因出现阳性扩增信号,但对鸡传染性法氏囊病病毒、鸡传染性支气管炎病毒、H1N2、H3N2、H6N2、H9N2流感病毒等病原对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在0.02%～0.05%;对H7和N9的最低检测模板浓度均为10拷贝/μl,比普通PCR方法的灵敏度高100倍;自30份疑似样品中检出4份阳性样品,与国家禽流感参考实验室复核结果一致。结论本研究成功建立了H7N9流感病毒双重FQ-PCR检测方法,为禽相关临床样本的新型H7N9早期检测提供了特异、敏感、快速的方法。

摘要：为快速、准确检测鸭瘟病毒(duck enteritis virus,DEV),根据GenBank中DEV UL6基因序列,设计了微滴数字PCR(ddPCR)的引物和探针,通过条件优化,建立了检测DEV的ddPCR方法,并对该方法的灵敏度、特异性和重复性进行了验证。结果显示:在57.1℃退火温度下,当引物浓度为1.50µmol/L,探针浓度为0.45µmol/L时,病毒拷贝数浓度达到最大,为332 copies/µL;该方法的最低检测限为0.7 copies/µL,且对非鸭瘟病原均仅扩增出阴性微滴,无交叉反应;组内和组间重复试验变异系数均小于10%。结果表明,本研究建立的DEV ddPCR方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好和稳定性高的优点,可用于低DEV含量样品的检测及其感染的早期诊断和流行病学调查。

摘要：虾肝肠胞虫(Enterocytozoonhepatopenaei,EHP)感染是目前对虾行业面临的全球性挑战,在过去10年中其发病率急剧上升。为建立一种可绝对定量检测EHP的方法,根据Gen Bank中EHP胞壁蛋白SWP基因保守区域,设计一套特异性引物和荧光探针,通过优化反应条件,建立了EHP芯片式数字PCR(chipdigital PCR,cd PCR)定量检测方法。结果显示:该方法线性关系良好(R2=0.9981);敏感性高,检测限可达4.4copies/μL;特异性强,与其他对虾常见病原无交叉反应;重复性良好,批内重复与批间重复试验的变异系数均小于8%。采用建立的cd PCR方法对28份临床虾样品进行检测,结果发现,该方法与水产行业标准《虾肝肠胞虫病诊断规程》(SC/T7232—2020)中套式PCR方法检测结果符合率为100%。结果表明,本研究建立的EHPcd PCR定量检测方法线性好、灵敏度高、特异性强,重复性及准确性良好,且能绝对定量,具有较好的应用前景。