摘要：以深圳红树自然保护区的木榄为材料,根据GenBank上已公布的钙调蛋白氨基酸保守区的碱基序列设计引物,RT-PCR扩增木榄CaM序列,获得cDNA全长735bp,命名为BgCaM(GenBank登录号:GU722140)。生物信息学分析表明,BgCaM与拟南芥、花生、大麦、榉木及甘薯等植物钙调蛋白氨基酸保守区具有较高同源性。BgCaM基因完整开放阅读框为450bp,编码149个氨基酸,预测蛋白等电点为4.11,分子量为16.8kD。分析基因序列和相应酶切位点,将扩增获得的BgCaM基因完整开放阅读框与中间表达载体相应酶切产物进行连接,构建植物表达载体pC13rd29A-BgCaM,为BgCaM功能分析和进一步利用奠定了基础,为植物转基因研究与应用又增添了一个新的基因源。

摘要：为优化建立木榄的SCo T-PCR体系,利用建立的SCo T方法进行分析木榄不同地理种源的遗传多样性,基于L25(56)正交设计,本研究在5个水平上优化试验了5个影响木榄SCo T-PCR的因素:模板DNA、Mg^(2+)、d NTPs、Taq酶和引物。同时,运用优化的SCo T体系对木榄8个不同地理种源进行遗传多样性分析。本研究结果建立了木榄SCo T-PCR最佳反应体系(20μL):模板DNA 20 ng,引物0.75μmol/L,d NTPs 0.5 mmol/L,Mg^(2+)2.5 mmol/L,Taq酶1.25 U。同时,筛选出了带谱清晰、多态性丰富的16条SCo T引物进行遗传多样性分析。共扩增出115个位点,其中73个为多态性位点,多态性比例为62.33%。从UPGMA聚类和PCo A分析结果可以看出8个地理种源间的遗传多样性及亲缘关系。研究表明SCo T分子标记可以用于木榄种群的遗传多样性。

摘要：根据植物水通道基因保守区设计简并引物,采用RT-PCR方法,从木榄树叶中分离出水通道基因的cDNA片段;3′RACE获得3′端cDNA序列;再经5′RACE获得5′端部分cDNA序列,命名为PIP2,GenBank登录号为EF126757。该基因全长843个碱基,编码281个氨基酸,具有典型的植物水通道基因结构。该基因编码的蛋白质与含羞草(PIP2;5)、欧洲葡萄(PIP)、拟南芥(PIP3)等水通道蛋白的同源性分别为90%、91%、88%。Northern杂交分析表明,该基因在木榄树不同器官中的表达差异明显:根部有较高的表达水平,茎部较弱,而在叶中只能检测到微弱的信号。