摘要：为进一步了解植物内源木聚糖酶基因结构及其表达特性,从水稻中克隆和表达了一种内源木聚糖酶基因。通过序列比对分析确定保守区序列,以PCR扩增得到的保守区序列从众多水稻木聚糖酶预测序列中"钓取"可能的目标基因,并以此基因为模板设计引物,通过RT-PCR扩增得到一条长度为1 443 bp的基因片段osx,测序结果与水稻木聚糖酶基因预测序列NM_001061680一致性高达99%,该序列编码480个氨基酸,经预测不存在信号肽序列。构建表达载体pET28-a(+)-osx,导入大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达,该表达产物未检测到木聚糖酶活性。受大麦和玉米内源木聚糖酶基因表达的前体为无活性蛋白需要剪切加工的启示,进一步通过在线蛋白同源建模分析,设计引物去掉蛋白N端约120个氨基酸,C端约40个氨基酸,保留"Glyco-hydro-10"结构域,使其成功实现了原核活性表达,表达蛋白约40 kDa,木聚糖酶活性为11.53 IU/mL。

摘要：研究旨在比较4种不同来源木聚糖酶基因在大肠杆菌*** BL21中表达后的酶活等性质，为生产中筛选高表达量及耐极性木聚糖酶基因提供依据、根据已发表的木聚糖酶基因序列设计引物，分别扩增出浸麻芽孢杆菌（***）B3、地衣芽孢杆菌（B．1ichenitormis）B6、蜡样芽孢杆菌（***）B10和枯草芽孢杆菌（***）B12的木聚糖酶基因片段，经克隆表达后获得4种工程茼经培养和IPTG诱导后进行SDS—PAGE电泳检测及酶特性分析、测序结果表明，4个基因的开放阅读框均为642bp。其中前3种木聚糖酶基因均为首次报道、4种重组木聚糖酶在55℃下的酶活分别为：36．16、3．85、7．22、98．98U／ml、、4种重组木聚糖酶的最适反应温度均在50～60℃，且枯草芽孢杆菌木聚糖酶最为耐热，、结果提示，枯草芽孢杆菌来源的木聚糖酶具有较高的酶活和较好的耐热性。

摘要：通过形态学和16S rDNA序列分析方法,从绵羊瘤胃内容物中分离得到的细菌中鉴定出枯草芽胞杆菌。根据GenBank中已知Bacillus subtilis木聚糖酶基因序列设计带有酶切位点的引物,克隆到2条不同的木聚糖基因序列。通过酶切和连接等相关分子方法成功构建出以pMG36e为载体的表达木聚糖酶的重组质粒,转化到乳酸球菌粒MG1363后,均能高效表达,酶活性分别为28.29 U/mL和7.11 U/mL,比原枯草芽胞杆菌酶活2.17 U/mL高出13.04倍和3.28倍。

摘要：利用Blastx将角毛壳菌(Chaetomium cupreum)ESTs与GenBank的Nr数据库进行相似性比对,获得1条编码木聚糖酶基因的全长cDNA序列的EST(GenBank Accn:DV547992),依据该序列设计并合成引物,以角毛壳菌基因组为模板进行PCR扩增,获得角毛壳菌xyn24的全长DNA序列,该DNA序列全长875 bp,由1个内含子和2个外显子组成;cDNA序列全长690 bp,编码229个氨基酸,蛋白质的相对分子质量为24700,理论等电点为7.83。经BlastP分析,xyn24基因的氨基酸序列的保守性不高,与嗜热革节孢菌(Scytalidium thermophilum AB114442)中的木聚糖酶基因的同源性最高,为78%,故推测该基因可能是1条新发现的木聚糖酶家族基因,该序列已收录于GenBank,登录号为:DQ886937,EF026978。