摘要：为了研究本氏烟草NbEHD1基因的生物学功能,采用生物信息学方法对其基因结构、蛋白保守结构域、磷酸化位点、亚细胞定位及进化关系等多个方面进行预测。结果表明,本氏烟草NbEHD1编码序列全长1638 bp,其基因组序列包含16个外显子和15个内含子。NbEHD1蛋白大概率定位于细胞质中,无信号肽,无跨膜区,蛋白序列有42个磷酸化位点。NbEHD1属于P-loop_NTPase超家族,具有EHD家族特有保守结构域。系统进化关系结果表明,本氏烟草NbEHD1与马铃薯、番茄的EHD序列亲缘关系较近。经与SGN数据库中本氏烟草测序数据比对,获得NbEHD1预测的全序列并设计基因特异性引物,扩增得到其序列全长。在获得NbEHD1 CRISPR/Cas9基因编辑载体后,采用农杆菌介导的方法,将此载体成功转化到本氏烟草叶片,经鉴定成功获得T_(0)阳性植株16株,为进一步确定NbEHD1基因的生物学功能提供了研究材料。

摘要：CRISPR(clustered regulatory interspersed short palindromic repeat)/Cas9(CRISPR associated proteins)是源于原核生物的一种获得性免疫系统,广泛应用于细菌、真菌、动物和植物的基因编辑研究中。本研究是以转基因本氏烟草16C(16C transgenic Nicotiana benthamiana,16C-NB)为材料,利用CRISPR/Cas9技术实现对其GFP(green fluorescent protein)基因的编辑工作,使用PCR-RE(polymerase chain reaction-restriction enzyme)的方法检测了突变体,建立了本氏烟草CRISPR/Cas9基因敲除瞬时表达系统,进而探讨了CRISPR/Cas9系统在植物基因敲除中的应用。在本研究中,采用In-Fusion克隆技术获得了操作性强的中间载体,针对靶基因GFP设计特定靶位点并进行了基因突变实验,为将来开展其它植物内源基因的生物学功能研究提供了参考。

摘要：病毒诱导的基因沉默(VIGS)是研究植物基因功能的一种非常有用的技术,它可随意敲掉感兴趣的基因,耗时较短,不需建立稳定的遗传体系.本研究利用VIGS方法,以紫花地丁的VpTM_(6-2)作为探针序列,去沉默本氏烟草中的内源NbTM_(6),以探讨VpTM_(6-2)的生物功能.VpTM_(6-2)属于B类MADS-box基因,文中设计的探针序列长357 bp,与NbTM_(6)相应的序列之间具有69.0%的同源性,除一个碱基有差异外,存在一段连续长27个碱基的100%同源序列.结果表明,VpTM_(6-2)能够特异性敲除本氏烟草的内源NbTM_(6),使得NbTM_(6)的表达明显下降,花粉发育异常(其余花器官发育均正常).本氏烟草VIGS体系使得紫花地丁中的一些基因可在异源体系中得到功能验证.该研究进一步证明VpTM_(6-2)表达含量的下降可能与紫花地丁两型花发育有一定的关系.

摘要：根据1个已报道的马铃薯富含锚蛋白重复结构域基因Star的全长cDNA序列,分别在含有起始密码子和终止密码子处设计基因特异引物,从感染了晚疫病原菌的本氏烟草叶片cDNA中克隆得到1个新的基因Nbar。此基因包含1个最大为1 539 bp的阅读框,与Star的碱基一致性达到90%。该基因编码513个氨基酸,序列中存在6个锚蛋白重复结构域和1个环指结构域。Nbar已提交GenBank,登录号为1231763。