摘要：目的利用荧光定量PCR技术,建立食品中单核细胞增生李斯特菌污染的快速敏感特异的检测方法。方法以单核细胞增生李斯特菌的-hlyA基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以单核细胞增生李斯特菌菌株,提取核酸DNA作为模板,优化引物和探针的浓度比和退火温度,以单核细胞增生李斯特菌和10种相关细菌考核检测体系的灵敏性、稳定性和特异性。并初步应用于样品的检测。结果本研究建立的反应体系在引物和探针的浓度为0.8μmol/L,0.6μmol/L,退火温度为60℃时,具有良好的特异性和敏感性。在10株相关菌株的检测中,除单核细胞增生李斯特菌出现很好的阳性外,其余菌株均为阴性。在纯菌条件下,定量检测低限19cfu/ml。稳定性分析表明同一样品重复检测3次Ct值的变异系数均小于5%。检测样品结果显示Real-timePCR方法较传统方法敏感、快捷、简便。结论该方法特异性强,稳定性高,操作简便快捷,适应食品微生物检验发展需要,具有较大的推广及应用价值。

摘要：枯草芽孢杆菌对单增李斯特菌有强烈抑制作用,该文对其增菌培养基和培养条件进行优化,为今后将其应用于食品和饲料奠定基础。在对培养基成分和培养条件进行单因素试验的基础上,设计5因素4水平正交试验对培养基成分进行优化。结果表明,培养基成分优化为葡萄糖1.0%,酵母浸粉1.0%,NaCl 0.5%,KH_2PO_40.2%,MgSO_4·7H_2O 0.2%,培养条件优化为pH5.4,装液量50 m L/250 m L,接种量3%,温度37℃,150 r/min培养14 h,在此条件下,活菌数可达到7.1×10^(10) CFU/m L,比优化前提高了7.89倍。

摘要：目的采用荧光定量PCR技术,建立可以同步检测李斯特菌属与单增李斯特菌的快速检测方法。方法选取单增李斯特菌hlyM基因和李斯特菌属23Sr DNA基因为靶基因,分别设计引物和探针,在构建二者的阳性重组质粒基础上,对李斯特菌属和单增李斯特菌进行荧光定量PCR的检测。结果建立的李斯特菌属和单增李斯特菌单重荧光定量PCR检测方法与双重荧光定量PCR的检测方法敏感度一致,分别为18.6拷贝/μl和23.2拷贝/μl。结论建立的双重荧光定量PCR方法可以同步检测李斯特菌属与单增李斯特菌。

摘要：目的:检测李斯特菌DNA对小鼠H22肝癌Bcl-2基因表达的影响,探讨细菌DNA对肿瘤的抑制作用。方法:建立H22肝癌小鼠模型,从模型建立后的第一天开始,随机分组,分别给予李斯特菌DNA液(实验组)和生理盐水(对照组)。从癌组织中提取总RNA,设计目的基因引物和内参照GAPD引物。采用RT-PCR方法,分别检测实验组及对照组小鼠瘤体Bcl-2基因的表达,应用Bio-RAD凝胶成像系统及在Quantity One软件辅助下分析测定表达结果。结果:实验组小鼠瘤体Bcl-2表达低于对照组,经统计学处理,两者有显著性差异。结论:李斯特菌DNA对H22肝癌小鼠肿瘤有抑制作用。

摘要：为了建立针对动物性产品的快速、准确、定量检测单增李斯特菌的方法。根据GenBank中单增李斯特菌hlyA基因序列设计引物,以普通PCR产物10倍比例稀释液为标准品,进行Real-timePCR定量检测方法的研究。以单增李斯特菌hly基因为目标的Real-timePCR反应制得标准曲线方程为Y=-3.311X+41.162,相关系数R2=0.991,扩增效率E=96.528%。通过特异性和灵敏度试验,确定Real-timePCR检测方法特异性好、灵敏度高,最低检出剂量达到29个菌/mL。Real-timePCR检测单增李斯特菌具有快速、灵敏、高效的优点,适宜于食品中单增李斯特菌污染的调查及监测。

摘要：目的建立利用肽核酸荧光原位杂交技术(PNA-FISH)快速检测食品中李斯特菌属及单增李斯特菌的方法。方法针对李斯特菌属、单增李斯特菌分别设计合成2份PNA探针lis-16S-1、lm-16S-2,并建立荧光原位杂交技术,优化杂交条件,对选取的13株李斯特菌和其他9株非李斯特菌进行检测,验证探针的特异性和灵敏度,并对118份食品样品用LB肉汤2次增菌培养后进行PNA-FISH检测。结果探针灵敏度和特异性均为100%,从118份食品中检出14株李斯特菌和8株单增李斯特菌,结果与API方法和VITEK方法鉴定结果一致。结论 PNA-FISH方法可靠易行,对从食品中检测致病性单增李斯特菌有较高的实用性。

摘要：目的建立单核细胞增多性李斯特菌（单增李斯特菌）快速、敏感、特异的ＰＣＲ诊断方法。方法选取ｈｌｙＡ基因作为靶序列设计一对引物，用该引物对５４株标准李斯特菌和２１株无关菌进行ＰＣＲ扩增，得到进一步验证。采用ＰＣＲ和常规鉴定方法同时对从国内食品分离的３３株李斯特菌进行鉴定。结果可扩增含有保守ＨｉｎｄⅢ切点的７４３ｂｐ片段。表现出极好的单增李斯特菌种特异性。纯培养的检测极限为５５个菌。发现其中１８株用两种方法都鉴定为单增李斯特菌，两种方法的结果完全符合。当用于食物标本检测时，ＰＣＲ反应遭强烈抑制。经过２５小时的增菌培养，对培养物进行化学抽提、纯化的菌体经加热裂解后直接用作ＰＣＲ反应模板，可使抑制作用大大降低。每毫升牛奶人工接种４个菌可用该法特异检出。结论建立了ＰＣＲ方法，可初步用于单增李斯特菌的快速、特异、敏感诊断。

摘要：目的建立单核细胞增生李斯特菌的聚合酶链式反应(PCR)检测方法,了解市售食品中单核细胞增生李斯特菌的污染情况。方法采集成都市市售生畜肉、生禽肉、熟肉制品、水产品、生食蔬菜以及其他熟食等食品样品共135份,采用李氏增菌肉汤(LB1,LB2)进行初增菌,应用选择性分离培养基PALCAM和在TSA-YE平板上进行分离,利用单增李斯特显色平板进行鉴定;根据李斯特菌的特异性基因iap基因设计引物,采用PCR方法检测所有分离的李斯特菌株;根据单增李斯特菌的特异性基因hly基因和prfA基因设计引物检测单核细胞增生李斯特菌株。结果 135份样品中共检出李斯特菌17株,检出率为12.6%;其中单核细胞增生李斯特菌4株,检出率为3.0%。结论本研究建立的PCR方法具有特异性,本市市售食品不同程度受到李斯特菌的污染。

摘要：从卡介苗(BCG)、单核细胞增生性李斯特菌、沙门氏菌和志贺氏菌在实验动物模型上的研究结果看来,它们已有希望作为疫苗的载体。虽然它们在人类和灵长类动物上令人失望的研究结果阻碍了这种免疫预防策略的发展,但是由于细菌性DNA疫苗载体所取得的研究成果,使得人们近来对细菌疫苗载体的设计思路又重新发生兴趣。本综述着重讲述细菌疫苗载体的优越性和局限性,并讨论这些疫苗运送系统的发展前景。

摘要：从食品和饮料工厂，的高压冲洗到油气勘探中：的高热和高压，再到户外的一些热点应用，商级运动控制方案在严苛环境下得到了前所未有的使用。召回问题推动了冲洗解决方案“作为很重要的严苛环境的一部分，直冲式应用已经在增长，因为我们发现，最近几年召回问题越来越被关注。”Kollmorgen公司的产品经理GeneMatthews说：“随着李斯特菌的爆发被追溯到工厂无菌灌装环节，另外还有肉和鸡蛋的召回。有更多的机器需要每天被各种腐蚀性化学液、蒸汽还有高压水冲洗。”