摘要：背景与目的:近年来兴起的DNA芯片技术能在一次杂交中同时监测数以千计的基因表达,能大大加速肿瘤药物作用机制的研究和药物治疗靶点的发现。本研究的目的是利用基因表达谱芯片研究松胞素b(cytochalasinb,Cb,旧称细胞松弛素b)对白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法:利用限制性显示RCR(restrictiondisplayPCR,RD-PCR)技术扩增K562细胞cDNA片段,取其中277个cDNA片段按设计的矩阵打印在玻片上,制成基因芯片;用Cb处理K562细胞24h,分别提取对照组和处理组细胞总RNA,将两组等量的细胞总RNA纯化为mRNA,反转录为cDNA,利用RD-PCR技术进行扩增标记;与芯片杂交后扫描分析处理前后表达差异的基因。结果:在所收集的探针中,对照组和处理组细胞间存在差异表达的基因。共筛选到Cb处理后表达下调的基因18条。结论:Cb诱导后的K562细胞部份基因表达呈下调趋势,其中大部分基因与细胞增殖、信号转导、转录调节相关。

摘要：背景:细胞分化、细胞融合乃至克隆均需要应用分离细胞核的方法以获得大量有活性的细胞核,但是目前很难在数量和质量上同时达到较高的水准。目的:探索简单易行的分离细胞核的方法,为神经元细胞核移植、细胞拆合以及细胞核成分的研究提供大量完好有活性的细胞核。设计、时间及地点:对比实验,于2006-09/2007-01在南京医科大学基础医学院卫生部抗体技术重点实验室完成。材料:Cytochalasinb为Sigma公司提供,清洁级SD孕大鼠来源于南京医科大学动物实验中心。方法:取胎鼠大脑皮质,进行神经元的培养并鉴定。用Cytochalasin b结合梯度离心法及细胞核分离液法两种方法进行细胞核分离的对比观察。主要观察指标:用碘化丙啶标记后进行流式细胞仪检测凋亡率并用免疫荧光染色对细胞核进行形态学观察。结果:两种方法均成功地分离出大量有活性神经元细胞核,且梯度离心法可以得到较为完整的胞质体,与完整细胞细胞核荧光强度比较无显著性差异(P>0.05)。结论:Cytochalasinb结合梯度离心法及细胞核分离液法均能够有效地进行神经元细胞核的分离,且细胞核在短期内有较高的活性。