摘要：为促进果糖-6-磷酸的绿色生物制备,该研究对纤维素堆囊菌(Sorangium cellulosum)中的果糖激酶基因进行克隆、表达,探究重组酶酶学性质和底物特异性。以纤维素堆囊菌基因组DNA为模板,设计引物克隆果糖激酶基因SoCeFruK 1852和SoCeFruK 7579,构建重组表达质粒pET30a-SoCeFruK 1852和pET30a-SoCeFruK 7579,并在Escherichia coli(DE3)中诱导表达,纯化重组果糖激酶,研究反应产物和酶学性质。重组果糖激酶SoCeFruK1852和SoCeFruK7579的分子质量大小分别为31.2、32.8 kDa,蛋白质质量浓度为2.04、1.8 mg/mL,比活力分别为35.8、18.3 U/mg。SoCeFruK1852的最适温度和pH分别为37℃和4.5。金属离子Co^(2+)、Fe^(3+)、Zn^(2+)和化学试剂SDS、EDTA、Tween 20对酶活力有抑制作用,而Mg^(2+)和Mn^(2+)对酶活力有促进作用。以果糖为底物时,SoCeFruK1852的K_(m)值为0.54 mmol/L,V_(max)值为1.28μmol/s。SoCeFruK1852能够特异性催化果糖,但也能催化部分D-塔格糖。获得细菌来源的重组果糖激酶SoCeFruK1852和SoCeFruK7579,且SoCeFruK1852显示良好的酶活力和酶学性质,底物特异性较强,为后续相关研究奠定基础。

摘要：根据GeneBank中已登记的番茄果糖激酶基因的保守序列设计特异引物,以普通栽培型番茄辽园多丽的果实为材料提取总RNA,采用RT-PCR方法,扩增出果糖激酶基因cDNA序列的部分片段并克隆到pBS-T载体中。测序结果表明,LeFRK1-LeFRK3分别与番茄植物中已知该基因的核苷酸序列相似性高达99%以上,构建了一个番茄、马铃薯、烟草及拟南芥植物中FRK基因的系统进化树。采用半定量RT-PCR方法对番茄果实不同发育时期的表达进行检测,FRK1-FRK3在番茄果实发育的过程中均有表达,但在花后25～35 d时表达量较高。