摘要：目的　克隆和高效表达查菲埃立克体 (Ehrlichiachaffeensis) 2 8kD表面抗原基因。 方法　依据已知的查菲埃立克体 2 8kD表面抗原基因设计引物 ,用PCR从查菲埃立克体基因组中克隆该基因片段 ( 5 3 1bp) ,再将该基因片段定向插入表达载体 (PinPointTMXa - 3 )中 ,然后将该重组质粒转化E .coliJM10 9细胞。结果　经SDS -PAGE分析 ,转化子所产生的融合蛋白分子量为 3 2kD ,与预期的结果相一致 ;在 3 7℃用 0 .1MmIPTG诱导转化子 12h ,融合蛋白量达到细菌总蛋白量的 3 5 .8%。结论　查菲埃立克体 2 8～kD表面抗原基因在E .coliJM10 9细胞内得到高效率表达 ,从而为该抗原的大量制备奠定了基础。

摘要：目的　克隆查菲埃立克体 12 0kDa膜表面免疫决定性蛋白基因 ,并使之在原核表达系统中表达。方法　查菲埃立克体分离株 (91HE17)感染DH82细胞 40天后收集DH82细胞。根据查菲埃立克体P12 0蛋白基因序列设计特异性引物 ,套式PCR扩增查菲埃立克体P12 0蛋白基因部分片段 ,将PCR扩增产物用BamHⅠ和EcoRⅠ限制性内切酶双酶切后与 pUC18载体连接 ,在获得阳性克隆子后用限制性内切酶将克隆片段切下 ,定向插入原核表达载体pProEXHTb构建 pProEXHTb/P12 0重组质粒。将重组质粒转化E .coliDH5α ,并使之在IPTG的诱导下进行蛋白质表达。结果　裁短成 10 80bp的查菲埃立克体P12 0蛋白基因克隆到 pUC18载体 ,用IPTG诱导 pProEXHTb/P12 0重组质粒转化的E .coliDH5α ,表达一分子量大小约为 47kDa的融合蛋白。结论　查菲埃立克体 12 0kDa抗原蛋白基因能在原核表达系统中表达 ,为诊断试剂盒的研制及其它研究工作提供了基础。

摘要：依据查菲埃立克体16S rRNA基因序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针，以克隆的查菲埃立克体16S rRNA基因片段作DNA模板，建立实时荧光定量PCR检测方法。与套式PCR相比较，荧光定量PCR检测的灵敏度是其30倍；用荧光定量PCR检测其他相关立克次体和细菌DNA样本，检出结果为0；对荧光定量PCR检测重复性进行分析，变异系数（CV）批内和批间误差在0．2％～2．0％之间。结果证明本研究建立的荧光定量PCR方法具有种特异性和良好的重复性，可用于检测感染样本中的微量查菲埃立克体DNA。

摘要：目的　克隆查菲埃立克体 12 0kDa膜表面抗原蛋白基因 ,获得纯化的重组蛋白。方法　根据查菲埃立克体(91HE17) 12 0kDa抗原蛋白基因序列设计特异性引物 ,PCR扩增查菲埃立克体 12 0kDa抗原蛋白的基因片段 ;用限制性内切酶酶切PCR扩增产物后与 pUC18载体相连接 ,经酶切和序列分析证实后 ,将目标片段定向插入原核表达载体pProEXHTB中构建pProEXHTB/ p12 0重组质粒 ;将重组质粒转化E coliDH5α ,并使转化子在IPTG的诱导下进行蛋白质表达 ;运用亲和层析和电洗脱法对重组蛋白进行纯化。结果　克隆到一大小为 10 80bp的查菲埃立克体 12 0kDa抗原蛋白的基因片段 ,用该基因与表达质粒连接 ,成功构建了重组表达质粒 ;SDS -PAGE分析显示 :在IPTG诱导下 ,重组表达质粒转化的大肠杆菌产生一分子量为 4 7kDa的目标蛋白 ,免疫印迹证明该重组蛋白能与查菲埃立克体免疫血清发生反应。用纯化的重组蛋白作免疫斑点分析 ,76份被检血清中有 2份为可疑阳性 ,但经IFA复核为阴性。结论　查菲埃立克体 12 0kDa重组抗原蛋白具有免疫反应活性 ,为以重组蛋白为基础的人单核细胞埃立克体病的血清学诊断试剂盒制备和疫苗的研制奠定了基础。

摘要：目的了解东北林区啮齿动物和蜱类查菲埃立克体感染情况。方法采用巢式PCR和间接免疫荧光方法检测长白山林区野鼠和蜱中查菲埃立克体DNA及野鼠查菲埃立克体抗体。对DNA阳性扩增产物测序,进行同源性分析。结果 PCR检测各种蜱共97组,其中13组阳性,阳性率13.40%。不同蜱种中,全沟硬蜱、森林革蜱查菲埃立克体阳性率分别为20.83%和10.0%,嗜群血蜱(14组)和长角血蜱(5组)均为阴性;检测野鼠共132只,阳性19只,阳性率14.39%。其中,集安与宽甸野鼠查菲埃立克体阳性率分别为7.58%和21.21%,差异有统计学意义(χ2=3.9348,P>0.05)。荧光抗体试验检测鼠血清75份,E.c抗体阳性10份,阳性率13.33%。对鼠和蜱标本阳性扩增产物测序并作同源性比较,蜱株、鼠株与查菲埃立克体美国株、韩国株及我国云南株、新疆株核苷酸序列同源性为99.69%~100.00%,聚类分析显示检测株与查菲埃立克体参考株同处一个分支,与日本株及埃立克体属其它成员差异较大。结论长白山林区野鼠和蜱类查菲埃立克体感染普遍,全沟硬蜱和森林革蜱为主要媒介,野鼠为重要宿主动物。表明该地区存在单核细胞埃立克体病的自然疫源地。

摘要：[目的 ]建立一个快速、简便的检测埃立克体感染的实验方法 ,用于人类埃立克体病的临床诊断及分子流行病学调查。 [方法 ]用查菲埃立克体分离株 (91HE17)感染犬巨噬细胞 (DH82细胞 ) ,感染 40天后收集 DH82细胞。根据查菲埃立克体 16 S r RNA基因序列设计引物 ,特异性扩增查菲埃立克体 DNA。运用限制性片段长度多态性分析对PCR扩增产物进行鉴定。 [结果 ]扩增产物经过 1.5 %琼脂糖凝胶电泳和 5 %聚丙烯酰胺凝胶 (PAGE)电泳分析 ,并用PGEM- 3Z(+ ) /Hae DNA Marker作为核酸分子量参照物 ,证实扩增产物是查菲埃立克体 16 S r RNA基因序列的389bp核酸片段。将扩增产物用 Hae 消化后 ,进行限制性片段长度多态性 (RFL P)分析。产生预期 338bp和 5 1bp酶切片段。 [结论 ]引物 HE1和 HE3具有高度特异性。 PCR反应是具有高度敏感性和特异性 ,可作为对人类埃立克体病疫源地、传播媒介及储存宿主进行调查的有效方法。