摘要：选取东部马脑脊髓炎病毒代表株进行序列比对分析,选择高度保守的区域,设计合成引物和Taq Man探针。对引物、探针浓度和反应条件进行优化,建立了东部马脑脊髓炎病毒荧光定量RT-PCR检测技术,实现了对东部马脑脊髓炎病毒的快速检测和鉴别。通过体外转录,制备了含有扩增区域核酸片段的东部马脑脊髓炎病毒核酸标准质控品cRNA,经稀释、分装定量、均匀性和稳定性检验后,作为方法的质控品对建立的方法进行评价,结果表明,应用建立的方法对阳性标准品的检测其灵敏度可达10eopies,对197份临床样品检测,表明建立的东部马脑脊髓炎荧光定量RT-PCR检测技术快速、敏感、特异。该方法的建立对该病的快速检测,及时采取相应防治措施、减少疫情散播有重要意义,也为动物及其产品的进出口检疫提供了一种可靠方法。

摘要：选取西部马脑炎病毒代表株进行序列比对分析，选择保守区域，设计合成引物和TaqMan探针。经对反应体系和条件进行优化，建立了检测西部马脑炎病毒的实时荧光RT-PCR检测方法，应用建立的方法对西部马脑炎病毒核酸、东部马脑炎病毒核酸、马动脉炎病毒核酸、马疱疹病毒1型核酸、马流感病毒H3N8亚型核酸进行检测，结果表明建立的方法只能检出西部马脑炎病毒核酸，与另外4种病毒核酸无交叉反应。进一步通过体外转录制备了西部马脑炎病毒McMillan株7442~10011的cRNA片段，经拷贝数计算、稀释、分装、均匀性和稳定性检验后，作为质控品对建立的方法进行评价。结果显示，所建立的方法其分析灵敏度可达10拷贝。对197份进口马血样品检测用时仅4小时，表明该检测技术快速、灵敏、特异。因此，本研究建立的方法可作为技术储备用于进口马匹的疫病筛查。