摘要：目的:探讨血必净注射液(XBJI)对缺氧/复氧大鼠心肌TLR4--NF-κВ--IL-1β通路的抑制作用。方法:健康雄性SD大鼠36只,体重(280±30)g,随机分为6组(n=6):正常组(N组)、平衡灌注组(BP组)、模型组(M组)、小剂量XBJI组(XBJIL组)、中剂量XBJI组(XBJIM组)、大剂量XBJI组(XBJIH组)。通过langendorff离体心脏灌流装置,建立缺氧/复氧大鼠心肌炎性反应模型。用ELISA方法检测心肌组织中白介素1β(IL-1β)的浓度;Western blot检测心肌组织中核因子-κВp65(NF-κВp65)蛋白、Toll样受体4(TLR4)蛋白的表达;RT-PCR检测心肌组织中NF-κВp65 mRNA及TLR4 mRNA的表达;光镜观察其心肌光学显微结构的改变。结果:与M组比较,XBJIL组、XBJIM组、XBJIH组心肌IL-1β的浓度、NF-κВp65及TLR4蛋白、NF-κВp65及TLR4 mRNA表达量有不同程度的下降,均以XBJIM组下降最为明显(P<0.05,P<0.01);M组心肌结构损伤严重,XBJI处理后上述变化均得到改善,以XBJIM最为明显。结论:不同剂量XBJI可通过抑制TLR4--NF-κВ--IL-1β信号转导通路减轻缺氧/复氧大鼠心肌的炎性反应,以4 ml/100ml的XBJI疗效最佳。

摘要：目的：探讨急性单核细胞白血病THP—1细胞株中核因子-kb（NF—kb）信号通路的活化状态及其抑制剂pathenolide（PN）对细胞增殖、凋亡的影响。方法：THP-1细胞置于37℃、体积分数为5％CO，培养箱中培养。①收集处于对数增殖期的细胞，采用***方法检测THP-1细胞中P65、IkbotmRNA的表达。②用细胞裂解液分别提取THP-1的细胞质和细胞核蛋白，采用WesternBlotting法检测细胞质及细胞核中P65、Ikbc~蛋白的表达。③将处于对数增殖期的THP-1细胞分成10组[（空白对照孔、阴性对照孔及各实验孔（1、2、4、6、8、10、15、20txmol／LPN）]，按12h、24h2个检测点计算细胞增殖抑制率及增殖半数抑制浓度（IC50）的范围。④将处于对数增殖期的THP-1细胞分为3组（空白对照、PBS对照和6μmol／LPN处理组），按第0天至第6天设计，绘制细胞增殖曲线。⑤取处于对数增殖期的THP-1细胞，分5组（分别以0、2、4、6和8txmolZL的PN处理）培养，24h后收获细胞，分别检测细胞周期和细胞早期凋亡率。结果：①RT—PCR结果示THP—l细胞中有P65、IkbαmRNA的表达，Westernblot—ting结果示细胞质中均有P65、Ikbct蛋白的表达，细胞核中有P65蛋白的表达。②PN对THP．1有抑制作用，其抑制率在-定范围内存在着剂量-效应关系，测定范围内最大抑制率可达（69．56±2．52）％；PN作用12h、24h的IC50分别为8～10μmol／L、6～8μmol／L。③以6μmol／L的PN处理后，THP．1细胞增殖曲线明显下降。④在2～6μmol／L范围内，随PN浓度增高，G0／G1期细胞构成增高；在2～8Ixmol／L范围内，S期细胞随PN浓度的增加而减少。0、2、4、6及8Ixmol／LPN组细胞早期凋亡率分别为（3．84±1．50）％、（4．67±1．97）％、（12．67±2．13）％、（17．72±2．78）％和（23．62±3．36）％，差异有统计学意义（F=36．280，P〈0．001）。结论：THP-1细胞中有NF—kb通路的持续激活，PN对THP-1细胞有抑制增殖和促进凋亡的作用。

摘要：目的探讨针对小鼠EOMA细胞核冈子kb（NF—kb）的小干扰RNA（siRNA）对细胞c}t组织因子（TF）表达的抑制作用。方法设计并化学合成针对小鼠NF—kbp65的siRNA，按照实验分组分别转染小鼠EOMA细胞，转染24h后，在相应细胞中加入肿瘤坏死因子α（TNF-α，终浓度为20mg／L），于此后6h分别提取各组细胞总蛋白及RNA，检测细胞内NF—kbp65蛋白表达和TF的mRNA水平。结果TNF-α．刺激6h后，与空白对照组相比，阴性对照组、scramblesiRNA组细胞内NF—kbp65蛋白表达和TFmRNA水半增加，而siRNA组则明娃受到抑制；TNF组、TNF＋scramblesiRNA组细胞内NF—kbp65蛋门表达和TF mRNA水平明显增加，TNF＋siRNA组细胞内NF—kbp65蛋白表达和TFmRNA水平较卒白对照组有所增加，但明显低下TNF纽、TNF＋scramblesiRNA组（P〈0．01）。结论利用siRNA抑制NF—kbp65蛋白表达可以有效地抑制NF—kb下游靶慕因TF的表达。