摘要：目的观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)对术后认知功能障碍(POCD)模型小鼠认知功能和海马核因子e2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路的影响。方法采用随机区组设计,利用随机数字表法将雄性3~4月龄C57BL/6J小鼠54只随机分为3组(n=18),分别为对照组、手术组、手术+NAC组。在异氟醚吸入麻醉下,手术组和手术+NAC组小鼠行左下肢胫骨骨折内固定术。手术+NAC组分别于麻醉前30 min、术后3 h和6 h腹腔内注射NAC 150 mg/kg,对照组和手术组腹腔注射生理盐水。术后第3天利用随机数字表法每组随机取6只小鼠,行Morris水迷宫测试小鼠空间认知和记忆功能,术后第7天完成测试。术后第1、3天取小鼠海马组织,酶联免疫吸附法检测小鼠海马组织中白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)浓度,Western blot及实时荧光定量PCR检测小鼠海马组织中Nrf2和HO-1的蛋白与mRNA表达。结果 3组小鼠的游泳速度差异均无统计学意义(F=2.135,P=0.114);与对照组和手术+NAC组小鼠相比,手术组小鼠的逃避潜伏期延长(P<0.01),穿越平台次数减少(P<0.01),目标象限停留时间减少(P<0.01)。与对照组相比,手术组和手术+NAC组术后1 d海马组织IL-6和MDA含量均明显增高(P均=0.000),术后第3天手术组仍高于对照组(P=0.000),手术+NAC组IL-6(P=0.251)和MDA(P=0.103)含量降至对照组水平;与手术组相比,手术+NAC组术后第1、3天海马组织IL-6和MDA含量均明显降低(P均=0.000)。与对照组相比,手术组和手术+NAC组海马组织Nrf2和HO-1蛋白表达均增高(P均=0.000);与手术组相比,手术+NAC组海马组织Nrf2和HO-1蛋白表达均明显增高(P均=0.000)。与对照组相比,手术组和手术+NAC组Nrf2和HO-1 mRNA表达在术后第1天均明显增加(P均=0.000),手术+NAC组明显高于手术组(P=0.000)。术后第3天,Nrf2和HO-1的mRNA表达进一步增强。结论 NAC预处理后的POCD小鼠降低海马组织氧化应激和炎性反应,改善认知功能,此作用与激活Nrf2/HO-1信号通路相关。

摘要：核因子e2相关因子2（Nrf2）可以保护正常细胞免受氧化剂和亲电子试剂的伤害，从而预防肿瘤的发生与转移。但Nrf2在肿瘤细胞中的异常持续活化会导致肿瘤的发生发展。作用于Nrf2通路的化学药物包括激活剂和抑制剂，Nrf2抑制剂可以提高肿瘤的化疗敏感性，为设计高效低毒的联合用药提供了新思路。

摘要：通过研究核因子e2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,NRF2)对卵巢颗粒细胞的作用及可能机制,为预防卵巢早衰提供依据。本文为细胞实验研究设计,于2022年1—12月在湖南师范大学附属长沙市妇幼保健院的医学实验中心完成。通过4-乙烯基环己烯二环氧(VCD)处理人卵巢颗粒细胞KGN细胞构建颗粒细胞损伤模型。先以不同浓度的VCD处理KGN细胞,采用细胞计数试剂(CCK-8)检测卵巢细胞增殖情况。CCK8确定半抑制(IC_(50))后,采用酶联免疫吸附试验(eLISA)检测细胞上清中雌二醇和孕酮的含量,活性氧(ROS)检测试剂盒检测卵巢细胞中ROS的含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测NRF2的mRNA表达水平,免疫印迹检测NRF2的蛋白表达水平。进一步通过慢病毒转染构建NRF2干扰(siNRF2)和过表达(NRF2-Oe)细胞模型,通过检测激素水平、氧化应激指标(ROS、SOD、GSH-Px)和自噬情况(LC3B水平)以分析调控NRF2对VCD处理细胞模型的影响。结果显示,VCD干预后以时间依赖性和剂量依赖性方式抑制卵巢颗粒细胞的增殖(F>100,P<0.05),24 h的IC_(50)为1.2 mmol/L。VCD处理后细胞上清中雌二醇由(56.32±10.18)ng/ml降低至(24.59±8.75)ng/ml(t=5.78,P<0.05);孕酮由(50.25±7.03)ng/ml降低至(25.13±6.67)ng/ml(t=6.54,P<0.05)。VCD处理后细胞的SOD由(44.47±7.71)ng/ml降低至(30.92±4.97)ng/ml(t=3.61,P<0.05);GSH-Px由(68.51±10.17)ng/ml降低至(35.19±6.59)ng/ml(t=5.73,P<0.05)。同时伴随自噬的增加和NRF2的下降。成功构建沉默NRF2和过表达NRF2的KGN细胞模型,随后采用VCD处理各组细胞,发现siNRF2组的细胞增殖活性明显减弱(t=8.37,P<0.05),而NRF2-Oe能逆转VCD造成的细胞活性损伤(t=3.37,P<0.05)。siNRF2组的雌二醇水平最低(t=5.78,P<0.05),而NRF2-Oe能逆转VCD造成的细胞雌二醇水平降低(t=5.58,P<0.05)。siNRF2组的孕酮水平最低(t=3.02,P<0.05),而NRF2-Oe能逆转VCD造成的细胞孕酮水平降低(t=2.41,P<0.05)。siNRF2组的ROS水平最高(t=2.86,P<0.05),NRF2-Oe能逆转VCD引起的ROS增加(t=3.14,P<0.05),siNRF2组的SOD酶含量最低(t=2.98,P<0.05),NRF2-Oe能逆转VCD引起的SOD酶含量降低(t=4.72,P<0.05)。siNRF2组的GSH-Px酶含量最低(t=3.67,P<0.05),NRF2-Oe能逆转VCD引起的抗氧化酶含量降低(t=2.71,P<0.05)。siNRF2组的LC3B水平最高(t=2.45,P<0.05),NRF2-Oe能逆转VCD引起的LC3B升高(t=9.64,P<0.05)。综上,NRF2抑制ROS诱导的自噬性,从而发挥减少卵巢颗粒细胞损伤的作用。

摘要：氧化应激是机体内一种氧化还原失衡状态,是导致组织损伤和疾病发生的重要因素之一。核因子e2相关因子2(nuclear factor e2-related factor 2,Nrf2)-Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch like eCH-associated protein 1,Keap1)信号通路不仅是抵御氧化应激损伤的重要防御系统,也是增强机体抗氧化能力的关键信号通路之一。大量研究表明,靶向Keap1-Nrf2信号通路并激活Nrf2已经成为治疗氧化应激和相关疾病的有效策略。运用小分子直接阻断Keap1-Nrf2蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)是激活Nrf2并且发挥保护作用的重要方向之一,可以避免共价修饰激活Nrf2的潜在不良反应。另一方面,Keap1作为新型e3泛素化酶工具,已被用于蛋白水解靶向嵌合体(proteolysis targeting chimeras,PROTACs)的设计。本文综述了近年来Keap1-Nrf2蛋白相互作用抑制剂和基于Keap1 e3泛素化系统的降解剂的研究进展。

摘要：免疫反应基因1(IRG1)是三羧酸循环的一种代谢酶,其催化顺乌头酸脱羧产生衣康酸。IRG1/衣康酸是巨噬细胞免疫与代谢的重要连接点,其作用及机制研究在近年取得了重大进展。研究证实,衣康酸是负向调控巨噬细胞炎症反应的关键代谢物,其可通过抑制琥珀酸脱氢酶(SDH)活性及诱导核因子e2相关因子2(Nrf2)介导抗氧化等机制下调LPS诱导的巨噬细胞炎症反应。此外,基于衣康酸设计的衍生物显示出对炎症疾病的治疗潜力。本文就IRG1/衣康酸调控巨噬细胞炎症反应的分子机制研究进行综述。

摘要：目的探讨核因子e2相关因子2(Nrf2)基因体外对结直肠腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其在调控上皮间质转化(eMT)通路中的作用。方法设计并合成3个Nrf2的小干扰RNA(siRNA)序列,分别为siRNA-223、siRNA-538、siRNA-756,并设计合成无关序列;构建载有Nrf2各siRNA序列的质粒,将载有siRNA序列质粒和载有无关序列质粒分别转染至人结直肠腺癌Caco-2细胞,分别为干扰组和空载组,另设未经任何处理的Caco-2细胞为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法和蛋白质印迹(WB)法检测各组细胞中Nrf2基因转录水平和翻译水平相对表达量,以验证Nrf2干扰效果;选择干扰效果最好的siRNA进行后续实验。采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力(以吸光度值表示);采用RT-qPCR法检测各组细胞eMT通路相关因子[波形蛋白(Vim)、N-钙黏蛋白(N-cad)及e-钙黏蛋白(e-cad)]转录水平相对表达量;采用WB法检测各组细胞中促凋亡蛋白Bax表达情况。结果RT-qPCR和WB法检测结果显示,siRNA-756干扰组Caco-2细胞中Nrf2基因转录水平和翻译水平相对表达量最低,与对照组、空载组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。CCK-8法检测结果显示,对照组、空载组、siRNA-756干扰组Caco-2细胞培养48 h后的吸光度值分别为(100±5)%、(94±4)%、(82±5)%;与对照组和空载组相比,siRNA-756干扰组吸光度值均低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。RT-qPCR法检测结果显示,siRNA-756干扰组Vim和N-cad转录水平相对表达量均高于对照组、空载组,差异均有统计学意义(均P<0.05);e-cad转录水平相对表达量均低于对照组、空载组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。WB法检测结果显示,siRNA-756干扰组Bax蛋白相对表达量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外干扰Nrf2表达可减弱人结直肠腺癌Caco-2细胞增殖能力和抗凋亡能力,机制可能是Nrf2通过调控eMT通路的Vim、N-cad、e-cad表达来增强肿瘤细胞的eMT能力。

摘要：目的分析老年结肠癌患者化疗后骨髓抑制发生情况及其影响因素。方法回顾性分析80例老年结直肠癌患者资料,设计基线资料填写表,纳入全部可能因素,经单因素及多因素分析找出老年结直肠癌患者化疗后骨髓抑制发生的影响因素。结果化疗3个月,80例老年结直肠癌患者中出现骨髓抑制30例(37.50%);初步比较发生与未发生骨髓抑制患者的基线资料,将比较差异有统计学意义的资料逐个纳入行单项回归分析,后将全部资料纳入并建立多元回归模型,结果显示,多药联合化疗、化疗时间长、化疗前血清核因子e2相关因子(Nrf)2低表达、化疗前白细胞计数(WBC)低表达均是老年结直肠癌患者化疗后骨髓抑制发生的影响因素(OR>1,P<0.05,P<0.001)。结论老年结直肠癌患者若接受多药联合化疗、化疗时间长、化疗前Nrf2低表达、化疗前WBC低表达,可能会增加化疗后骨髓抑制发生风险,该类患者应引起重视。

摘要：近年研究表明,调节Nrf2/ARe/HO-1通路在各种神经系统疾病中具有神经保护作用。通过遗传学或药理学手段上调Nrf2或HO-1的表达,在动物模型和细胞体系中具有神经保护作用。因此有必要就Nrf2/ARe/HO-1在阿尔茨海默病(AD)中作用的研究进行梳理。本文对Nrf2/ARe/HO-1在AD中作用的研究历史进行了梳理。

摘要：目的探讨银杏叶片调控核因子e2相关因子2(Nrf2)-Kelch样eCH联合蛋白1(Keap1)-抗氧化反应元件(ARe)信号通路在燃煤污染型地方性砷中毒(简称燃煤型砷中毒)大鼠肝损伤中的作用。方法采用成组设计,30只Wistar大鼠按体重(80~100 g)采用随机数字表法分为5组,每组6只,雌雄各半。正常对照组常规喂饲4.5个月;银杏叶片对照组常规喂饲3个月后给予银杏叶片(25 mg/kg,6 d/周)1.5个月;饮水型砷中毒组和砷粮食污染组分别给予100 mg/L三氧化二砷(As_(2)O_(3))水溶液和含砷100 mg/kg饲料3个月后,常规喂饲1.5个月;银杏叶片治疗组喂饲含砷100 mg/kg饲料3个月后给予银杏叶片(25 mg/kg,6 d/周)1.5个月。采用硫代巴比妥酸比色法检测5组大鼠血清丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法检测血清铜锌超氧化物歧化酶(SOD1)活力,二巯双硝基苯甲酸还原法检测血清谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力;荧光定量PCR、免疫组织化学及免疫印迹法检测5组大鼠肝组织Nrf2-Keap1-ARe信号通路指标基因的mRNA和蛋白表达;并采用Pearson相关分析指标间的相关性。结果饮水型砷中毒组、砷粮食污染组和银杏叶片治疗组血清MDA含量[(3.54±0.51)、(3.83±0.87)、(2.93±0.84)μmol/L]均高于正常对照组[(1.85±0.36)μmol/L,P均<0.05];SOD1[(68.21±4.37)、(64.53±9.96)、(73.09±5.43)U/ml]和GPx活力[(486.41±40.45)、(458.24±42.25)、(539.79±79.43)U/L]均低于正常对照组[(81.47±5.73)U/ml、(747.86±80.33)U/L,P均<0.05];与砷粮食污染组比较,银杏叶片治疗组MDA含量较低,SOD1和GPx活力均较高(P均<0.05)。饮水型砷中毒组、砷粮食污染组和银杏叶片治疗组肝组织SOD1和GPx1 mRNA表达均高于正常对照组(P均<0.05),银杏叶片治疗组均高于砷粮食污染组(P均<0.05)。砷粮食污染组肝组织SOD1蛋白表达低于正常对照组(P<0.05),饮水型砷中毒组、砷粮食污染组和银杏叶片治疗组肝组织GPx1蛋白表达均低于正常对照组(P均<0.05),银杏叶片治疗组SOD1和GPx1蛋白表达均高于砷粮食污染组(P均<0.05)。与正常对照组和砷粮食污染组比较,银杏叶片治疗组肝组织Keap1蛋白表达均较低(P均<0.05)。饮水型砷中毒组、砷粮食污染组和银杏叶片治疗组肝组织细胞质Nrf2、磷酸化Nrf2(pNrf2)蛋白表达均高于正常对照组(P均<0.05),银杏叶片治疗组pNrf2蛋白表达低于砷粮食污染组(P<0.05)。饮水型砷中毒组、砷粮食污染组和银杏叶片治疗组肝组织细胞核Nrf2、pNrf2蛋白表达均高于正常对照组(P均<0.05),且银杏叶片治疗组均高于砷粮食污染组(P均<0.05)。细胞核Nrf2、pNrf2蛋白表达与Keap1蛋白表达均呈负相关(r=-0.523、-0.401,P均<0.05),与SOD1、GPx1 mRNA表达均呈正相关(r=0.658、0.530,0.555、0.603,P均<0.05);SOD1、GPx1蛋白表达与其酶活力也均呈正相关(r=0.472、0.629,P均<0.05)。结论砷能诱导氧化应激损伤肝脏,银杏叶片能降低Keap1蛋白表达,促进Nrf2核转位后增强SOD1和GPx1 mRNA表达及部分逆转砷对SOD1和GPx1的转录后调控作用,增加其蛋白表达和酶活力,从而改善燃煤型砷中毒氧化应激状态和肝损伤。

摘要：目的观察燃煤污染型砷中毒大鼠肝组织中蛋白激酶Cδ(PKCδ)、核因子e2相关因子2(Nrf2)的表达,并探讨其作用。方法采用成组设计,将30只Wistar大鼠(雌雄各半)按体质量(80~100 g)采用随机数字表法分为对照组、饮水型砷中毒组(水砷组)和低、中、高砷粮食污染组(低、中、高砷组),每组6只。对照组常规喂养,水砷组自由饮用100 mg/L三氧化二砷(As2O3)水溶液,低、中、高砷组分别喂饲病区高砷煤烘烤玉米粉所配制的饲料(砷含量分别为25、50、100 mg/kg),均喂养3个月。大鼠处死前,抽取外周静脉血2 ml,检测血清丙二醛(MDA)含量,铜锌超氧化物歧化酶(SOD1)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力;处死后,分离肝脏,检测肝脏二酯酰甘油(DAG)含量、PKCδ和Nrf2 mRNA和蛋白表达;采用Pearson相关分析方法,对蛋白表达进行相关性分析。结果大鼠血清MDA含量,SOD1、GPx活力组间比较差异有统计学意义(F=26.441、3.327、120.645,P均< 0.05),其中各染砷组血清MDA含量均高于对照组(P均< 0.05);SOD1、GPx活力均低于对照组(P均< 0.05)。大鼠肝组织DAG含量,Nrf2 mRNA表达组间比较差异有统计学意义(F=8.237、8.656,P均< 0.05),其中各染砷组肝组织DAG含量分别为(2.67 ± 0.25)、(2.36 ± 0.19)、(2.54 ± 0.22)、(2.69 ± 0.32)μg/L,均高于对照组[(2.05 ± 0.24)μg/L,P均< 0.05];各染砷组肝组织Nrf2 mRNA表达分别为1.16 ± 0.09、1.09 ± 0.12、1.14 ± 0.15、1.27 ± 0.16,均明显高于对照组(0.94 ± 0.08,P均< 0.05)。大鼠肝组织细胞膜和细胞质中磷酸化PKCδ(pPKCδ)蛋白表达组间比较差异有统计学意义(F=15.925、6.699,P均< 0.05),各染砷组肝组织细胞膜pPKCδ蛋白表达分别为0.49 ± 0.06、0.33 ± 0.05、0.37 ± 0.06、0.50 ± 0.08,除低砷组外均高于对照组(0.28 ± 0.04,P均< 0.05);各染砷组肝组织细胞质中pPKCδ蛋白表达分别为0.38 ± 0.06、0.31 ± 0.05、0.35 ± 0.05、0.36 ± 0.05,均高于对照组(0.24 ± 0.05,P均< 0.05)。大鼠肝组织细胞质及细胞核Nrf2、磷酸化Nrf2(pNrf2)蛋白表达组间比较差异有统计学意义(F=9.024、9.709、10.396、25.532,P均< 0.05),其中各染砷组肝组织细胞质Nrf2蛋白表达分别为0.76 ± 0.09、0.58 ± 0.07、0.64 ± 0.09、0.73 ± 0.07,除低砷组外均高于对照组(0.52 ± 0.08,P均< 0.05);pNrf2蛋白表达分别为0.50 ± 0.07、0.43 ± 0.06、0.48 ± 0.06、0.54 ± 0.07,均高于对照组(0.32 ± 0.06,P均< 0.05)。各染砷组肝组织细胞核中Nrf2蛋白表达分别为0.44 ± 0.07、0.41 ± 0.06、0.47 ± 0.06、0.54 ± 0.09,均高于对照组(0.30 ± 0.05,P均< 0.05);pNrf2蛋白表达分别为0.35 ± 0.04、0.29 ± 0.04、0.41 ± 0.05、0.43 ± 0.06,均高于对照组(0.20 ± 0.03,P均< 0.05)。相关性分析显示,DAG含量与肝细胞膜和细胞质pPKCδ蛋白表达均呈正相关(r=0.663、0.604,P均< 0.05);细胞膜pPKCδ蛋白表达与细胞质和细胞核pNrf2蛋白表达均呈正相关(r=0.642、0.670,P均<0.05)。结论砷可诱导氧化应激性肝损伤;同时,砷可上调Nrf2 mRNA表达和蛋白表达、增加pPKCδ蛋白表达和DAG含量,促进pPKCδ发生膜转位后活化,进而磷酸化Nrf2使其发生核转位激活,从而调节机体的氧化应激反应。