摘要：利用分子动力学模拟方法,研究了原核生物核糖体小亚基中的16SrRNA片段与氨基糖苷类抗生素巴龙霉素复合物结构的柔性.结果表明,16SrRNA片段中的1408位点的腺嘌呤(A)突变为鸟嘌呤(G),改变了与tRNA中反密码子环识别相关的2个腺嘌呤A1492和A1493的空间构象,阻碍了氨基糖苷类抗生素与核糖体的结合,从而影响原核生物蛋白转录过程.模拟结果与实验测定的晶体结构相吻合,可为基于核糖体16SrRNA的药物分子设计提供较可靠的结构信息.

摘要：目的　建立微小按蚊复合体不同亲缘种A和C的分子鉴别方法。方法　用单蚊蚊腿消化提取基因组DNA ,PCR特异扩增 2 8S第 3结构域 (D3 )基因 ,对PCR产物进行纯化、克隆、测序和序列分析 ;基于序列差异设计特异引物 ,进行等位基因特异扩增 (PCR -ASA) ,根据扩增片段大小区分微小按蚊不同亲缘种。结果　发现微小按蚊不同亲缘种A和C(GeneBank登录号 :AF416782 ,AF42 5 5 94) ,根据二者序列差异设计的特异引物能在普通琼脂糖凝胶上直观地区分两亲缘种 ,两者除在 3 76bp处有一共同条带外 ,分别在 2 94bp和 112bp处出现各自的特异扩增带。结论　我们建立的ASA分子鉴别方法能有效地将我国微小按蚊不同亲缘种A和C区分开来。

摘要：目的:从丝瓜籽中克隆核糖体失活蛋白luffin-a基因,并在原核系统进行表达。方法:根据已报道的cDNA序列设计引物,用RT-PCR的方法从成熟的丝瓜籽中克隆luffin-a基因,克隆后鉴定核苷酸序列。构建表达载体pET-28 a(+)-luffin-a,转化大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG诱导表达。利用金属离子亲和层析的方法纯化所得目的蛋白。结果:克隆的luffin-a基因及其所编码的氨基酸序列与国外报道的核苷酸序列及氨基酸序列同源性分别为95%和92%,因而所获得的luffin-a基因是丝瓜籽核糖体失活蛋白luffin-a一个新的cDNA序列。经SDS-PAGE分析:luffin-a主要存在于包涵体中。金属离子亲和层析可纯化目的蛋白。结论:本研究成功地克隆了luf-fin-a一个新的序列,并建立了该蛋白的原核表达系统,同时利用亲和层析可一步法纯化获得目的蛋白。

摘要：目的：建立鉴别中华按蚊和嗜人按蚊的ＰＣＲ检测技术，并对现场标本进行检测。方法：根据中华按蚊和嗜人按蚊的ｒＤＮＡＩＴＳ２序列差异，设计种特异引物，用ＰＣＲ技术扩增种特异ＤＮＡ片段（中华按蚊４２５ｂｐ，嗜人按蚊２５３ｂｐ），根据扩增片段的长度对两种按蚊进行鉴别。结果：应用该法检测中华按蚊和嗜人按蚊的３个实验室品系共７０例，经卵鉴定的嗜人按蚊野外标本２０例，均显示单一的种特异扩增带。凉山按蚊、贵阳按蚊和帕氏按蚊对照共９例全部无扩增。检测采自我国１０省１２个不同地点，根据成蚊形态初步鉴定为中华按蚊的标本共４４０例，具中华按蚊种特异扩增带的标本占６６．１％，具嗜人按蚊种特异扩增带的标本占１２．７％，其余２１．１％的标本无扩增带，表明检测样本中混有其他蚊种，仅根据成蚊形态难以鉴别。结论：本研究提供了一种简便、准确和灵敏的中华按蚊和嗜人按蚊的分子鉴别方法。

摘要：为了解核糖体大亚基蛋白RPL15在细胞中的定位和功能,设计并合成了RPL15蛋白的多肽,作用于抗原免疫兔子,使其产生特异性多克隆抗体,利用蛋白免疫印迹和免疫荧光方法检测RPL15抗体的特异性.结果证实本研究成功制备并纯化了RPL15的多克隆抗体,且该抗体可以特异性识别RPL15蛋白.免疫荧光实验表明RPL15定位于细胞质和细胞核中,主要定位于核仁并呈点状分布,且与UBF、FBL和C23存在部分共定位.

摘要：采用先进的CTAB法提取中科一号灵芝菌株的基因组DNA,经过LSD序列的扩增,引物设计,PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳检测后用试剂盒回收,转化大肠杆菌感受态细胞,获得正确的转化子后,测序,获得新的灵芝rDNA序列。

摘要：〔目的〕建立国境口岸不同蚊种的核糖体基因第2内转录间隔区(rDNA-ITS2)分子鉴定方法及其系统进化关系。〔方法〕针对蚊虫的rDNA核酸序列保守性,设计扩增rDNA-ITS2编码区的PCR引物,对广州机场、江门和湛江等国境口岸采集的致倦库蚊、三带喙库蚊、白纹伊蚊、中华按蚊、骚扰阿蚊等成蚊和实验室喂养的蚊幼虫进行PCR扩增和序列测定,并与GenBank中已知蚊虫的rDNA-ITS2进行同源性比较和系统进化分析。〔结果〕不同蚊虫的rDNA-ITS2扩增片断长度不同,M2引物对致倦库蚊、三带喙库蚊、白纹伊蚊、骚扰阿蚊和中华按蚊的扩增片断分别为447bp～520bp、432bp～438bp、527bp～586bp、439bp～448bp和644bp。序列分析和系统进化关系显示,尖音库蚊组和三带喙库蚊聚类为库蚊属,再与白纹伊蚊和骚扰阿蚊聚类为库蚊亚科,库蚊亚科再与中华按蚊进行聚类,分子进化与蚊虫形态学鉴定的亲缘关系保持一致。〔结论〕建立的rDNA-ITS2分子鉴别技术可成功地应用于国境口岸范围内成蚊和幼蚊的亚科、属和种的区分和确定系统发育关系。这可以弥补蚊虫形态特征信息量的不足等传统分类系统的缺点,对国境口岸范围外来的或新发现的蚊种的鉴别提供了分子水平的技术依据。

摘要：SIRT7是哺乳动物Sirtuins家族中的一员,定位于核仁,是一种高度特异性的H3K18Ac(组蛋白H3的乙酰化18位赖氨酸残基)去乙酰化酶。近年来的研究发现SIRT7可通过多种途径参与调控核糖体RNA转录、细胞代谢、细胞应激以及DNA损伤修复等生理过程。此外,SIRT7还与衰老、心脏疾病及脂肪肝等密切相关。特别是SIRT7在多种肿瘤如肝癌、胃癌、乳腺癌、膀胱癌、结直肠癌、胰腺癌和头颈鳞状细胞癌等发生发展中起着重要的调节作用。文中综述了SIRT7的细胞及分子生物学作用,并系统总结了其在人类疾病中的研究现状。

摘要：一系列高分辨率的核糖体及其30S、50S亚基的晶体结构揭示了这个极其复杂的蛋白质翻译机器的重要作用机理,对在分子水平上了解生命机体产生和形成的一个基本环节(蛋白质合成)具有重大意义,同时为新型抗生素的设计与研发开辟了新方向新途径,对人类健康与生命保障具有重要作用.

摘要：目的：构建携小鼠细胞表面活化蛋白CD69和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）在细胞内核糖体切入位点（IRES）的表达载体pLCK—CD69-IRES—EGFP，并基于此创建CD69转基因小鼠。方法：首先通过小鼠肺组织提取RNA，逆转录成为cDNA，经过PubMed搜索设计PCR引物，PCR法扩增mCD69片断，接着将该DNA片段经测序验证后接入pInsulater—LCK—IRES—EGFP质粒，构建pLCK—CD69-IRES—EGFP转基因载体；再将其转染到293T细胞中，通过荧光显微镜技术确定其在293T细胞中的表达状况；最后将载体显微注射入受精卵并移植入假孕母小鼠，出生小鼠取尾经PCR鉴定获得阳性首建鼠，并通过荧光显微镜和流式细胞术确定淋巴细胞上CD69的表达。结果：经酶切、DNA测序鉴定证实pLCK—CD69-IRES—EGFP表达载体构建成功；荧光倒置显微镜检查证实其在转染的293T细胞内的蛋白表达；小鼠取尾PCR鉴定明确CD69转基因小鼠创建成功；CD69转基因小鼠有外周血淋巴细胞的减少及静息状态下CD69的表达。结论：成功构建pLCK-CD69-IRES—EGFP表达载体及制备CD69转基因小鼠，为CD69在炎症性疾病中作用的整体模型研究奠定了基础。