摘要：以超声波为处理手段,以啤酒废弃酵母泥中的核糖核酸为研究对象,对比分析了超声料液比、超声功率、超声时间3种因素对超声波破壁释放啤酒废酵母细胞中核糖核酸的影响,并采用L9(34)正交实验对提取工艺进行优化设计。结果表明,超声波破壁释放啤酒废酵母细胞中核糖核酸最佳工艺条件为:料液比1∶50,超声功率500W,超声时间35min,在此工艺条件下核糖核酸的提取含量达1.62mg。

摘要：应用响应面法对啤酒酵母富集核糖核酸（RNA）的培养基进行优化。首先用Plackett—Burman法筛选出三个影响较大的重要因素，分别为：（NH4）2SO4、酵母膏、NaCl，然后进行最陡爬坡实验逼近最佳响应面区域，最后通过Box—Behnken设计，利用SAS软件进行回归分析，得到各因素的最佳添加量。在优化培养基条件下，啤酒酵母RNA含量由4．175％提高到7．618％，增加了82．5％。

摘要：７头带有瘤胃瘘管的生长阉牦牛，在两个试验中分别给予不同的日粮以研究其瘤胃细菌中核糖核酸（ＲＮＡ，下同）含量及ＲＮＡ与细菌总氮（ＢＮ，下同）的比值（ＲＮＡ／ＢＮ）和核糖核酸氮（ＲＮＡ—Ｎ，下同）与ＢＮ的比值（ＲＮＡ—Ｎ／ＢＮ）。试验Ⅰ的４头牛分两期分别喂给粗蛋白（ＣＰ）８％和１２％的等能（９６ＭＪＭＥ／ｋｇＤＭ）日粮；试验Ⅱ的３头牛通过３×３拉丁方设计喂给蛋白饲料为菜籽饼、豌豆和蚕豆，精粗比为７：３，５：５和３：７的等能（９６ＭＪＭＥ／ｋｇＤＭ）、等氮（ＣＰ为１２％）日粮。结果表明，日粮精粗比与蛋白来源对细菌中ＲＮＡ含量及ＲＮＡ／ＢＮ和ＲＮＡ－Ｎ／ＢＮ均无明显影响，而蛋白水平对其有显著影响。当日粮ＣＰ为８％时，瘤胃细菌中ＲＮＡ与ＣＰ含量及ＲＮＡ／ＢＮ与ＲＮＡ－Ｎ／ＢＮ分别为１６９％、２８８％、３７，０３３；当日粮ＣＰ为１２％时，则上述４项指标依次为９８５％、３７１％、１６９、０１５。

摘要：核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)疗法通过将外源RNA引入特定细胞来精准调控基因的表达,从而实现对疾病的干预。近年来,临床结果表明RNA疗法在基因调控和疾病预防上是一种十分有潜力的基因疗法。然而,RNA药物在递送过程中仍然面临如稳定性差、组织靶向性弱、免疫原性强等诸多问题,限制了RNA药物的进一步临床转化应用。本文总结了不同RNA药物的递送方式在临床前和临床实验中取得的最新研究进展,并讨论不同递送载体的应用前景和局限性,旨在为RNA药物递送方式的优化提供新的设计思路,促进RNA疗法的临床应用。

摘要：核酸(nucleic acids, NAs)是脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid, DNA)和核糖核酸(ribonucleic acid, RNA)的总称,它是许多核苷酸单体聚合成的生物大分子物质,在生命体的生长、发育和繁殖过程中起着至关重要的作用.随着荧光成像技术的发展,有机小分子荧光探针逐渐成为细胞、组织及活体内核酸识别以及可视化成像的有力工具.本文以识别核酸的有机小分子荧光探针的荧光母核为主线,对近年来(2000~2021)该类探针的研究进展进行了系统综述,并且对其设计思路、反应机理和生物应用进行了概括.最后,对未来有机小分子荧光探针识别核酸的研究领域进行了展望.

摘要：黑木耳Auricularia heimuer是我国主要栽培的食用菌之一,具有较高的经济价值和生态价值。本研究以黑木耳不同菌株(A14、A137和A12)和不同生育期的样品(菌丝体、原基和子实体)为实验材料,提取RNA,反转录成cDNA,在全基因组注释结果的基础上,选择12个候选内参基因(APRTase、β-TUB、RPL2、EF-1a、EF-2、PGI、PGM、H^+-ATPase、Tspd、TUB-1a、18S rRNA和28S rRNA)并设计跨内含子的引物,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术进行扩增,利用geNorm、NormFinder、BestKeeper和ΔCt算法以及综合评价软件RefFinder,筛选适宜的内参基因。结果表明18S rRNA、β-TUB、EF1-a和28S rRNA适宜作为不同菌株的内参基因,APRTase、18S rRNA和28S rRNA适宜作为不同生育期的内参基因。

摘要：目的建立一种能快速、敏感地检测戊型肝炎病毒(HEV)核酸的实时荧光聚合酶链反应法(Real-timeRT-PCR)。方法基于HEVORF3保守区序列,设计引物和探针,从22对引物和4条探针中进行筛选,并对选出的引物和探针的浓度、反应体系、反应条件、核酸抽提方法等进行优化。采用常规套式RT-PCR和本研究建立的实时荧光RT-PCR检测不同样品,比较两种方法的特异性和敏感性。结果优化出1对引物和探针的组合。优化的30μl反应体系中,上、下游引物浓度均为0.10mmol/L,探针浓度为0.20mmol/L,Taq酶的浓度为3U,AMV逆转录酶浓度为2U。优化的反应条件为:50℃30min;95℃3min;95℃10s,50℃30s,72℃60s,5个循环;95℃10s,57℃40s,40个循环。初步检测结果显示,该方法与常规套式RT-PCR特异性符合率为100%,两种方法检测HEV1型样品的敏感性均为104,检测人和猪的HEV4型样品时,实时荧光RT-PCR敏感性均为104,明显高于常规套式RT-PCR的103和102。结论所建立的检测HEV核酸的实时荧光聚合酶链反应法具有简便、快速、敏感性较高以及不易被污染等优点,具有一定的临床应用潜力。

摘要：目的 观察丙型肝炎病毒(HCV)RNA特异性脱氧核酶的体外剪切活性,探讨其用于抗病毒基因调控的可能性。 方法 以HCV 5’-非编码区及部分C区(5’-NCR-C)中两个具有5’…A ↓ U…3’特征的序列为靶位,以5’GGCTAGCTACAACGA3‘为活性中心,设计并合成两端经硫代修饰的脱氧核酶(TDRz),即TDRz-127和TDRz1。用Nar 1将质粒pHCV-neo完全线性化后,以之为模板体外转录获取HCV 5’-NCR-C;用碱性磷酸酶去除其5’端磷酸,再用T4聚核苷酸激酶和γ-32P-ATP进行5’端放射陛标记。在pH7.5、Mg2+10 mmol/L等条件下,将两种TDRz分别(5μmol/L)或共同(各2.5μmol/L)与底物RNA(200 nmol/L)混合,经变性、复性后于37℃孵育,分别于不同的时间点取出等份终止反应。以8％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影分离、显示剪切产物,在凝胶成像分析仪上分析各条带光密度值并计算剪切百分率。 结果 在所设常用反应条件下于37℃孵育15、30、45、60、75、90min后,TDRz-127的剪切百分率分别达8.3％、16.1％、24.3％、26.2％、29.4％和31.1％,TDRzl的剪切百分率分别达7.4％,13.0％、15.6％、18.7％、19.4％和20.3％,两者同时剪切时的百分率约15.1％、29.6％、37.8％、39.1％、41.5％、42.6％。结论 TDRz-127和TDRzl对HCV

摘要：突发新型冠状病毒肺炎(COVID-19)已蔓延至全球几乎所有国家,累计确诊病例已超过1亿例。这一全球大流行病尽管现阶段在我国多点散发,但已得到基本控制,由于不容乐观的全球疫情扩散,依然存在疫情反弹之巨大风险。在新冠疫苗实现大规模接种之前,COVID-19暴发有效预警机制依然是最需要的技术手段。鉴于感染者粪便/尿液中存在病毒粒子或遗传物质核糖核酸(RNA),荷兰学者提出了基于污水流行病学(WBE)监控SARS-CoV-2(诱发COVID-19的病毒)出现并传播的设想。目前,污水中SARS-CoV-2有限RNA检测研究结果已经证明了这一技术作为疫情预警的可行性,亦可能根据WBE检测结果表征病毒传播动态与趋势、估算感染群体比例,甚至在一定范围内进行感染群体追踪。在总结WBE技术在我国发展应用的基础上,对已有污水中SARS-CoV-2的核酸检测研究结果、应用价值和指导意义进行综合分析,总结WBE研究标准化方案,辨析亟需深入研究的方向领域。这对我国下一阶段疫情防控具有相当启发与参考价值。

摘要：目的建立 HGV RNA 逆转录套式聚合酶链反应法(RT-nPCR)并应用于我国不同人群 HGV 感染的检测。方法根据中国株 HGV 5′端非编码区序列设计引物,建立 HGV RNA RT-nPCR 法。结果检测3份 HGV RNA阳性血清,其最终阳性稀释度分别为10^(-4)、10^(-9)和10^(-9);检测50份 HGV RNA 阴性血清均为阴性。检测97份抗-HGV 阳性血清,其中 HGV RNA 检出率为65.97%。结论应用中国株 HGV 5′端非编码区序列设计引物,建立的 HGV RNART-nPCR 法灵敏度高,特异性好,可用于我国各类人群和各型肝炎患者 HGV RNA 的检测。